项目肌酸磷酸激酶同功酶（CK-MB）方法DGKC速率法目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3.试剂3.1试剂3.2校准血清3.3试剂、校准血清的稳定性4.仪器5.操作6.计算7.操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8.参考值9.临床意义附录A:参数1.检测原理试剂中加入抑制CK-M的抗体，它能完全抑制CK-M亚基的活性而不影响CK-B亚基的活性，所得结果乘以2即得CK-MB的活性。CK肌酸磷酸+ADP肌酸+ATPHKATP+葡萄糖葡萄糖-6-磷酸+ADPG6PDH葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+H++NADPH2．本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。静脉采血：除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2(1mg/mL)作为抗凝剂。2.4标本处理：血标本室温放置30min〜45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8C保存。3．试剂3.1试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司CK-MB试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：组成R1:R2=4:1混合后溶液的浓度咪唑缓冲液：100mmol/LPH=6.7醋酸镁10mmoll/LN-乙烯半胱氨酸(NAC)20mmol/LEDTA2mmol/LNADP2mmol/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）>1500U/L己糖激酶（HK）>2500U/L抑制CK-MM的人抗体>2000U/L葡萄糖20mmol/L肌酸磷酸30mmol/L二腺苷-5-磷酸10umol/LAMP5mmol/LADP2mmol/L3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的CKMB校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过
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的2SD范围，需要全点定标。3.3试剂、校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8°C至标签所示失效日期。18-22稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度高于0.5时，试剂按照失效处理。CKMB校准血清在2-8C储存至标签所示失效日期，复溶后-20C保存，可稳定一个月，只可冻融一次,避免反复冻融。参见校准血清说明
书
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。4．仪器KONELAB30型号仪器。性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。5．操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器
操作规程
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。6．计算△A/minxVtx1000CK-MB（U/L）==AA/minxFexVsxdVt反应液总体积（ml）；d1比色杯光径（cm）；1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；7．操作性能7.1精密度：批内CV<0.55%，批间CV<4.51%。7.2准确度：检测结果的相对不准确度<±10%。灵敏度：肌酸磷酸激酶同功酶浓度为：500U/L时，吸光度变化率△A34onmin为0.054〜0.066。可报告范围：血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为1000U/L。7.5特异性：测量值在给定值的90%-110％范围内。7.6干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8．参考值0〜24U/L9．临床意义肌酸激酶同工酶在诊断急性心肌梗塞时有特异性，结合心肌酶图谱，有助于心肌梗塞的诊断。在急性心肌梗塞胸痛发作后，血清CPK-MB上升，24小时达高峰，至48小时消失，若CPK—MB再度上升，提示有心肌梗塞复发。血清CK-MB测定的最重要意义在于诊断急性心肌梗塞。急性心肌梗塞胸痛发作后4〜6小时，病人血清CK-MB先于总活性开始升高，12〜36小时达峰值；多在72小时内恢复正常。其最高值达对照组4.9〜22倍以上。如果梗塞后3〜4天，CK-MB仍持续不降，
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明心肌梗塞仍在继续进行，如果已下降的CK-MB再次升高则提示原梗塞部位病变扩展或有新的梗塞病灶；如果胸痛患者在48小时内尚未出现CK-MB升高，或小于总活性的2%,即可排除急性心肌梗塞的诊断。临床上常以CK-MB超过CK总活性的3%（离子交换柱层析法）或10%（免疫抑制法）作为急性心肌梗塞的诊断依据。用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率的界限值，均不适用于14岁以下的儿童，因为婴幼儿和儿童的CK-MB均高于成人。各种类型的心脏手术后可引起血清CK-MB活性增强，在并发术间或术后心肌梗塞时升高更为显著。进行性肌营养不良病人血清CK-MB亦升高。附录A:参数
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