甲醛固定石蜡包埋肾组织做免疫荧光染色在病理诊断中的应用

� � � �� · ’肾脏病卫卫与 �庙床专是互 · 甲醛固定石蜡包埋肾组织做免疫荧光染色 在病理诊断中的应用 董鸿瑞 程虹 诺 贻璞 邹万忠 【摘要】 目的 探讨甲醛固定 、石蜡包埋的肾穿刺组织做免疫荧光染色的可行性 。 方法 选择 �� 例膜性肾病 、 �� 例 �� � 肾病及 �� 例狼疮肾炎患者的肾穿刺组织 。 对石蜡切片进行脱 腊 、修复抗原及直接免疫荧光染色 , 并将染色结果 卜�冰冻切片染色结果进行 比较 。 结果 在本 实验条件下 , 二甲苯浸泡 �� , �� � 、 胃蛋 白酶消化 �� � �� 为最适脱蜡及抗原修复条件 , 抗体稀 释至特异荧光强度足够及非特异荧光背底最弱为当 。 应用 上述条件对石蜡切片进行直接免疫 荧光染 色 , 其结果 与冰冻切片染色的诊断符合率达 ��� � , 而石蜡切片具有组织结构保存好 、 免疫沉积物清晰 、 易丁判断结果及免疫荧光淬灭时间长等优点 。 结论 石蜡切片免疫荧光染色 可作为冰冻切片免疫荧光染色的补充手段 , 它无需低温保存即能转运肾组织至肾脏病理诊断 设备及水平较好的医院做免疫荧光检查 , 于国内推广具有现实意义 。 【关键词】 活组织检查 � 甲醛 � 石蜡包埋 � 荧光免疫测定 � ����� � �� � � � � �� � �们� � � � � � � � � ! � � � ��� ��� � � � � �� � � � ��� ·� � � � � � � �� �� ��� � 一呱加� � �� 址�� � � �� ��� � �� 琳�� � �� �� �� � �� � � � � �� � � �刀� � � � � 一。�, �� � � � � �咯 �� � !∀少 � , �� � � �� 一 � �� �� �� � 乙� � �� 八称声�� ��盯 , �� ��� 一抑 , �� �� �油�明 � � �户‘�以 , � �以�鳍 ���� � 夕, �� �。 �� ! ��, �� �� �� �� 硫�� ’ �� �八� �� 一�� , 百阴�� �’’� �� �� 了明 � 迈��刀� � 从献 � ,�� � � 侃 【�加��� � �】 � �� � � �� � � � � � � � �� � � �卜、� �� � � �����一� � � �� �� � �、� �� � � �� �� � � � � �� �� �� � ���� �� �� �� � ��� 一�� � � � � � � � � ���� �� 一 � � �, � � � � � ��� ��� � 一�� � 一� � � 入�� ��� �� �� � �� �”� ���� 一 �� � � � � � � � � � � � � � � � � � �� �� �� , � �� ��� � � , , � � � � ��� � ��� 叮 �� � � ��� � 立、 、���� ��一���〕��� �一。一 � � � � �� � �� ��� , � � � � � � �� � � � ��� � � 、� �� �� �� � � !� � ����� ��� �� � � �� � �� � � � ����� ��一��� � ���艺� , ��� �� � � � � �� �� � � � � ����� � � �� ��� � �� � ��� � � �� ���� � �� � � � � � � ��� � � ��� � �� 一� ������ � � � �一。 , ��� � � � �罗n ,℃sto , : , 19 : n e t h o d s w i t h e n z y m e o r m i e ro w a v e , a n d t h e o p t i m a ] e o n e e n t r a t i o n s o f F I T C 一 e o nJ L一g a te d a :一ti b o 、lle s \v e l℃ in v e s ti g a te d . T h e n , t h e d i r e e t I F w a s p e rfo r n , e d o n t h e d e p a r affi n i z e d a n d a n t i g e r卜re sto re d se e tio n s (D A R S ) a n d e o m p a o d to th e d ire e t IF 0 0 sn a P 一腼zeo see之10 0 5 ( S F S ) . R es川ts l, 1 Lh i、 s t, , 、ly , t h e l , e s t d e P a r a n i n i z e d d u r a t i o n w i [ h d i m e 一h y lb e n ze n e w a s 3 O n , i n , a n d t h e l , e 、一 a rltig e n ro sto rin g nle th o d w as in e u b atio n w 止th p e p sin (0 .4 % , p H Z ) fo r 1 0 n , i n . Th e F I T C 一 e o o J 。, g a t e (】a。上i肠dies s奎, o , 苦ld b e d i lu [e d 10 s h o w th e s t ro n g e s t s P e e i五e fl uore see nee w i一h w e a k e st loa e k g ro 一rld o f r一。 ,一s P e e ifi e fl t一o r e s e e n e e . T h e e o in e id e n t r a t e o f im m u n o P a t h o lo g i e al d ia g n o s is w a 、 1 0 0 % b e t w e e l: 一h e I F o n th e D A R S a n d th e S FS . In ad d i之io n , t h e I F o n D A R S h a d 之h e fo l!o 、v i n g b e n e五rs : e a sio e ss 一。) z ljo lg e l℃s 一、l ts b e e a 、l s e o f it s b e t te r p re s e rv e d t is s u e s t r u c tu r e a n d c le a r e r I F a p p e a r a n e e ; a lo n g e r I F fa 。{i n g t i , z l e w 企lie h w ill b e p ro P itio u s to o b se rv e IF re su lts a n d ta k e p h o to g ra p h s .C o n e lus io ns T llo IF o r, D A R S s h o 1J l d b e e o m e a e o m p l e m e n t卿 meth odOf IF on SFS . Beeause the bother with long一 d i o t a l ,。e t ra n s p o r t o f fr o z e n t is s u e 15 a v ()id e d , i t w i l l b e v e w e o n v e n i e n t fo r t h e l o e a l h o s p i t a l s 一0 se , 、d th e r e n a l L i( , p s y t i 、s 一le to th e b ig n e p h ro lo g y e e n t e rs fo r I F e x a m 主‘za 足io n , w h l e h h a s a g 肥a tly z℃a ! 