【精品论文】八角茴香挥发油的提取与_环糊精包合研究

八角茴香挥发油的提取与β2环糊精包合研究 严建业 13 , 　王元清 23 , 　喻林华 2 , 　梁 　娟 2 (1. 湖南中医药大学 药学院 ,湖南 长沙 410208; 2. 中南林业科技大学 生命科学与技术学院 ,湖南 长沙 410004) 收稿日期 : 2009201217 作者简介 :严建业 (1975 - ) ,男 ,在读博士生 ,讲师 ,主要从事中药制剂的教学与研究。Tel: ( 0731) 88458231 E2mail: yanjianye201 @ 126. com 3 湖南中医药大学 2009级博士。 关键词 :八角茴香 ; 挥发油 ; 提取 ; 环糊精 ; 正交试验 中图分类号 : R284. 3　　　　　文献标识码 : B　　　　　文章编号 : 100121528 (2010) 0220316203 　　八角茴香为木兰科植物八角茴香 lllicium verum Hook. f. 的干燥成熟果实 ,主产于我国 ,为常用中药 ,具有温阳散寒、 理气止痛的功效 [ 1 ]。八角茴香油有广泛的药用和食用价值 , 其中挥发油具有抑菌作用 [ 2 ] ,但制备、储存时不稳定 ,容易挥 发损失。为了克服剂量不易控制、携带不便、稳定性差等缺 点 ,本文采用包合技术 [ 324 ] ,使用研磨法将其制成八角茴香油 β2环糊精包合物。 1　仪器与材料 　　MA110型电子分析天平 (上海市第二天平仪器厂 ) ; DZF 一 6050真空干燥箱 (上海市精宏实验设备厂 ) ;八角茴香药 材购自广西 ;β2环糊精 (长沙市华康淀粉厂 ) ,其余试剂均为 分析纯。 2　方法与结果 2. 1　挥发油的提取 2. 1. 1　单因素试验考察 2. 1. 1. 1　浸泡时间考察 　取八角茴香 20 g,共 4份 ,加 10 倍水量 ,室温下依次浸泡 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0 h,用水蒸气蒸馏 法蒸馏 6 h,以挥发油提取量 (mL )作为考察指标 ,结果见 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1。 表 1　 浸泡时间考察结果 浸泡时间 / h 0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 提取油 /mL 1. 55 1. 62 1. 63 1. 63 　　由上表可见 ,浸泡时间在 1 h以上 ,提取的油量基本稳 定 ,因而最佳浸泡时间定为 1. 0 h。 2. 1. 1. 2　加水倍量考察 　取八角茴香 20 g,共 4份 ,分别加 入 8倍、10倍、12倍、14倍水量 ,采用浸泡时间考察实验确定 的最佳浸泡时间 (室温下 ) ,提取蒸馏 6 h,记录挥发油提取 量 (mL) ,结果见表 2。 表 2　 加水倍量考察结果 加水倍量 /倍 8 10 12 14 提取油量 /mL 1. 58 1. 62 1. 60 1. 48 　　由上表可见 ,加 10倍量水时 ,挥发油提取量较大 ,因而 最佳加水倍量为 10倍。 2. 1. 1. 3　提取时间考察 　称取八角茴香 20 g一份 ,采用加 水倍量考察实验确定的最佳加水倍量 ,浸泡时间采用考察实 验中确定的最佳浸泡时间 (室温下 ) ,加热提取 ,记录不同时 间 4、5、6、7、8、9 h的挥发油提取量 (mL) ,结果见表 3。 表 3　 提取时间考察结果 提取时间 / h 4 5 6 7 8 9 提取油 /mL 1. 30 1. 46 1. 65 1. 67 1. 68 1. 68 　　由上表可见 ,当提取时间到达 6 h时 ,提取油量和 7、8、9 h提取的油量很接近 , 为节省能源 ,可将提取时间定为 6 h。 2. 1. 2　正交试验优选提取工艺条件 根据预试验及单因素考察结果 ,选择浸泡时间、加水量、 提取时间三项为考察因素 ,用 L9 (34 )进行正交试验。分别 称取 20 g八角茴香置于挥发油提取器中 ,以挥发油提取量 作为考察指标以筛选最佳提取工艺。因素水平见表 4,试验 设计及结果见表 5,方差分析见表 6。 表 4　 提取工艺优选因素水平表 因素 水平 浸泡时间 / h A 加水倍量 /倍 B 提取时间 / h C 1 0. 