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实验动物染毒途径和方法(染毒技术)(2)

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实验动物染毒途径和方法(染毒技术)(2)实验动物染毒途径和方法(染毒技术)(一) 实验动物染毒途径和方法(染毒技术) 染毒的途径和方法多种多样,可根据实验目的、动物种类和药物剂型等情况确定。  当研究外来化学物的毒性时,实验动物接触化学物途径的选择,应以人类在生产和生活环境中接触该化学物的途径为依据。  通常使用以下四种染毒方法,即经口,经呼吸道,经皮肤,注射染毒。  1、经口染毒 目的:  研究外来化学物能否经胃肠道吸收及求出经口接触的致死剂量(LD50)。  由于外来化学物可以污染饮水及食物,因此,此种染毒方式在卫生毒理学研究中占有重要地位。  经胃...

实验动物染毒途径和方法(染毒技术)(2)
实验动物染毒途径和方法(染毒技术)(一) 实验动物染毒途径和方法(染毒技术) 染毒的途径和方法多种多样,可根据实验目的、动物种类和药物剂型等情况确定。  当研究外来化学物的毒性时,实验动物接触化学物途径的选择,应以人类在生产和生活环境中接触该化学物的途径为依据。  通常使用以下四种染毒方法,即经口,经呼吸道,经皮肤,注射染毒。  1、经口染毒 目的:  研究外来化学物能否经胃肠道吸收及求出经口接触的致死剂量(LD50)。  由于外来化学物可以污染饮水及食物,因此,此种染毒方式在卫生毒理学研究中占有重要地位。  经胃肠道接触又因实验动物的种属不同,外源化学物理化性质不同,分为以下几种具体的接触方式。  (1)、灌胃在急性毒性试验中,经口染毒多用灌胃法,此法剂量准确,适用于小鼠、大鼠、家兔等动物。  灌胃法是将外源化学物用灌胃器灌到实验动物胃内。  灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成。  小鼠的灌胃针长约4~5cm,直径为1mm,大鼠的灌胃针长约6~8cm,直径约1.2mm。  灌胃针的尖端焊有一小圆形中空的金属球。  焊金属球的目的是防止针头刺入气管或损伤消化道。  针头金属球端弯曲成20左右的角度,以适应口腔、食道的生理弯曲度走向。   图11 灌胃针食道食道气管气管ByLASCOByLASCO面向自己,沿着门牙左边滑入边滑入面向自己,沿着门牙左图12 鼠类灌胃、腹腔注射 ①剂量:  在每一实验系列中,同种实验动物的灌胃体积最好一致,即以单位体重计算所给予的毫升数应该一致,即ml/kg或ml/g计。  因为成年动物胃容积与体重之间有一定的比例,按单位体重计算灌胃量,受试化学物的吸收速度相对稳定。  A、鼠类的灌胃法:  用左手固定鼠,右手持灌胃器,将灌胃针从鼠的一侧嘴角插入,压迫鼠的头部,使口腔与食道成一直线,将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道,可感到轻微的阻力,此时可略改变一下灌胃针方向,以刺激引起吞咽动作,顺势将药液注入。  一般灌胃针插入小鼠深度为3~4cm,大鼠或豚鼠为4~6cm。 常用灌胃量小鼠为0.2~1ml,大鼠1~4ml,豚鼠1~5ml。  B、兔的灌胃法:  先将动物固定,再将开口器的小孔插入动物口中,再慢慢沿上腭壁插入食道,将灌胃管的外端浸入水中,如有气泡逸出,则说明灌胃管误入气管,需拔出重插。  插好后,将注射器连于灌胃管将药液推入。  灌胃结束后,先拔出灌胃管,再拿出开口器。  一次灌胃能耐受的最大容积兔为80~100ml,狗为200~250ml。   图13 兔耳缘静脉采血、注射及灌胃法②注意事项:  为了防止化学物与食物之间的反应,灌胃前应禁食4小时,灌胃后禁食2小时,但不禁水。  ③优点:  剂量准确;  缺点:  工作量大,易伤及消化道或误入气管而造成动物死亡。  (2)、喂饲将受试化学物拌入饲料或饮水中,由动物自行摄入。  为了准确掌握每只动物摄入化学物的剂量,需单笼喂养动物,计算每日的摄食量和饮水量,以折算摄入化学物的剂量。  优点:  符合人类接触化学物的实际情况。  缺点:  因为外源化学物暴露在空气中,非一次进入消化道,干扰因素较多。 