15 *i e s j g n ifi e a n o e i n th e e 一lr陀n t C h in a . 【K ey w ords】 B iopsies; Forn, a l d e h y o l e ; p a r a ffi , 1 e r , I l o e d i n g ; Fl u o r o i r n n 飞u n o a s s a y 现代肾组织病理检查均包括光学显微镜 、 免 作者单位 :100 029 北京 , 中日友好医院肾病中心 (董鸿瑞 、程 虹 、湛贻璞);北京大学医学院病理系(邹万忠) 通信作者:湛贻璞 , E m a i l : e h e n _ y 」p u嘶ed。、a sl .。‘, n l , e n 疫病理及 电子显微镜检查 , 而免疫病理检查常由 冰冻切 片免疫荧光染色或石蜡切片免疫组化染色 来完成l‘· ”。 冰冻切片免疫荧光检查具有敏感性 高 、 特异性强 、 操作简单 、 快速的优点!2· 3 , , 但是 需要昂贵的冷室切片机 , 基层医院难以 配备 , 故 只能转送肾穿刺组织至肾脏病理诊断设备及水平 较好的医院 , 但由于运送组织标本条件要求苛 刻 , 稍不慎温度过高抗原遭破坏即会导致假阴性 结果 。 石蜡切 片免疫组化染色虽能避免上述 缺 点 , 但是组织染色背底常较强 , 故判读结果易受人 为因素影响 , 减低了诊断准确性 。 因此 , 寻找一种能克服上面两种染色缺点的 方法很重要 。 传统观点认为免疫荧光染色不适用 于 甲醛固定的石蜡切片 , 因为甲醛固定能使蛋白 质交联 , 抗原决定簇被封闭[3] , 而且石蜡包埋后若 脱蜡不充分 , 切片将呈现非特异荧光 , 干扰检查 结果 。 但是 , 如能克服上述脱蜡不充分及抗原 被封闭的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 , 用甲醛固定的石蜡切片做免疫荧 光染色并非全无可能 。 本研究即对此作了探索 , 并已取得 良好结果 , 现报告如下 。 材料与方法 一 、 免疫荧光染色常规操作步骤 1.冰冻切片染色 :(l) 切片 :肾组织用冰冻切 片包埋剂 (OCT )包埋后 , 一 20 弋冷室切片机切 片 , 厚 5 卜m , 室温干燥 30 m in 备用 。 ( 2 ) 直接法免疫 荧光染色 : 直接滴加异硫氰酸荧光素 (FI TC )标记 抗体〔包括抗 xgA 、 I g G 、 I g M 、 C 3 、 C l q 及纤维蛋 白相关抗原 (FRA )的多克隆抗体 , 丹麦 D ak 。 公 司〕于切片上 , 湿盒内 37℃孵育 30 m in , 0 . 0 1 m o l / L 磷酸盐缓冲液 (PB S) 浸洗 10 m in , 用缓冲甘油封 片 , 进行荧光显微镜检查 。 2 . 石蜡切 片染色 : (l) 固定 : 10 % 中性 甲醛 缓冲液固定 12 h 以上 。 ( 2) 包埋 : 70 % 一 10 0 % 梯 度酒精脱水 , 每步 30 m in ; 二 甲苯透明 20 m in ; 60 ℃浸蜡 Z h 石蜡包埋 。 ( 3) 切片 : 先用 3 氨丙 基 一 3 一乙 氧基 甲硅烷 (A PE S) 对载玻 片行防脱片处 理 , 切 片厚 3 林m , 置 45 ℃水浴展 片 , 60 ℃烤箱 干燥 Z h , 室温下备用 。 ( 4) 脱蜡至水 : 二甲苯脱 蜡 , 2 0 0 % 一 8 0 % 梯度酒精至水 , 每步 l一2 m i n 。 ( 5 ) 修复抗原 : 详述见下文 。 ( 6) 直接法免疫荧光染 色 :方法同上 。 二 、石蜡切片最佳染色条件摸索 为寻获石蜡切片免疫荧光染色的最佳条件 , 我们对脱蜡时间 、 修复抗原方法及荧光抗体稀释 度进行了摸索 , 具体设计如下 。 