一步法RT-PCR检测试剂盒(一步法RT-PCR扩增试剂盒)(目录号HS0612-2)产品包装试剂盒组成25次(HS0612-1)100次(HS0612-2)SuperRT/TaqMix25ul25ul2×RT-PCRBufferml2×mlDEPC-ddH2O1ml2×1ml保存条件-20℃产品简介本试剂盒是专为一步法RT-PCR实验研制，逆转录和PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR扩增的反应缓冲液和实验中所必需的反应组分。经过重组表达的SuperRT逆转录酶RNaseH活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解，更容易获得全长的cDNA。该逆转酶逆转录效率高，可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应。SuperRT逆转录酶与RNA亲合性高，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板，获得高产量的cDNA。PCR反应使用的DNA聚合酶具有扩增效率高、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。使用该试剂盒能够方便快捷的在同一个反应管内完成逆转录和PCR扩增反应。使用本试剂盒扩增得到的目的产物3′端附有一个″A″碱基，可直接用于T/A克隆。产品特点1.效率高，可以高效转录GC含量高，二级结构复杂的RNA模板。2.耐热性及稳定性强。3.操作简单迅速,最大限度的避免污染。4.独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。使用方法（注意：1ng~5μg总RNA可建立20μl反应体系，如果总RNA量大于5μg，请按比例扩大反应体系）1.将RNA模板、引物、2×RT-PCRBuffer、superRT/TaqMix和RNase-FreeWater溶解并置于冰上备用。2.根据以下表格配置反应体系，总体积为20μl。试剂25ul反应体系终浓度2×RT-PCRBufferul1×正义引物(10uM)1uluM反义引物(10uM)1uluM模板RNA<1ugSuperRT/TaqMixulDEPC-ddH2OUpto20ul3.涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。4.将热循环仪预热到45℃，将PCR管置于热循环仪中，进行RT-PCR反应。反应条件：注意：1）一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20~30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。2）延伸时间根据所扩增的片段大小设定，本产品中所包含的DNAPolymerase的扩增效率为1kb/30s。3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。5.反应结束后取5ul反应产物，加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。
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