异味动物拒食;挥发摄入量下降,有经呼吸道吸入的可能;化学物易水解或与食物中某些成分起化学反应,则摄入量不准确并有改变化学物毒性或毒效应的可能(一般急性毒性试验少用此法)。  (3)、吞咽胶囊将一定剂量的受试化学物装入胶囊内,强制放到动物的舌后咽部强迫动物吞下;主要适用于家兔,猫,狗,羊等较大动物;此种方法剂量准确,尤其适用于易挥发,易水解,有异味的化学物。  2、 呼吸道染毒有些化学物,常温常压下为气态,或在生产生活中以粉尘、气体、蒸气或雾等状态存在的药物或毒气,需通过呼吸道染毒,目的是研究化学物能否经呼吸道吸入,吸入过程对呼吸道有无损伤及求出LD50(半数致死浓度)等参数。  接触方式有两种:  (1)、吸入接触:  将实验动物置于含有一定浓度的外来化学物的染毒柜或其它容器中,动物自然吸入化学物。  ①静式吸入:  将实验动物置于一定体积的密闭容器中,加入一定量易挥发的液态化学物或一定体积的气态化学物,在容器内形成所需受试物浓度的空气环境。  优点:  设备简单,操作方便,消耗少,适用于小型动物。  缺点:  a、实验期间无氧气补充,容器中氧分压逐渐降低,CO2分压,温度,湿度逐渐升高,影响毒作用。  b、随着染毒时间的延长,染毒柜内化学物浓度渐渐降低,由于动物被毛,排泄物,壁柜等可能会对化学物有一定程度的吸收(吸附),故难以维持恒定的浓度。  此外,动物的体表暴露在该环境中,若该化学物可经皮吸收,还会造成交叉吸收的情况。  ②动式吸入:  指动物置于空气流动的染毒柜中,染毒柜配有新鲜空气补给系统,有受试化学物空气排出的动力系统和随时补充受试物的配气系统,O2、CO2分压恒定,温度、湿度恒定,受试物浓度恒定,明显由于静式染毒。  优点:  符合人类接触化学物的实际情况。  缺点:  设备复杂,受试物消耗量大,易污染工作环境。  (2)、气管注入接触:  在动物被麻醉的情况下,将已消毒灭菌的受试物(粉尘混选液或液体)注入气管,使之分布在左右肺内。  该染毒方式多用于制作急性中毒模型,而不同于急性毒性试验。  3、皮肤染毒 为了鉴定化学物质经皮肤的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等,需采用经皮肤染毒方法。  (1)、斑贴法(家兔):  在脱毛区(一般lcm2即可)贴敷浸有受试化学物的多层纱布(应低于致死刑量),再盖上一层油纸或塑料薄膜,贴牢固定。  于12~24小时后解开敷料,用温水清洗皮肤,观察皮肤反应。  (2)、浸尾法(小鼠及大鼠):  目的是定性地判定受试物的经皮吸收作用。  染毒前先将鼠放入特制的固定盒内,并使其尾巴通过固定盒底部的软木塞的圆孔露出管外。  继之将尾巴通过小试管软木塞小孔,插人装有受试物液体的试管内,浸泡2~6小时,观察中毒症状。  4、注射染毒(1)、皮下注射 注射时以左手拇指和食指提起皮肤,将连有针头的注射器刺入皮下。  注射部位一般在大腿外侧、内侧、背部、耳根部、腹部。  一般小鼠在背部或前肢腋下,大鼠在背部或侧下腹部;豚鼠在后大腿内侧、背部等脂肪少的部位;兔在背部或耳根部注射;蛙可在脊背部淋巴囊注射;狗多在大腿外侧注射,拔针时,轻按针孔片刻,防药液逸出。  放在铁盖上,        右手抓尾巴,左手抓皮肤右手抓尾巴,左手抓皮肤沿着拇指.食指中间插入,可感觉针穿过皮层入,可感觉针穿过皮层回抽,打入,完成回抽,打入,完成放在布上,右手抓尾巴,左手抓皮肤左手抓皮肤沿着拇指.食指中间插入,可感觉针穿过皮肤入,可感觉针穿过皮肤回抽,打入,完成回抽,打入,完成放在铁盖上,        沿着拇指.食指中间插放在布上,右手抓尾巴,沿着拇指.食指中间插图14 皮下注射(2)、皮内注射 皮内注射时需将注射的局部脱去被毛,消毒后,用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧,在两指之间,将连有针头的注射器紧贴皮肤表层刺入皮内,然后再向上挑起再稍刺入,即可注射药物,此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。   (3)、肌内注射 肌内注射应选肌肉发达、没有大血管通过的部位,一般多选臀部。  注射时垂直迅速刺入肌肉,回抽针拴如无回血,即可进行注射。 
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