1 . 脱蜡时间 : 用石蜡切片进行免疫荧光染色 前必须尽可能将组织中石蜡脱掉 , 故分别将切片 浸泡于二 甲苯中 10 m in 、 2 0 m i n 、 3 0 m i n 脱蜡 , 然后进行染色效果比较 。 2 . 抗原修复 : 由于用 10 % 中性甲醛缓冲液固 定 时组织中抗原成分已被封闭 , 故需进行抗原修 复 。 本研究试用 了微波炉加热 、 胃蛋白酶消化及 胰蛋 白酶消化法进行抗原修复 , 比较染色效果 。 具体抗原修复方法如下 : (l) 微波炉热修复法 : 将切片置 乙二胺四乙酸 (E DTA ) 抗原修复液内 (pH S.O ) , 微波炉热修复 (95℃ 一9 8 ℃ 10 m in ) , 室 温冷却 30 m in , 0 . 0 1 m o l / L P B S 浸洗 10 m in 。 ( 2 ) 胃蛋白酶修复法 : 滴加浓度为 0.4% 、 p H Z 的胃 蛋白酶 (美国 Zym ed ) , 置湿盒内 37 ℃恒温箱孵育 10 m i。 , 0 . 0 1 m o l z L P B s 浸洗 10 m in 。 当选定此法 进行抗原修复后 , 又检测过恒温箱内不同孵育时 间 (5 m in 、 1 0 m i n 、 2 0 m i n 、 4 0 m i n ) 的染色效果 。 ( 3) 胰蛋白酶修复法 : 滴加浓度为 0.075 % 、 p H 7 . 8 的胰蛋 白酶(北京中山公司 ) , 置湿盒内 37 ℃恒温 箱孵育 10 m in , 0 . 0 1 m o l z L P B s 洗 10 m in 。 3 . 抗体稀释度:FI TC 标记的抗 IgA 、 I g G 、 I g M 、 C 3 、 C l q 、 F R A 抗体被稀释成 l:20 、 l : 3 0 、 l : 4 0 、 1 : 50 不同浓度 , 进行染色比较效果 。 三 、 石蜡切片与冰冻切片免疫荧光染色结果 对比 随机选择我科肾穿刺活检标本 45 例 , 包括膜 性肾病 10 例 (其中乙型肝炎病毒相关膜性肾病 7 例) , I g A 肾病 25 例 , 狼疮肾炎 10 例 。 全部进行 IgA 、 x g G 、 I g M 、 C 3 、 C l q 、 F R A 的石蜡切片和冰 冻切 片染色 , 然后将两种切片染色结果进行双盲 分析 , 观察两者染色结果的一致率 , 比较两种切片 染色的荧光淬灭时间 (紫外光持续照射 , 于 x 400 高倍视野下观察 , 记录荧光从最强亮度淬灭至痕 迹量的时间 ) , 并摸索判读石蜡切片染色的注意事 项 。 结 果 一 、 石蜡切片最佳染色条件摸索 1.二甲苯脱蜡时间 :结果发现脱蜡时间 30 m in 时 , 背底中非特异性荧光着色最少 、 荧光强度与 同病例冰冻切片免疫荧光强度接近 , 见图 1 。 因 此 , 在以后应用石蜡切片做免疫荧光染色时 , 二 甲 苯脱蜡时间均被定为 30 m in 。 2 . 抗原修复方法 : 结果显示无抗原修复的石 蜡切片基本无特异荧光着色 。 胃蛋白酶修复抗原 效果最好 , 所测 6 项抗原荧光均阳性 , 且与相同 病例的冰冻切片荧光强度接近 , 微波炉热修复及 胰蛋白酶修复效果差 , 见图 2 。 胃蛋 白酶消化时 间以 10 m in 最佳 , 5 mi n 消化抗原暴露不够 , 荧光 弱于相同病例的冰冻切片着色 , 而 20 m in 及 40 m in 消化肾组织常被破坏 。 所以 , 在以后应用石蜡切 片做免疫荧光染色时 , 均用 胃蛋 白酶消化 10 m in 修复抗原 。 l : 4 0 、 I g M I : 3 0 、 C 3 1 : 2 0 、 C l q l : 2 0 、 F R A I : 4 0 为最佳稀释度 , 与冰冻切片染色比较仅 IgG 浓度 未变 , 其余浓度均增高 (冰冻切片上述抗体稀释度 分别为 l:40 , l : 4 0 , l : 4 0 , l : 3 0 , l : 6 0 及 1:60 )。