过氧化物酶体增殖物激活受体(1)

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是一类由配体激活的核转录因子,属Ⅱ型核受体超家族成员,存在3种亚型，即PPARα、PPARδ、PPARγ，这三种亚型在结构上有一定的相似性，均含DNA结合区和配体结合区等。PPAR与配体结合后被激活，与9-顺视黄酸类受体形成异二聚体，然后与靶基因的启动子上游的过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisomeproliferatorresponseelement，PPRE)结合而发挥转录调控作用。PPRE由含相隔一个或两个核苷酸的重复序列AGGTCA组成。与配体结合后，PPAR在DNA结合区发生变构，进而影响PPAR刺激靶基因转录的能力。PPARδ几乎在所有组织中 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达，浓度低于PPARα及PPARγ，直至最近以前尚未找到此一核受体的选择性配基。PPARδ是代谢综合征（肥胖、胰岛素抵抗、高血压是与脂质紊乱有关的共同的病态表现）的一个新靶点。有不少的研究表明：GW501516可作为PPARδ的特异激动剂用于研究。参考网址：;cat_name=ADA2001&title_id=59219RegulationofMuscleFiberTypeandRunningEndurancebyPPARδplosbiology，Volume2|Issue10|October2004;doi=10.1371/journal.pbio.0020294NF-KB通路中的抑制剂好像有1.PDTC(pyrrolidinedithiocarbamate),是一种抗氧化剂，主要作用于IκB降解的上游环节（IκBα的磷酸化或IKK的活性水平），2.Gliotoxin是一种免疫抑制剂，机制可能从多个环节阻断NF-KB的激活，如IκB的降解，NF-KB的核移位和与DNA的结合。3.PSI（proteasomeinhibitor）。以上好像美国Sigma公司有生产。除了各种信号分子经典的阻滞剂，如PI-3K的PD*****,也有针对核膜转运的阻滞，分为非特异性的和特异性的两种。Daines等，使用detergent-sensitivefactor，非特异的阻断STAT6/STAT6二聚体入核。详见下列文献：1，DainesMO,AndrewsRP,ChenW,El-ZayatySA,HersheyGK.DNAbindingactivityofcytoplasmicphosphorylatedSTAT6ismaskedbyaninteractionwithadetergent-sensitivefactor.JBiolChem.2003Aug15;278(33):30971-4.Epub2003May302，AndrewsRP,EricksenMB,CunninghamCM,DainesMO,HersheyGK.Analysisofthelifecycleofstat6.ContinuouscyclingofSTAT6isrequiredforIL-4signaling.JBiolChem.2002Sep27;277(39):36563-9.Epub2002Jul16Lisa等人，通过改变核定位分子nuclearlocalizationsignals(NLSs)和接头分子adaptersofthekaryopherin-arfa/importin-arfa(Kap-arfa/Imp-arfa)family，特异的阻断inportin-beta介导的入核。详见下列文献：LisaM.Nelson,RobertC.Rose,andJunonaMoroianu.NuclearImportStrategiesofHighRiskHPV16L1MajorCapsidProtein.THEJOURNALOFBIOLOGICALCHEMISTRY.Vol.277,No.26,IssueofJune28,pp.23958–23964,2002曲古抑菌素（TSA），可以延长NF-KB在核内的时间，阻止NF-kB出核FK506,而非FK509，可以减少神经钙蛋白（calcineurin）对NF-AT的去磷酸化，使NF-AT的核定位信号无法与转运蛋白结合，阻止其入核针对NPC上核孔蛋白的抗体，也可干预NPC作用，使经过NPC的入核作用受损PPAR家族简直可以竞争近几年的靶点之星了。关于响应元件PPRE，ppar-gamma和PPAR-alpha的是一样的，PPRE是以AGGTCANAGGTCA这样一个AGGCTA二倍体作为基本单元的，delta的有所不同。PPAR跟激动剂结合以后，跟9-顺视黄酸类X受体（RXR）组成异二聚体，分别各自结合一个AGGTCA，从而刺激靶基因转录。已经上市的PPAR激动剂药物都是gamma的，都是具有噻唑烷酮结构的化合物，比如pioglitazone,rosciglitazone，troglitazone(因肝毒性被叫停)PPAR家族主要参与脂肪代谢，并进一步参与糖代谢。目前研究显示，PPAR不仅仅是II型糖尿病的靶点，其他相关的重要疾病有高血脂，炎症（动脉粥样硬化），癌症（胃癌和脂肪癌），肥胖。