聚维酮碘口服液(万金水)对大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌作用研究试验单位(盖章):南京农业大学地 址:江苏省南京市卫岗1号委托单位及地址:深圳市安多福动物药业有限公司;深圳市盐田区盐田北山工业区首席专家(签名):江善祥试验负责人(签名):季辉试验参与人(签名):张冠军试验日期:2014年3月联系人:季辉原始资料保存地点:南京农业大学动物医学院药理组聚维酮碘口服液(万金水)对大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌作用研究一、目的意义本试验目的是研究聚维酮碘口服液(万金水)在体外条件下,对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌作用,为其在兽医生产中的合理使用提供理论依据。二、试验时间与地点2014年3月,南京农业大学动物医学院药理实验室。三、试验人员试验设计人:季辉。参加者:张冠军,南京农业大学动物医学院基础兽医系。四、试验菌株猪大肠杆菌2株:ED115、ED117,南京农业大学动物医学院药理组保存;禽沙门氏菌2株:F3、F5,安徽农业大学动物科技学院馈赠。五、试验药物:兽药名称:聚维酮碘口服液(万金水)生产厂家:深圳市安多福动物药业有限公司提供规格:0.5%,500mL/瓶生产日期:2013-01-10六、试验试剂MH培养基:上海盛思生化科技有限公司,130101;LB肉汤培养基:上海盛思生化科技有限公司,130801;LB琼脂培养基:上海盛思生化科技有限公司,130901。七、试验
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本试验应用试管稀释法进行聚维酮合碘口服液(万金水)的实验室微生物杀灭试验,测定聚维酮碘口服液(万金水)对大肠杆菌和沙门氏菌的杀灭作用。7.1细菌繁殖体悬液制备:以无菌操作方式开启菌种管,用毛细吸管加入适量营养肉汤培养基,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散。取含5.0mL~10.0mL营养肉汤培养基试管,滴入少许菌种悬液,置37℃培养18h~24h。用接种环取第1代培养的菌悬液,划线接种于营养琼脂培养基平板上,置37℃培养18h~24h。挑取上述第2代培养物中典型菌落,接种于营养营养肉汤,置37℃培养18h~24h,即为第3代培养物。7.2聚维酮碘口服液(万金水)对大肠杆菌和沙门氏菌的杀灭作用测定试验采用试管稀释法测定(3重复)。试验时,取对数生长期的细菌(109cfu/mL)用生理盐水稀释到106cfu/mL供试验用,取10支灭菌试管编号,每管加入1mL稀释后的菌液,然后取浓度为80、40、20mg/L的聚维酮碘溶液1mL各加入三支试管中混匀,则试验浓度分别为40、20、10mg/L,另一只试管中加入1mL生理盐水作为阳性对照。作用10min后,每管分别取0.1mL用生理盐水按10倍比稀释,再取稀释后样品0.1mL进行平板计数,计算聚维酮碘口服液(万金水)的杀菌率。八结果体外抗菌活性通过试验分别测定了聚维酮碘口服液(万金水)对大肠杆菌、沙门氏菌的杀菌作用,具体结果见表1、2。由表可见,聚维酮碘口服液(万金水)三个浓度(40、20、10mg/L)分别与大肠杆菌、沙门氏菌作用10min后即可将细菌全部杀灭,细菌计数结果为0。表1聚维酮碘口服液(万金水)与大肠杆菌作用10min后细菌数(cfu/mL)浓度(mg/L)菌株号ED115ED117400020001000阳性对照2.64×1067.7×105表2聚维酮碘口服液(万金水)与沙门氏菌作用10min后细菌数(cfu/mL)浓度(mg/L)菌株号F3F5400020001000阳性对照2.4×1061.2×106九讨论聚维酮碘口服液(万金水)对大肠杆菌和沙门氏菌的抗菌活性本试验采用试管稀释法,每管加入1mL稀释后的菌液,然后分别加入不同浓度的聚维酮碘溶液1mL,混匀后作用10min进行细菌计数,测定聚维酮碘口服液(万金水)的杀菌性能。结果显示分别在40、20、10mg/L的浓度下聚维酮碘与大肠杆菌和沙门氏菌作用10min,可将其全部杀灭。文献报道各种碘制剂(碘伏、聚维酮碘等)的杀菌效果差别较大,分析原因主要为试验方法上的差异。不同试验方法得到的聚维酮碘的MIC或MBC为4.69mg/L~625mg/L。可见本试验结果与文献基本一致。十试验综合评估综合上述试验结果与文献,试验方法对该药的体外抗菌活性影响较大。在本试验方法的条件下,聚维酮碘口服液(万金水)在40、20、10mg/L时对临床常见的细菌(大肠杆菌、沙门氏菌、)能够迅速杀灭。主要参考文献[1]李继昌,鲁成武,符春燕,等.聚维酮碘消毒剂抑菌作用研究[J].黑龙江畜牧兽医,1998,(4):27[2]刘全离.聚维酮碘体外抑菌效果试验观察[J].中国消毒学杂志,2008,25(1):28-29[3]王玲,徐燕,陈越英,等.一种聚维酮碘消毒液对微生物杀灭效果的实验研究[J].中国消毒学杂志,2007,24(2):135-137[4]陈祖毅,林立旺,周游,等.聚维酮碘杀菌性能及影响因素实验研究[J].中国卫生检验杂志,2010,20(2):309-311附:部分试验照片图1样品配制图2 万金水与细菌作用10min后倒平板图3万金水与大肠杆菌作用10min后细菌计数平板(0为阳性对照、1为10mg/L、2为20mg/L、4为40mg/L)图4万金水与大肠杆菌作用10min后细菌计数平板(阳性对照与10mg/L试验组)图5万金水与沙门氏菌作用10min后细菌计数平板(0为阳性对照、1为10mg/L、2为20mg/L、4为40mg/L)图6万金水与沙门氏菌作用10min后细菌计数平板(阳性对照与10mg/L试验组)