抗体 浓度过高时 , 背景非特异性荧光着色会增强 , 而抗 体浓度过低时 , 特异性荧光着色强度不够 。 因此 , 在以后应用石蜡切片做免疫荧光染色时 , 荧光抗 体均应用上述稀释度 。 二 、石蜡切片免疫荧光染色结果 1.两种切片染色结果比较 : 就免疫沉积物分 布类型 〔沿毛细血管壁沉积或 (和) 于系膜区沉 积〕而言 , 两种切片染色结果毫无区别 ;就免疫沉 积物染色强度而言 , 两种切片结果有时略有差异 , 不过最主要的染色指标(如 IgA 肾病的 I叭 染色 , 膜性肾病的 IgG 染色 , 狼疮肾炎的“满堂亮 ”等)仍 完全一致 , 见 图 3 , 表 1。 两种切片染色结果的疾 病诊断符合率为 100 % 。 表 1 45 例肾活检组织石蜡与冰冻切片免疫荧光染色 阳性结果符合率 A :脱腊 10 m in :B :脱腊 20 m in ;C :脱腊 30 m in ;D :冰冻切 片 ;箭头示脱腊不净所致非特异荧光 图 l 二 甲苯脱腊时间长短对染片质量的影响 (坛A 免疫荧 光染色 x400 ) 病理类型 膜性 ’肾病 I幼 肾病 狼疮肾炎 例数 IgA I薛 IgM C3 Clq l0 25 90% 100 % 100% 100 % 96% 100 % 100 % 100 % 100 % 100 % 96% 100 % 90% 88% 90 % FRA 100 % 96% 90% A :冰冻切片 ; B :同一组织的石蜡切片 图 4 膜性肾病患者冰冻切片和石蜡切片免疫荧光 I薛 染 色图像 比较 (火 4 0() ) A :微波炉热修复 ;B :胃蛋白酶修复; C :胰蛋白酶修复;D : 冰冻切片 图 2 不同修复抗原方法对染片质量的影响 (I薛 免疫荧光 染色 x400 ) 3 . 荧光抗体稀释度 :结果显示不同抗体的最 佳稀释度不同 , 在本实验条件下 , I g A I : 30 、 I g G 此荧光不在系膜区及毛细血管壁 , 有时颜色较灰暗 图 5 石蜡切片的肾小球毛细血管腔内缘非特异荧光( xsoo ) 表 2 6 例肾活检组织石蜡与冰冻切片染色的荧光 淬灭时间比较(牙土 s , n l i n ) 组别 例数 lgA (荧光 4 + ) lgG (荧光 4 + ) C 3 (荧光 3+ ) 冰冻切片 石蜡切片 34.7士 3 . 1 4 3 . 7 士 5 , 7 2 7 . 3 士 8 . 7 1 06 . 7 土 1 1 . 6 3 0 . 0 士 5 . 0 4 2 . 0 士 1 3 . 1 光 , 此荧光常呈较大团块 , 无规律分布 , 颜色有时 偏黄而非亮绿 , 可资鉴别 , 见图 1。 ( 2) 肾小球毛 细 血管腔内缘有时也能非特异地 “挂 ”上荧光 , 可 能为滤过的血浆蛋白非特异性豁附引起 , 其并非 分布于系膜区或毛细血管壁 , 颜色有时较灰暗也 非亮绿 , 可资鉴别 , 见图 5 。 ( 3) 有时同一张切片上 不同肾小球的着色强度可有较大差异 , 此时应依 据多数肾小球着色情况进行判断 。 讨 论 x一 6 : I醉 、 I舀 、 I g M 、 e 3 、 C l q 、 F RA ; 左 :冰冻切片组 ; 右 :石蜡切片组;上 :膜性肾病;中:狼疮肾炎;下 :I幼 肾病 圈 3 冰冻切片和石蜡切片免疫荧光染色结果比较 不过 , 石蜡切片的补体 C3 染色强度常较冰冻 切片低 。 将本实验 45 例染色结果作一比较可见 , 两种切片染色强度一致者为 31 % , 石蜡切片弱 1一 3 个加号者分别为 32 % 、 33 % 及 4% 。 冰冻组织较松脆 , 切片较厚 , 有时组织结构 重叠较难准确判断免疫沉积物分布类型 ; 而石蜡 切片组织结构保存好 , 切片较薄 , 免疫沉积物形 态及分布清晰 , 故易准确判读结果 , 见图 4 。 这 是石蜡切片免疫荧光染色的一个优点 。 2 . 