一项小鼠采血新技术——颌下静脉丛采血法

2008年 12月 第 l8卷 第 12期 中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE December，2008 Vo1．18 No．12 技术 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 $ 、 一 项小鼠采血新技术——颌下静脉丛采血法 余琛琳 ，赵 乐 ，汤 球 ，崔淑芳 (1．第二军医大学训练部实验动物中心，上海 200433；2．和记黄埔医药有限公司，上海 201203) 【摘要】 目的 介绍小鼠颌下静脉丛采血方法。方法 选用 2月龄昆明小鼠，固定小 鼠后，将采血注射针头 刺入颌下静脉丛血管取血。结果 单人操作约 1 min内可完成小鼠颌下静脉丛采血，采血量达到0．3～0．5 mL。结 论 此方法无需麻醉、创伤小、采血量大并可重复采血 ，是一种简便、安全、快速、采血量多的采血方法。 【关键词】 小鼠；静脉 ；采血 【中图分类号】R．33 【文献标识码】A 【文章编号】1671．7856(2008)12—0053—02 A New Method of Blood Collection from the Submandibular Vein Plexus in M ice YU Chen．1in ，ZHAO Le2 ， TANG Qiu ，CUI Shu．fang (1．Laboratory Animal Center，Training Department，The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China 2．Hutchison MediPharma Limited，Shanghai 201203，China) 【Abstract】 Objective To explore an impmved technique of blood collection in the mouse from the submandibular vein plexus．Methods Twenty 2-month old Kunming mice were used in this study．Th e mouse submandibular vein plexus was punctured with a syringe nee~e．Results A volume of 0．3—0．5 mL blood sample could be collected within one minute by a single experiment． Conclusion The described blood collection method is a simple， safe and rapid method to obtain a considerable amount of blood．It doesn’t require anesthesia，with mild injury，and can be repeated for several times，therefore， deserves to be widely applied in experimental studies． 【Key words】 Mouse；Submendibular vein plexus；Blood collection 在动物实验研究中，特别是生理学、药理学、药 物代谢动力学等研究中，经常要采集实验动物的血 液样本进行常规质量检测、细胞学实验或进行生理、 生化分析⋯。目前，小鼠常用的采血方法有眼眶后 静脉丛采血法、眼球摘除采血法 、心脏采血法、剪尾 采血法等 ，不同的采血方法适用于不同的实验用 途和所需血量 。本实验经过解剖 、观察小 鼠头部浅 层血管，发现其颌下部静脉血管丰富、位置浅表，尝 试并建立了小 鼠颌下静脉丛采血的新方法。该方法 无需麻醉、创伤小、采血量大并可重复采血，是一种 安全 、快速 、简便 、采血量多的采血方法。 1 材料和方法 1．1 材料 1．1．1 实验动物 ：2月龄昆明小鼠，雌雄各 10只，由 第二军医大学实验动物中心提供[合格证号：SCXK (沪)2007．0003]。 1．1．2 实验器材：灭菌 6号注射针头、酒精棉球、灭 [基金项目]第二军医大学 2007年度青年启动基金项 目(2007110102)。 [作者简介]余琛琳(1981一)，女，助教，硕士，研究方向：人类疾病动物模型。Email：yc10408@163．corn。 [通讯作者]崔淑芳(1969一)，女，副教授。Email：sfcui@snlnlU．edu．cn。 54 中国比较医学杂志2008年 l2月第 l8卷第 12期 Chin J Comp Med，December 2008，Vo1．18 ． No．12 菌离心管、灭菌干棉球、抗凝剂等。 1．2 方法 1．2．1 徒手固定法：将小鼠固定在左手中 (图 1)。 1．2．2 在小鼠头部下颌部准确把握颌下静脉丛血 管位置，如图2中箭头所指位置，血管位于下颌骨后 方咬肌边缘。酒精棉球擦拭采血部位消毒后，将灭 菌注射针头迅速刺入颌下静脉丛血管 (图 3)，血液 即流出 (图4)。采血结束，立即用灭菌干棉球压迫 止血。 1．2．3 将血液收集于灭菌离心管内，编号备用(图1 ～ 4见封三)。 2 结果 2．1 通过颌下静脉丛采血方法的应用，单人操作采 血 20次，每只小 鼠采血用时约为 30～59 S，平均每 次 (47±8)s内即可完成对一只小 鼠单次采血的整 个过程。