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引物稀释方法(4)

引物稀释方法(4)引物稀释方法1．OligoDNA是以OD260单位来计算的，这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中，260nm波长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1OD260单位，根据此定义，1OD260单位相当于33μg的OligoDNA，您可以根据此数据和您的OligoDNA分子量，计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。2．引物序列的分子量计算公式如下：MW(相对分子质量)=（A碱基数×312）（C碱基数×288）（G碱基数×328）（T碱基数×303）-61例如：引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACGA...

引物稀释方法 1．OligoDNA是以OD260单位来计算的，这是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中，260nm波长下吸光度为1A260的Oligo溶液定义为1OD260单位，根据此定义，1OD260单位相当于33μg的OligoDNA，您可以根据此数据和您的OligoDNA分子量，计算得到摩尔数以计算不同摩尔浓度的溶液。2．引物序列的分子量计算公式如下：MW(相对分子质量)=（A碱基数×312）（C碱基数×288）（G碱基数×328）（T碱基数×303）-61例如：引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACGA=1C=3G=11T=6MW=（1×312）（3×328）（6×303）-61=65413．OligoDNA的分子量也可以用以下近似方法计算：OligoDNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5，则一条OligoDNA的分子量=碱基数×324.5。例：您得到一管标为5OD260的20merOligoDNA分子量=20×324.5=6490质量数=5×33=165μg摩尔数=165/6490=0.025μmol=25nmol若加灭菌双蒸水400μl溶解，则浓度为25nmol/400μl=62.5μM4．装有引物的eppendorf管一般保存于-20℃，临用前稀释。5．由于OligoDNA呈很轻的干膜状附在管壁上，打开时极易散失，所以打开管子前请先离心10,000rpm，1min，然后再慢慢打开管盖。6．在装有引物的eppendorf管内加入100-500μl双蒸水，盖上管盖，充分上下振荡5-10分钟，再次离心10,000rpm，1min。7．计算原引物管primer的浓度（必要时测OD260核对厂家提供引物量是否正确）。8．计算并将应用primer稀释为10pmol/μl。9．标明原引物管、应用引物管、稀释方法，置-20℃保存。10.以上是贮存液，工作液再稀释十倍。

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