实验四、普通光学显微镜的使用及微生物的简单染色实验目的：1.学习普通光学显微镜的构造和功能；2.学习微生物的简单染色，观察细菌的形态。实验
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：显微镜载玻片香柏油擦镜纸双层瓶染色剂滴管菌液普通光学显微镜的构造及原理光学部分镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、调节器等光源、物镜、目镜、聚光器及虹彩光圈等机械部分普通光学显微镜为光学部分目镜物镜调焦螺旋推进器调光螺旋电源开关聚光器和虹彩光圈载物台光源物镜放大倍数：4×:低倍10×:低倍40×:高倍100×:油镜目镜放大倍数：10×15×物镜转换器显微镜放大倍数目镜放大倍数物镜放大倍数＝×显微镜使用总原则：先低倍后高倍先粗调后微调放大倍数：10×15×放大倍数：4×:低倍10×:低倍40×:高倍100×:油镜油镜的使用原理透镜光线加油前玻片光线香柏油或液体石蜡加油后透镜玻片四、油镜的原理：放大倍数可100倍之大，焦距很短，光强度最大。油=1.52（香柏油）介质折射率水=1.33空气=1玻璃=1.55香柏油对光的折射率与玻璃相似，光线直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不但增加了照明度，而且使油镜的数值孔径增加，用NA表示，一般在1.2—1.4。低高倍镜头等干镜NA都低于1.0。若以可见光的平均波长为0.55μm来计算，数值孔径通常在0.65的高倍镜只能分辨出距离不小于0.4μm的物体而油镜的分辨率却可达到0.2μm左右。可见显微镜的放大效能是由数值孔径决定的。分辨率（最大可分辨距离）=/2NA显微镜使用的主要步骤： 取镜→检查对光→夹片→低倍物镜→调光、调焦→找目标，移中央→换高倍→找目标→教师评分→清洁→还镜。显微镜用毕后的处理拔掉电源插头下降载物台取干净擦镜纸拭去镜头上的香柏油取干净擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹取干净擦镜纸擦去残留的二甲苯将显微镜的各部位还原，物镜转成“八”字形，擦干净镜体，罩上防尘罩。实验任务：1、每个同学自己动手单染三张片子进行观察。其中老师检查一片。返回实验步骤1、涂片左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜;从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于预先滴有的一滴自来水地玻片上;2、干燥在空气中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行).3、热固定用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜.4、染色在固定好的菌膜上滴加美兰染色剂，染色剂量以刚好盖住菌膜为宜，染色1min.5、水洗倒去染液，用自来水沿玻片一端冲洗，直至流下的水无色为止。6、干燥用吸水纸吸干7、镜检七、实验报告要求：1、根据观察的球，杆菌的观察实况画示意图，各一图。2、用油镜观察时，为什么要求载玻片上加香柏油？3、思考题(4)影响显微镜分辨率的因素有哪些？※每个同学将自己制片的观察结果，报告老师，经检查合格登记，在课堂
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册上。八、下次实验：微生物的革兰氏染色®请大家做好预习。
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