实训五酵母菌细胞数量、大小的测定一、实验目的1、学习利用血球计数板直接计数微生物细胞的方法2、学习测定微生物细胞大小的方法二、实验材料1、菌种：酿酒酵母培养液2、器材：血球计数板、目镜测微尺三、实验原理及结果记录1、显微直接计数法（血球计数板）血球计数扳的构造a.平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网)b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)0.1毫米血球计数板计数网的分区和分格4X51mm/20格1/400mm25X4如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。可拍照后从图片上计数。小格中格如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。可拍照后从图片上计数。小格中格每个大方格均被分成400个小方格；根据规定每个大方格的边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，在盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3（万分之一毫升）。1mm/20格5X4A
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示五个中方格的总菌数；B表示菌液的稀释倍数。各中格中的菌数AB菌数/ml二室平均数12345第一室第二室1、用血球计数板进行酵母菌液计数并记录结果。1ml菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50,000A×B一般在每个计数室中取5个中方格(左上、左下、右上、右下、中间）进行计数，数两个计数室。可拍照后在电脑上数。1ml=1立方厘米2、测微尺的构造及测定原理目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央刻有精确等分的刻度。测量时，将其放在接目镜中的隔板上来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，是专门用来校正目镜测微尺的。当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。也可用血球计数板来进行标定，血球计数板每个小方格的边长为50μm。目镜测微尺的标定：用低倍镜观察，当看到血球计数板的小方格后，转动目镜，使目镜测微尺与小方格平行，移动推动器，寻找两条完全重合的刻度线，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和小方格的格数。因为小方格每格长50μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。两重合线间计数室小方格数×50目镜测微尺每格长度（μm）=两重合线间目镜测微尺格数1、记录目镜测微尺的标定结果，以及所测量的酵母细胞大小。目尺格数=1cm=100格物镜目尺格数小方格数目尺校正值（μm）4×10×显微镜下对应的测微尺格数12345678910平均值（μm）长宽（一）血球计数板计数1、检查血球计数板2、菌悬液加样（先盖盖玻片）3、显微镜下计数并记录4、清洗血球计数板（用水冲洗，不要用硬物或刷子去刷）四、实验方法（二）酵母细胞大小的测定1、利用血球计数板在中、高倍镜下（10×、40×）标定目镜测微尺。2、取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。3、移去血球计数板，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的长和宽。选取10个不同大小酵母细胞进行大小测定并记录结果（观察到的是平均大小）。1、记录目镜测微尺的标定结果，以及所测量的酵母细胞大小。物镜目尺格数小方格数目尺校正值（μm）4×40202510×100201040×10052.5显微镜下对应的测微尺格数12345678910平均值（μm）长宽
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