5 8 5 2 1. 0 10 6 3 1. 5 12 7 　　对表 5进行数据处理 ,由直观分析和方差分析可知 ,以 提取挥发油的量为评价指标 ,最佳提取工艺条件为 A2B2 C3 , 各因素的主次顺序为 C > B > A,但方差分析表明各因素对 挥发油提取的量均无显著影响 (见表 6)。基于以上分析 ,可 确定水蒸气蒸馏法提取八角茴香挥发油工艺的最佳条件为 A2B2 C3 ,即浸泡时间为 1 h,加水倍量为 10倍 ,提取时间为 7 h。此工艺条件与正交试验表 5中第 5号试验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 一致。 2. 2　挥发油的包合工艺 2. 2. 1　包合方法 取挥发油 1 mL,预先配成 50%的无水乙醇溶液 ,缓缓加 613 2010年 2月 第 32卷 　第 2期 中 成 药 Chinese Traditional PatentMedicine February 2010 Vol. 32　No. 2 入与挥发油成比例重量的β2CD中 ,加入适量的水 ,共同研 磨数分钟 ,放置 ,晾干后 ,加适量石油醚洗涤包合物 ,包合物 低温 (40 ℃)烘干 ,放置备用。 表 5　 提取工艺优选正交试验设计表及结果 因素 A B C D 试验结果 列号 1 2 3 4 挥发油量 /mL 1 1 1 1 1 1. 45 2 1 2 2 2 1. 60 3 1 3 3 3 1. 51 4 2 1 2 3 1. 52 5 2 2 3 1 1. 65 6 2 3 1 2 1. 50 7 3 1 3 2 1. 63 8 3 2 1 3 1. 47 9 3 3 2 1 1. 53 K1 4. 56 4. 6 4. 42 4. 63 K2 4. 67 4. 72 4. 65 4. 73 C = (∑Y) 2 /N K3 4. 63 4. 54 4. 79 4. 5 Q j = ( K1 ) 2 + ( K2 ) 2 + ( K3 ) 2 R 0. 11 0. 18 0. 37 0. 23 SSj =Q j/3 - C SSj 0. 002 067 0. 005 6 0. 023 267 0. 008 867 表 6　 提取工艺方差分析表 误差来源 自由度 方差 F值 P值 显著性 A 2 0. 001 033 0. 233 083 > 0. 05 无 B 2 0. 002 8 0. 631 579 > 0. 05 无 C 2 0. 011 633 2. 624 06 > 0. 05 无 误差 E 2 0. 004 433 　　F0. 05 (2, 2) = 19. 0　F0. 01 ( 2, 2) = 99. 0　P≤0. 05有显著性差 异 2. 2. 2　包合物收率、油转移率的测定 取干燥包合物适量 ,精密称定 ,置圆底烧瓶中 ,加适量蒸 馏水 ,按挥发油测定法提取挥发油 ,待提取液冷却后 ,用乙醚 萃取 3次 ,合并乙醚液 ,脱水 ,低温挥尽乙醚 ,用减重法称定 挥发油。按下式计算包合物收率和油转移率。 包合物收率 =包合物得量 ( g) / [挥发油重 ( g) +β2CD 重 ( g) ] ×100%。 挥发油转移率 = [包合后提取的挥发油量 (mL) /加入挥 发油的总量 (mL) ] ×100% 2. 2. 3　正交试验设计 根据文献与预实验 ,选择对实验结果影响较大的 3个因 素 :主客分子投料比、水与β2CD比例、研磨时间 ( h) ,每个因 素取 3个水平 ,采用 L9 (34 )正交实验表安排试验 ,见表 7、8。 表 7　 包合工艺优选因素水平表 因素 水平 β2环糊精 2油 ( g ∶mL) 　A 水与β2CD比例 B 研磨时间 / h C 1 4 ∶1 4 ∶1 1 2 6 ∶1 5 ∶1 2 3 8 ∶1 6 ∶1 3 　　将上述结果进行方差分析 ,见表 9、表 10。 　　对表 8进行数据处理 ,由直观分析的方差分析可知 ,以 包合物收率为评价指标 ,最佳包合工艺条件为 A3B1 C1 ,各因 素的主次顺序为 A > B > C,其中 A因素经方差分析表明对 包合物收率有显著影响 (见表 9)。