第1部分 专题5 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段

第1部分专 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 5课题2理解 教材 民兵爆破地雷教材pdf初中剪纸校本课程教材衍纸校本课程教材排球校本教材中国舞蹈家协会第四版四级教材 新知把握热点考向应用创新演练知识点一知识点二考向一考向二1.DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链。2．DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。3．PCR反应需要DNA 模板 个人简介word模板免费下载关于员工迟到处罚通告模板康奈尔office模板下载康奈尔 笔记本 模板 下载软件方案模板免费下载 、引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶等条件。4．PCR原理：DNA热变性的原理。5．PCR每次循环都包括变性、复性和延伸三步。6．PCR扩增DNA片段可以使目的片段呈指数增长。[自读教材·夯基础]1．细胞内DNA复制的条件原料4种模板2条DNA母链酶和引物使DNA聚合酶能够从引物的开始连接脱氧核苷酸脱氧核苷酸解旋酶DNA聚合酶3′端2．PCR扩增的原理及条件(1)PCR技术：即，是一种迅速扩增的技术。它能以极少量的为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。(2)扩增方向：总是从子链的端向端延伸。多聚酶链式反应体外DNA片段DNA5′3′(3)引物：①特点：是一小段或，能与的一段碱基序列互补配对，用于PCR的引物长度通常为个核苷酸。②需要引物的原因：DNA聚合酶不能，而只能从延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。DNARNADNA母链20～30从头合成DNA3′端DNA的热变性DNA两条模板链脱氧核苷酸耐高温的缓冲溶液自动调控温度3．PCR的反应过程(1)：温度上升到90℃以上时，双链DNA解旋为　　　单链 (2)：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补　　　配对与两条单链DNA结合 (3)：温度上升到72℃左右时，在酶的作　　　用下，四种脱氧核苷酸通过碱基互补配对合　　　成新DNA链变性复性延伸DNA聚合1．DNA复制时为什么需要引物？提示：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。2．PCR扩增DNA过程中是否还需要解旋酶？提示：不需要。3．利用PCR技术扩增1个DNA分子n次，所得DNA分子中，不含引物的脱氧核苷酸链所占的比例是多少？含引物的DNA分子所占的比例是多少？提示：1/2n；100%。[跟随名师·解疑难]1．细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较细胞内DNA复制PCR不同点解旋解旋酶，边解旋边复制80℃～100℃高温解旋，双链完全分开酶DNA解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA或RNA温度体内温和条件高温子链合成一条链连续(先导链)，另一条链不连续，先合成片段，再由DNA连接酶连结(滞后链)两条子链均连续合成相同点①提供DNA模板②四种脱氧核苷酸作原料③子链延伸的方向都是从5′端到3′端2．PCR反应过程(1)变性：当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链，如图：(2)复性：系统温度下降至50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：(3)延伸：当系统温度上升至72℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、G、C)在DNA聚合酶的作用下，据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图：[特别提醒]PCR反应的结果①PCR一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、复性、延伸三步。②两引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。[自读教材·夯基础]微量移液器1．实验操作程序准备：按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放　于实验桌上移液：用按照配方在微量离心管中依次加入各组分混合：盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁：将微量离心管放在离心机上，离心约10s。目的是使反应液集中在 反应：将离心管放入中，设置程序进行反应离心管底部PCR仪2．DNA含量的测定(1)原理：利用DNA在的紫外线波段的吸收峰曲线来测定相应含量。(2)计算公式：DNA含量(μg/mL)＝50×(260nm的读数)×稀释倍数。260nm离心[跟随名师·解疑难]1．实验操作注意事项(1)为避免外源DNA等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行高压灭菌。(2)所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20℃储存。(3)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。所有成分都加入后，通过手指轻轻弹击管的侧壁，使反应液混合均匀。2．结果分析与 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测量，以判断DNA片段的扩增是否成功。具体方法如下：(1)稀释：取2μLPCR反应液，加入98μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释。(2)对照调零：以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。(3)测定：取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值。(4)计算：检测DNA片段的扩增情况，可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果，计算公式为：DNA含量(μg/mL)＝50×(260nm的读数)×稀释倍数。如果扩增不成功，则要分析失败原因。可能的原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。[特别提醒]　公式中的50代 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 在波长260nm紫外波段照射下，吸收峰为1时，DNA含量为50μg/mL。[例1]多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下变性(使模板DNA解旋)→55℃下复性(引物与DNA模板链结合)→72℃下延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是(　　)A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的C．延伸过程中需要DNA聚合酶和四种核糖核苷酸D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高[解析]　变性是为了使DNA内部的氢键断裂，双螺旋打开，体内复制时借助解旋酶来实现；借助碱基互补配对原则，引物可与DNA模板链结合；延伸时是形成新的DNA分子，需要以脱氧核苷酸为原料；PCR过程的温度高，会导致一般的DNA聚合酶失活，需特定的耐高温DNA聚合酶。[答案]　C(1)DNA母链的3′端对应着子链的5′端，即DNA的两条链是反向平行的。(2)解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开，而DNA聚合酶与DNA连接酶都是催化形成磷酸二酯键的。(3)DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的单链片段的3′端上，需要模板；而DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口，不需要模板。[例2]在遗传病及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题：a链5′－G－G……T－C－3′　5′－G－G－OH(引物Ⅰ) b链3′－C－C……A－G－5′(引物Ⅱ)　　　　　　　　　　95℃5′－G－G……T－C－3′　3′－C－C……A－G－5′　　　　　　　　　　55℃5′－G－G……T－C－3′　3′－C－C……A－G－5′　　　　　　　　72℃5′－G－G－OH　　　________________　________________(1)在相应的横线上写出引物Ⅱ，并在复性这一步骤中将引物Ⅱ置于合适的位置。(2)在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。(3)若将作为原料的四种脱氧核苷酸用32P标记，请分析循环一次后生成的DNA分子的特点是________；循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为________。[解析]　(1)DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，引物就提供了3′端。子链延伸方向为5′→3′，引物Ⅰ与b链部分碱基互补，引物Ⅱ则与a链部分碱基互补，且连接到a链的3′端，故引物Ⅱ的结构为5′－G－A－OH，复性结果为：　　　HO－A－G－5′5′－G－G……T－C－3′。(2)经过一次循环后，产生的两个DNA分子分别含有引物Ⅰ和引物Ⅱ。(3)由于作为原料的四种脱氧核苷酸被32P标记，所以新合成的子链均含有放射性，一次循环后的两个DNA各有一条链含32P，若复制n次，产生子链共2n×2，其中只有亲本的两条母链不含32P，则其所占比例为2/(2n·2)＝1/2n。[答案]　(1)5′－G－A－OH　　　　a链5′－G－G……T－C－3′　　　　　　HO－A－G－5′(2)5′－G－G……T－C－3′　3′－C－C……A－G－5′　3′－C－C……A－G－5′　5′－G－G……T－C－3′(3)每个DNA分子各有一条链含32P标记　1/2n理论上DNA扩增呈指数增长。若只有一个DNA分子作模板，则复制n次后有2n个DNA分子；若一开始有m个DNA分子作模板，则复制n次后有m×2n个DNA分子；实际操作过程中由于无关变量的影响，一般来说实际值要略小于理论值。点击进入