酚酸测定步骤2015年6月25日6点50-7点15l)用普通天平称取湿的泥炭样品30g(泥炭鲜沼泽泥炭样20g)6份，分别放入500ml三角烧瓶，分为2组，即组各3个重复样；2)一组各加入pH=7的柠檬酸钠溶液70ml；另一组各加入二次水70ml；用锡铂纸封口并用橡皮筋固定，放入水浴(温度为35℃)摇床振荡12小时；3)从摇床中取出样品，静置约20分钟，分别将上部混合液移入离心管，以11000转/分钟高速离心30分钟；4)依据步骤(2)向剩有土壤残渣的三角烧瓶中继续分别加入pH匀的柠檬酸钠溶液或二次水50ml，水浴振荡2小时，重复第(3)步实验；将两次离心后的上清液合并，转入烧杯。用ZN浓度的HCI调节pH=2.静置约10分钟后,分别转移至离心管高速离心30分钟；用水系0.45um滤膜过滤得到清液；5)用量筒取清液100ml,移入500ml分液漏斗；6)加入20ml乙酸乙酷，用手振荡1分钟，静置5分钟；重复3次。静置分层；7)缓慢将水相放入干净烧杯，直到水相完全放完，然后将有机相完全转入茄形尾接瓶，编好号，盖上瓶盖暂放一边；8)将步骤7)得到的水相再转入分液漏斗，重复6)7)两步骤进行萃取，再萃取两次，将有机相转入同一茄形尾接瓶，进行水浴蒸发实验；9)旋转蒸发实验：将装有有机相的茄形尾接瓶接到旋转蒸发仪上(温度不超过50度)，蒸发至千；蒸发过程不宜过快。10)用含0.5%冰乙酸的甲醇溶液(体积比为甲醇：水=5：95)加入尾接瓶至2ml。11)超声波清洗，转移至2ml离心管，用0.22μm滤膜过滤后转移至专用小瓶中。12)进行HPLC分析。共选取了原儿茶酸、龙胆酸、对轻基苯甲酸、咖啡酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸、水杨酸、阿魏酸等9种单酚进行测试。色谱条件：日本岛津LC-20AB高效液相色谱仪,检测器SPD-M20A检测器，LM-370A柱温箱，Agi1ent(安捷伦)(ZORBAXSB-Aq4.6x250mm)色谱柱。流动相为0.5%乙酸水溶液(A)和0.5%乙酸甲醇溶液(B)。定量阀：20ul，柱温30℃，流速1.0mL/min。梯度洗脱：0.0lmin时A:B(V：V)为5%：90%，I0min时升到20%：80%，15min时为40%：60%，25min时55%：45%，35min时95%：5%，并保持这一比例至40rnin时，45min又降为65%：35%，50min进一步降为初始的5%：95%，57min停止。
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