茶叶提取茶多酚综合实验一、实验目的1）熟悉酒石酸亚铁法测定茶多酚含量；2）掌握天然植物中提取活性物质的实验
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设计及操作方法；3）熟练掌握各种实验操作的正确方法；4）熟悉数据处理及科技论文的写作方法。二、实验原理茶多酚是一类以儿茶素类为主体的多酚类化合物，由于其酚性羟基易氧化而提供质子H＋，而具有抗氧化和消除自由基作用，是一种理想的天然抗氧化剂。含醇羟基的有机溶剂对植物多酚具有良好的溶解性，而含水的有机溶剂对多酚的溶解能力比纯有机溶剂大，这是因为含水有机溶剂可破坏多酚分子间的氢键从而减弱了多酚间的缔合，有利于多酚的溶出。二、试验仪器及药品BS210S电子分析天平 722分光光度仪 KQ-5200超声波振荡器RE-52D旋转蒸发器 粉碎机试验原料：苏州碧螺春绿茶（2008年春制取，冰箱保存）........三、试剂与溶液配制1.标准溶液的配制：精确称取没食子酸乙酯（100℃烘干燥1h）25mg，水溶解，定容至25mL容量瓶中，作为标准溶液。2．酒石酸铁溶液称取硫酸亚铁（GB664）1.0g，酒石酸钾钠（GB1288）5.0g，加水溶解并定容至1L，可稳定10天。3．pH7.5的磷酸缓冲液a液：1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠（GB1263）23.877g，加水溶解并稀释至1L。b液：1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾（GB1274）2.2695g，加水溶解至250mL。c液：.取a液85mL和b液15mL混匀，即得pH7.5的缓冲液。四、试验方法（一）分析方法多酚类物质能与亚铁离子生成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。虽然各种儿茶素的呈色度不同，但茶多酚中的儿茶素组成范围大致相同，在此范围内，对吸光度的影响不大，故用一条标准曲线即可。此标准曲线与没食子儿茶素没食子酸酯的标准曲线一致，但因没食子儿茶素没食子酸酯不易得到，故用没食子酸乙酯。因10mg没食子酸乙酯的吸光度与15mg没食子儿茶素没食子酸酯的吸光度相等，故规定从没食子酸乙酯的标准曲线得到的量乘以1.5作为茶多酚的换算系数。1）标准曲线的制作：分别取1mg/mL没食子酸丙酯标准液GE0.00，0.25，0.50，0.75，1.00，1.25mL于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水，再加入酒石酸亚铁溶液5mL，用pH7.5的磷酸缓冲液冲稀至刻度，摇匀。722可见分光光度计在540nm处以试剂空白为对照，测量吸光度。回归标准曲线方程c=k·Ab2）供试液的制备准确称取茶树花粉碎样品2g，在60%乙醇40mL，60℃温度，浸提时间20min下，超声波辅助提取，然后过滤，最后用蒸馏水定容至100mL摇匀，即为供试液。3）样品的测定吸取1mL供试液放入25mL的容量瓶中，加入4mL蒸馏水，5.0mL的酒石酸亚铁溶液。摇匀。用pH7.5磷酸缓冲液稀释至刻度，摇匀。按实验方法测定吸光度，算出没食子酸丙酯含量。（二）实验步骤1.不同浓度乙醇水溶液对提取效果的影响精确称取2.00g茶花粉末置于100mL三角瓶中，加入40mL浓度为40%、50%、60%、70%、80%、90％的乙醇溶液，在60℃水浴中浸提60min。将提取液过滤，滤液用水定容于100mL容量瓶中，用酒石酸亚铁分光光度法测定茶花多酚含量。2.时间对提取效果的影响精确称取2.00g茶花粉末置于100mL三角瓶中，加入40mL浓度为60%的乙醇溶液，在60℃水浴中浸提，时间分别为15min、30min、45min、60min、75min、90min、120min，将提取液过滤，滤液用水定容于100mL容量瓶中，用酒石酸亚铁分光光度法测定茶花多酚含量。提取温度为30℃，时间分别为5min、10min、20min、30min、40min、50min、60min，其它处理同溶剂提取法。3.温度对提取效果的影响精确称取2.00g茶花粉末置于100mL三角瓶中，加入40mL浓度为60%的乙醇溶液，在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃水浴中浸提60min，将提取液过滤，滤液用水定容于100mL容量瓶中，用酒石酸亚铁分光光度法测定茶花多酚含量。提取时间为20min，其它处理同溶剂提取法。4.料液比对提取效果的影响精确称取2.00g茶花粉末置于100mL三角瓶中，以料液比(w/v)1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40加入浓度为60%乙醇溶液，在60℃水浴中浸提60min。将提取液过滤，滤液用水定容于100mL容量瓶中，用酒石酸亚铁分光光度法测定茶花多酚含量。提取时间为20min，温度为30℃，其它处理同溶剂提取法。5.超声波辅助浸提茶多酚精确称取4.00g茶叶粉末置于100mL三角瓶中，加入80mL浓度为60%乙醇溶液，在60℃水浴中浸提20min，再用60℃超声波辅助浸提10min，将提取液过滤，加水定容于100mL容量瓶中，取其中0.1mL测定茶多酚含量。（此为参考，应根据自己的实验总结）五、结果与讨论影响茶多酚提取率的因素很多，如不同溶剂、提取温度、时间、料液比等，这些都要通过试验来确定最优值。1）不同浓度乙醇对提提效果的影响2）时间对茶多酚提取效果的影响3）温度对茶多酚提取效果的影响4）料液比对茶多酚提取效果的影响5）超声波辅助浸提对茶多酚提取效果的影响六、实验结论实验比较得出,有机溶剂直接浸提与超声波辅助提茶树花多酚提取得率无显著差别，但超声波提取具有浸提温度低，时间短,速度快的优点，对易氧化的多酚提取更适用;超声波提取的最佳工艺条件为以60%乙醇水溶液为提取溶剂，料液比为1∶30，提取温度50℃，提取时间10min，最终多酚浸提得率75.13mg/g干茶叶。参考文献：[1]董瑞建，黄阿根，梁文娟.茶花多酚提取工艺研究[J].食品与机械，2007，23(1):83~86.[2]陈志华.茶多酚是食品行业很有前途的天然抗氧化剂.食品科学,2001,22(11):94-97.[3]曾磊,张玉军,邹正.茶多酚的功能特性及应用.郑州工程学院学报,2002,23(2):90-94
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