两种切片染色的荧光淬灭时间比较 :选择 IgA 肾病及膜性肾病各 3 例 , 前者观察两种切片 染色的 I泌 及 q 荧光淬灭时间 ;后者观察 IgG 荧 光淬灭时间 , 结果显示石蜡切片染色的荧光淬灭 时间较冰冻切片显著延长 , 见表 2 。 3 . 判读石蜡切片免疫荧光染色结果的注意事 项 : (l) 肾组织由于脱蜡未净可 出现非特异性荧 免疫病理检查包括免疫荧光检查及免疫组化 检查 , 两者各有优缺点 : 免疫荧光检查 由于荧光 与黑色背底反差鲜明 , 故判读结果容易且准确 , 但它只能应用于冰冻切片 ; 免疫组化检查可用石 蜡切片染色 , 凡能进行光镜检查的地方均能进行 此检查 , 但是组织上常有非特异性着色 , 准确判 读结果较难lzj 。 我们试用石 蜡切片做免疫荧光检 查 , 希望扬长避短 , 将两者优点发挥 、 缺点克服 。 欲成功地用石蜡切片进行免疫荧光染色 , 需 抓住如下 3个关键技术环节 : 脱蜡 、 修复抗原及 荧光抗体染色 。 我们摸索了二甲苯脱蜡最佳时 间 、 抗原修复最优方法及最适抗体稀释度 。 在进 行上述摸索时 , 均以特异性荧光着色强及非特异 性荧光着色少为追求 目标 , 如此选定了我实验室 最佳工作条件 。 由于各医院的组织固定液不尽相 同 , 实验方法不全一样 , 所用抗体来源各异 , 因 此摸索出的最佳工作条件未必完全适用于其它医 院 。 各医院在用石蜡切片做免疫荧光染色时 , 均可参照本文方法 , 寻获自己的最适工作条件 。 我们将石蜡切片与冰冻切片的免疫荧光染色 结果作了比较 , 发现两者免疫沉积物的分布类型 完全一致 , 染色强度两者虽有时略有差异 , 但并 未影响疾病诊断 , 两者疾病诊断符合率为 100 % 。 这与 Fog az zi 等l3]的报道相同 。 所以 , 我们认为本 研究的石蜡切片免疫荧光检查是成功的 , 而且与 冰冻切片比较 , 石蜡切片较薄 , 组织结构保存好 , 故免疫沉积物清晰 , 判断结果更准确‘4] 。 另外 , 我们与 Fo gaz zi 等‘3j研究结果一样 , 还 观察到石蜡 切片的荧光淬灭时间较冰冻切片显著延长 , 其原 因未明 , 但它将有利于病理医师阅片及摄像 。 在本研究染色条件下 , 补体 C3 的石蜡切片染 色强度常较冰冻切片弱 , 这在判断石蜡切片 C 3 染色结果时必需注意 。 Fo ga zzi 等I3J 也观察到类似 情况 。 我们 曾考虑这是否 与补体 C 3 耐热性差相 关 , 故将石蜡切片分别放置 37 ℃及 60 ℃烤箱中烘 片 , 然后染色 , 结果两者 C3 显色并无差异 (此结 果本文未显示 ) , 故此推断不能成立 。 这现象的 原因有待日后探讨 。 尽管本研究已用二 甲苯浸泡石蜡切片 30 m in 脱蜡 , 但是组织中仍残留少许石蜡成份 , 造成非 特异荧光 , 这可能由于滤过 的血浆蛋白非特异赫 附 。 肾小球毛细 血管腔内缘有时也能见到荧光显 色 , 但是正如前文所叙 , 这些荧光的分布 、 形态 及颜色均与特异性荧光着色不 同 , 鉴别不难 。 Fo ga zzi 等l3]认为组织内存留的血浆蛋白呈 现非特 异荧光可能与甲醛固定及酶消化相关 。 另外 , 有 时同张切片上不同肾小球的荧光着色强度可有较 大差异 , 这可能与组织加工 (组织固定 、 抗原修 复等)时条件不匀相关 。 遇此情况 , 我们认为应以 多数肾小球着色情况来做判断 。 我们现在 已将石蜡切片免疫荧光染色应用于 患者肾穿刺病理检查 , 据我们体会 , 在如下情况应 用此检查尤有意义 : (l) 肾穿刺取材不满意 , 冰冻 组织切片无肾小球 , 或仅有硬化肾小球 , 无法准 确判断免疫荧光结果时 , 做石蜡切片免疫荧光检 查可获结果阎 。 ( 2) 冰冻组织松脆致切片过厚 , 组 织结构重叠 , 难以准确判断免疫沉积物分布类型 时 , 做石蜡切片免疫荧光检查可获清晰图像 。 ( 3) 新 开展免疫荧光检查的医疗单位 , 可利用保存的肾组 织蜡块做切片免疫荧光检查 , 进行回顾性免疫病理 研究l3] 。 ( 4) 最重要的是 , 为基层医院远程转送肾穿 刺组织提供了方便条件 , 组织不再需要低温转运 , 用 10 % 中性甲醛缓冲液固定后常温寄送即可 。 所 以 , 我们认为石蜡切片免疫荧光检查作为冰冻切片 免疫荧光染色的一个补充手段应予推广 。 西方国家研究石蜡切片免疫荧光染色的高潮 在上世纪 80 年代‘3, 4, , 现在由于他们能进行肾活 检组 织病理及免疫病理检查的 医疗单位 已较普 及 , 以及他们应用干冰制冷异戊烷保存法l2] 运送 肾活检组织十分方便 , 故石蜡切片免疫荧光染色 的重要性现已明显减弱 。 可是中国情况与他们不 同 , 近年我 国能开展肾穿刺活检的医疗单位已越 来越多[6] , 而肾组织病理及免疫病理检查却明显 滞后 , 许多能做肾穿刺的医院必需将肾组织转送 至肾活检病理诊断设备及水平较好的医院进行检 查 , 所以常温寄送标本做石蜡切片免疫荧光检查 在我 国具有极大现实意义 。 国内这方面 的报道较 少 , 也较简单l5] , 因此我们愿将 自己工作做一介 绍 , 与同道共勉 。 参 考 文 献 邹万忠 , 主编. 肾活检病理诊断图鉴.北京:人民卫生出版 社 , 2 0 以)一6 一 2 4 . 邹万忠 肾脏病理学检查.见 :王海燕 , 主编.肾脏病学.第 2 版.北京 :人民卫生出版社 , 1 9 % . 4 2 4 一 4 3 6. F o , 221 GB , B aj e t ta M , B a 浦 G , e t al . C o m p 面son of im m unofluore seent fin dings in kidn ey aft er , n a P 一fre e z i n g an d fo rtn al i n fi x a t i o n . P at h o l R e s P r a e t , 1 9 8 9 , 1 8 5 : 2 2 5 一 2 3 0 . B Ol t o n W K , M e s n ard R M . N ew t e e h ni q u e Of k i d n e y t i s s u e P ro e e s s i n g fo r i m m u n o fl u o re s e e n e e m i c m s e o p y : fo rm o l s u e ro s e / , m suero se/ par 川叽n . 肠b Invest, 1 9 8 2 , 4 7 ; 2 伪一 2 1 3 . 师锁柱 , 陈香美 , 尹忠 , 等 .微波石蜡切片免疫荧光染色在 肾活检病理诊断中的应用 .中华肾脏病杂志 , 2 00 3 , 19 :3 64 . 中华医学会肾脏病学分会.全国肾脏内科及肾科医务人员 登记报告.中华肾脏病杂志 , 2 00 1 . 17 : 7 2 一 7 6. ( 收稿日期 :2(X) 5一 04 一以) (本文编辑:孙玉玲) 爱尔血液灌流学术研讨会暨第九届全国学 习班通知 爱尔血液灌流学术研讨会暨学习班在天津 、江苏 、湖南等地已成功举办了八届 ,学员反映良好 。 为进一步提高血液灌 流整体水平 , 我厂将于 2005 年 9 月 23 日一 9 月 28 日与清华大学第一附属医院在北京联合举办第九届全国学习班 , 届时 将邀请郑法雷 、王质刚 、段钟平等京 、津著名血液净化专家进行讲座与学术研讨 。 主要研讨 内容是血液灌流领域内的理 论 、技术与实践 。 学习期间以理论与实践相结合 ,安排见习 ,并可获得中华医学会 I 类继续医学教育学分 5 分 。 会议期间 :2005 年 9 月 23 日(全天报到)一 9 月 28 日(撤离)。 报名截止 日期:200 5 年 9 月 10 日。 会议地点 :北京普天 宾馆(北京市朝阳区将台路 2 号)。 会务费:600 元 (含资料费、学分证费) ,学员食宿统一安排 , 费用自理 。 联系地址 :河北廊坊市建国道 155 号 邮编:065000 。联系人:徐飞 , 手机:13052070760 电话 、传真:(03 16 )2021一 3- 63 04