而以挥发油油转移率为 评价指标 ,最佳包合工艺条件为 A3B1 C1 ,各因素的主次顺序 为 A > C >B,其中 A因素经方差分析表明对挥发油油转移 率有显著影响 (见表 10)。基于以上分析 ,可确定研磨法制 备八角茴香油β2CD包合物的最佳包合工艺条件为 A3B1 C1 , 即β2环糊精 2油 ( g ∶mL)为 8 ∶1,水与β2CD比例为 4 ∶1,研 磨时间为 1 h。 表 8　 包合工艺优选正交试验设计表及结果 因素 列号 A 1 B 2 C 3 D 4 试验结果 包合物收率 /% 油转移率 /% 1 1 1 1 1 80. 26 69. 2 2 1 2 2 2 77. 31 61. 5 3 1 3 3 3 78. 76 62. 8 4 2 1 2 3 82. 80 60. 4 5 2 2 3 1 83. 17 62. 1 6 2 3 1 2 81. 92 65. 7 7 3 1 3 2 85. 50 70. 2 8 3 2 1 3 85. 53 71. 6 9 3 3 2 1 83. 10 67. 9 包 合 物 收 率 K1 236. 33 248. 56 247. 71 246. 53 K2 247. 89 246. 01 243. 21 244. 73 C = (∑Y) 2 /N K3 254. 13 243. 78 247. 43 247. 09 Q j = ( K1 ) 2 + ( K2 ) 2 + ( K3 ) 2 R 17. 8 4. 78 4. 5 2. 36 SSj =Q j/3 - C SSj 54. 379 02 3. 813 756 4. 237 422 1. 013 689 油 转 移 率 K1 193. 5 199. 8 206. 5 199. 2 K2 188. 2 195. 2 189. 8 197. 4 C = (∑Y) 2 /N K3 209. 7 196. 4 195. 1 194. 8 Q j = ( K1 ) 2 + ( K2 ) 2 + ( K3 ) 2 R 21. 5 4. 6 16. 7 4. 4 SSj =Q j/3 - C SSj 2 128. 667 4. 666 67 24 50. 666 67 713 2010年 2月 第 32卷 　第 2期 中 成 药 Chinese Traditional PatentMedicine February 2010 Vol. 32　No. 2 表 9　 包合物收率方差分析表 误差来源 自由度 方差 F值 P值 显著性 A 2 27. 189 51 53. 644 69 < 0. 05 有 B 2 　1. 906 878 　3. 762 254 > 0. 05 无 C 2 　2. 118 711 　4. 180 2 > 0. 05 无 误差 E 2 　0. 506 844 　　F0. 05 (2, 2) = 19. 0　F0. 01 ( 2, 2) = 99. 0　P≤0. 05有显著性差 异。 表 10　 八角茴香油转移率方差分析表 误差来源 自由度 方差 F值 P值 显著性 A 2 41. 821 11 25. 639 65 < 0. 05 有 B 2 　1. 897 778 　1. 163 488 > 0. 05 无 C 2 24. 274 44 14. 882 15 > 0. 05 无 误差 E 2 　1. 631 111 　　F0. 05 (2, 2) = 19. 0　F0. 01 ( 2, 2) = 99. 0　P≤0. 05有显著性差 异。 2. 2. 4　验证实验 按最佳工艺条件 A3B1 C1 包合及提取 ,并计算油转移率 , 可知 3 次包合的包合物收率分别为 85. 81%、86. 02%、 85. 96% ,油转移率分别为 71. 8%、72. 0%、71. 9% ,且都高于 正交表中的包合物收率和油转移率的最大值 ,因此 ,确定最 佳包合工艺条件为 A3B1 C1 ,即β2环糊精 2油 ( g ∶mL)为 8 ∶1, 水与β2CD比例为 4 ∶1,研磨时间为 1 h。 3　小结与讨论 3. 1　通过单因素实验和正交实验得出八角茴香挥发油最佳 提取工艺条件为 :加 10倍量水浸泡 1 h,提取 7 h。 3. 2　通过正交实验得出挥发油β2环糊精包合最佳工艺条件 为 :称取β2环糊精 (β2环糊精与挥发油比例为 8 ∶1) ,加入 4 倍量水 ,研磨 1 h。