操作熟练的实验人员 ，可以在更短时间内 完成采血过程。 2．2 使用颌下静脉丛采血法对雌雄各 10只小鼠进 行采血操作，每只小鼠采血量范围为0．3～0．5 mL， 每只小鼠平均采血量可达 (0．38±0．07)mL。 3 讨论 已有的众多采血方法各有其优缺点。例如，对 于体重为25 g左右的成年小鼠，眼眶后静脉丛采血 法采血量比较多，约为0．2～0．3 mL，并可重复采血， 但易损伤眼球；眼球摘除采血法采血量多，约为 0．3 ～ 0．4 mL，但不可重复采血，而且可致小鼠失明，易 感染 ，止血不严时还可致小鼠死亡 ，同时也不符合动 物福利基本原则 ；心脏采血法采血量可达 0．8 mL， 但由于小鼠个体小、心脏小、心脏搏动快，采血时位 置较难固定 ，因而操作难度系数大，需要麻醉，且 容易因操作问题导致动物死亡；剪尾采血法，虽可以 连续多次采血，但每次采血量极少，不到0．1 mL，不 适于需要较多血量的实验 。 颌下静脉丛采血法 主要有 以下几个方面的优 点：(1)采血操作方法简单，所需实验器械简易、普 遍；(2)XCS]'鼠损伤小，采血所需时间很短，尤其是操 作熟练实验人员，可很好的把握采血位置和深度，将 损伤降至最低。本实验中，采血操作结束后，未见小 鼠出现明显的行为异常和精神沉郁，均很快恢复活 跃的状态 ，而且所有实验小 鼠均正常存活；(3)血液 采集量大，成年小鼠单次血量可达 0．5 mL；(4)止血 速度快 ；(5)可多次重复采集血液样本 ，满足对血样 的不同需求。此采血方法尽量减轻了对实验动物的 伤害，在倡导实验动物福利方面有着积极的意义。 同时，单次 0．5 mL的采血量可以满足许多动物实验 对血液样品量的要求，如血红蛋白的测定、红细胞计 数、白细胞计数及自细胞分类计数、血液涂片、酶活 性微量分析、血液 DNA的提取等。 掌握好这项采血技术，我们认为以下几点值得 注意：(1)采集血液样品时，如果小 鼠头部和前肢摆 动，容易导致渗出的血样洒落，减少血液采集量。因 而在徒手固定小 鼠时 ，应确保其头部和前肢不能摆 动 ，以便更好的判断采血部位和进行血液采集 。(2) 采血用注射针头的大小、进针 的力度和深度要依照 小鼠体重而定，并且都需要经过多次的实验和训练 才能很好 的把握。一 般 25 g以 内小 鼠，可选 用 4 号、5号注射针头，进针深度以 1～2 lllln为宜；25 g 以上成年小鼠可选用 6号注射针头，进针深度以 3 ～ 4 mm为宜。(3)采血过程都要遵循无菌操作原 则，尤其是采血用注射针刺人之前，一定要用酒精棉 球擦拭采血部位，一方面是进行消毒，另一方面，由 于血液 由下颌部被毛处流出，有 可能粘连上 毛发污 染血液，而在操作时进行必要的消毒 措施 《全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观全国民用建筑工程设计技术措施》规划•建筑•景观软件质量保证措施下载工地伤害及预防措施下载关于贯彻落实的具体措施 ，就可以避 免上述情况发生，最大程度保证血液的质量。 参考文献 [1] 吕春燕，马跃荣．小鼠心脏穿刺采血并存活的几点注意事项 [J]．泸州医学院学报，2006，29(3)：206． [2] 吴晓晴，郝晨霞．160只小鼠心脏采血的操作体会[J]．实验 动物科学与管理，2004，21(1)：53—54． [3] 梁月琴，杨波．大鼠、小鼠给药及采血的几点体会[J] 山西 医科大学学报，2000，31(1)：92—93． [4] 宗阿南，邹悦 ，任萍萍．实验动物质量检测中不同采血方法 的比较[J]．中国比较医学杂志，2008，18(2)：74—75． [修回日期)2008—09．O1 余琛 琳 ，等 ： 一 项 小 鼠采血 新技术 一 颌 下 静脉丛 采血 法 (正 文 见 第 53 页 ) Y U C hen - lin ． eta1． A N ew M ethodofB lood C ollection 丘om the S ubm andibular V ein P lexus in the M ouse (F ulltexton page 53) 图 1 固定 小 鼠 F ig． 1 T o fix the m ouse 图 3 小 鼠颌 下 静 脉丛 采 血 法 注 射针 头 刺人 部位 F ig． 3 T o properly punch the m ouse subm andibular vein plexus w ith a syringe needle j i一 一 谚a 图 2 小 鼠颌 下 静 脉丛 血 管 F ig． 2 L ocation ofthe subm andibular vein plexus in a m ouse 图 4 小 鼠颌下 静 脉丛 采 血 法 采 集 血 液 F ig． 4 B lood collection 舶 m the subm andibular vein plexu s 何 根林 ． 车轮 虫干 银 染 色 方法 的 改进 H E G en — lin ． Im provem entofthe ‘ dry ’ silver staining m ethod ofT richodinids 图 1 原 显 影 液 的显 影 效果 F ig． 1 T he effects ofthe pastdeveloper， bar= 20Ixm (正 文 见 第 74 页 ) (F ulltexton page 74 ) 图 2 改 良显 影 液拟 P 一 212 的显 影 效 果 F ig．2 T he effects ofthe developer pseudo — P 一 212， bar= lO txm ?