此工艺得到了进一步的验证。 3. 3　通过β2环糊精包合技术 ,液态的八角茴香挥发油成为 稳定的固态化 ,从而提高了进一步制剂的稳定性。 参考文献 : [ 1 ]　中国药典 [ S]. 一部. 2005: 4. [ 2 ]　赵俊丽 ,骆志成 ,武三卯 ,等. 八角茴香挥发油抗念珠菌活性的 体外研究 [ J ]. 中华皮肤科杂志 , 2004, 37 (8) : 4752477. [ 3 ]　朱雪荣. 苍术挥发油的提取与β2环糊精包合研究 [ J ]. 中国药 师 , 2007, 10 (7) : 6462648. [ 4 ]　杨正腾. 八角茴香油的β2环糊精包合工艺研究 [ J ]. 广西中医 学院学报 , 2000, 17 (3) : 82283. RP2HPLC测定杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷的含量 赫锦锦 1 , 　杜红岩 2 , 　张保国 1 , 　李 　钦 13 , 　付建敏 2 , 　杜兰英 2 (1. 河南大学中药研究所 ,河南 开封 475004; 2. 中国林业科学研究院经济林研究开发中心 ,河南 郑州 450003) 收稿日期 : 2008212214 基金项目 :国家“十一五”科技支撑 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 项目 (2006BAD18B03) ;国家“948”项目 (200824266) ;国家林业局重点攻关项目 (2006261) 作者简介 :赫锦锦 (1984 - ) ,女 ,硕士研究生 ,研究方向 :中药质量评价与新药开发。3 通讯作者 : 李　钦 (1965 - ) ,男 ,教授 ,博士 ,硕士生导师 ,研究方向 :中药质量评价。Tel: (0378) 3880589 E2mai: liqin@ henu. edu. cn 关键词 : RP2HPLC法 ; 杜仲雄花茶 ; 桃叶珊瑚苷 ; 含量测定 中图分类号 : R284. 1　　　　　文献标识码 : B　　　　　文章编号 : 100121528 (2010) 0220318203 　　杜仲 ( Eucomm ia ulm oids O liv. )为杜仲科植物 ,全科一属 一种 ,是我国特产的名贵中药材。杜仲是雌雄异株植物 ,其 中雄株占 40% ～60% [ 1 ] ,雄花产量很高 ,研究表明 ,杜仲雄 花中的黄酮类化合物含量高于皮和叶 ,而且雄花中同样富含 绿原酸、桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸等活性物质 ,即富含与叶、 皮相类似的有效成分 [ 223 ]。研究证明桃叶珊瑚苷的苷元及其 多聚体具有抗菌作用 ,是一种抗菌素 [ 4 ]。目前对杜仲的研究 大都集中在皮、叶上 ,对雄花的报道较少。 以杜仲雄花为原料研制生产的杜仲雄花茶 ,形状与普通 茶叶十分相似 ,不需要和其它茶种配合 ,具有汤色黄绿透亮 , 滋味浓而爽口 ,香气独特而持久 ,回味甜的特点 ,已获得国家 发明专利 [ 5 ]。杜仲雄花茶营养成分丰富 ,富含氨基酸和多种 有益人体的矿质元素 [ 6 ] ,且有抗疲劳作用 [ 7 ]。充分利用杜 仲雄花资源 ,开拓了杜仲综合利用的新途径 ,并受到了国内 和日本、东南亚等国家和地区消费者的青睐。 目前桃叶珊瑚苷的测定方法主要有薄层色谱 2分光光度 法、硫酸铜 2分光光度法、对二甲氨基苯甲醛法、高效液相色 谱法等。薄层色谱 2分光光度法操作复杂、要求有较高的操 作水平 ,不同的人得出的结果往往不一样 [ 8 ] ;硫酸铜 2分光光 度法误差大 ,往往使测定结果偏小 [ 9 ] ;对二甲氨基苯甲醛法 简便易行 ,人为误差较小 ,但测定结果偏高 [ 10 ] ;高效液相色 谱法与其它方法比较 ,可以对样品中的每一成分进行精确测 定 [ 11 ] ,测定结果准确。本试验建立了高效液相色谱法测定 杜仲雄花茶中桃叶珊瑚苷含量的方法 ,以期为其质量控制提 813 2010年 2月 第 32卷 　第 2期 中 成 药 Chinese Traditional PatentMedicine February 2010 Vol. 32　No. 2