这些还需要进一步研究，特别是delta的作用。方便的研究PPAR的转录激活作用，特别是高通量筛选（highhighthroughputsceening）PPAR激动剂，没有比报告基因更好的方法，可以方便而灵敏的检测了。《活化T细胞核因子(NFAT)》活化T细胞核因子(NuclearFactorofActivatedTCells,NFAT)在免疫反应中对诱导基因转录起重要作用。NFAT蛋白在T细胞及其它类型的免疫细胞中如B细胞、NK细胞、肥大细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞上表达[1,2]。NFAT蛋白因那些与Ca2动员连接受体的激活而被活化,如T和B细胞的抗原识别受体、肥大细胞和嗜硷性粒细胞的FcεR等。受体的激活和Ca2动员导致了许多细胞内酶包括依赖Ca2＋／钙调蛋白的磷酸脂酶Calcineurin的活化,Calcineurin是活化T细胞核因子发挥作用的主要激活因子[1]。受激细胞诱导一大批与活化有关的基因转录,许多基因都可能是NFAT的靶基因,这些基因编码转录因子、信号蛋白、细胞因子、细胞表面受体和其它效应蛋白。免疫抑制药物FK2506和环孢菌素A通过抑制Calcineurin可阻断3种抗原受体通路(NFAT、NFκB和JNP),抑制成熟淋巴细胞增殖[3]。作为Calci2neurin的底物,NFAT是FK2506和环孢菌素A主要的靶,1　结构已知有4种哺乳类NFAT基因,它们编码约含700～1000个氨基酸残基的蛋白质。在NFAT蛋白中,有两个相邻的非常保守的区域即NFAT同源区(NHR,约300个氨基酸残基)[5]和DNA结合区(DBD,约270个氨基酸残基)[6]。NHR和DBD夹在两条多肽链两端多变的转录活化区之间[7]。NFAT1的分析表明NFAT蛋白的氨基端和梭基端都含有转录活化区(TAD)。2　分类NFAT1、NFAT2、NFAT3和NFAT43　调节Calcineurin在NFAT活化中起着十分重要的作用。NFAT的活化有三步:脱磷酸、核易位、对DNA亲和力的提高。（1）在静止细胞中,NFAT蛋白被磷酸化,存在于胞浆,对DNA具低亲和力。（2）引起Ca2动员的刺激物导致NFAT的快速脱磷酸和入核;脱磷酸的NFAT对DNA的亲和力增高。NFAT蛋白的活化紧随Calcineurin的活化之后,在T细胞中,游离的Ca2水平高,Calcineurin的活性就高,NFAT1就能在核内保持长时间的活化状态。如果去除Ca2刺激物ionomycin或加了Calcineurin的抑制物环孢菌素A和FK506而使Calcineurin的活性受到抑制,则NFAT1在5～15分钟内恢复磷酸化状态,并回到胞浆内,对DNA亲和力大大降低[10]。用Calcineurin或硷性磷酸酶作用于细胞提取物可引起NFAT1DNA结合力的提高[12]。这说明磷酸化的残基直接或间接掩盖了NFAT1中的DNA结合区,而脱磷酸可能通过NFAT内在构象的改变,暴露这些区域使其易于被接近。除Calcineurin之外还有很多蛋白和信号通路可以调节NFAT。①TCR参与的通路:TCR交联引起的最早结果是酪氨酸激酶包括Lck和ZAP270的活化以及包括引起Vav在内的许多细胞内底物的酪氨酸磷酸化,Lck和ZAP270的活化引起T细胞内的Ca2动员[13],由此引起依赖NFAT的报告基因表达。②PMA激活的信号通路:已知PMA在T细胞内的作用是激活蛋白激酶C、Ras、Raf,（1）Ras对于NFAT的功能是必不可少的,活化的Ras可以有效地代替PMA,同基础的活化的Calcineurin一起为依赖NFAT的报告基因表达提供充分刺激,而显性阴性的Ras则抑制TCR引起的NFAT活化。Ras有多种多样的效应蛋白如Raf、Ras、与Ras有关的GTP酶Rac和Rho。（2）Raf通路对于AP－1的诱导是很重要的,Raf可以激活MEK1(有双向活性的激酶),而MEK1又可激活MAP激酶EPK1和ERK2。在T细胞中,活化的Raf和ERK1代替PMA与ionomycin协同刺激NFAT驱动的转录,但不如活化的Ras有效。同时,这些蛋白质的显性阴性形式也仅部分抑制Ras介导的活化。（3）另一种Ras的效应蛋白的活性形式Rac21,可通过不含ERK的通路最大限度地激活,AP－1驱动的报告基因的表达,即使是与ionomycin或活化的MEK1联合以后也是如此。综上,说明T细胞中存在另一条Ras效应蛋白通路并为最大限度地表达NFAT:AP21驱动的报告基因所需[15]。关于这条通路目前还不清楚。③与Ca2动员有关的通路:[Ca2]i的增加可激Calcineurin,也可导致其它依赖Ca2／钙调蛋白激酶的激活。其中,两种有多种功能的激酶(CaMK)可以调节NFAT的活性。在T细胞中CaMKⅡγβ能部分抑制人Jur／ket细胞中NFAT和AP21驱动的报告基因表达,且抑制活化Calcineurin加强IL22启动子功能[16]。而活化的CaMKIVPGγ具有相反作用,通过激活AP21大幅度地加强NFAT活性。CaMKIVPGγ通过上调血清反应因子(SRF)的转录功能和随后的c2Fos诱导引起NFAT活性加强且不被显性阴性形式Ras抑制。这两种CaMKs的相反作用与它们对不同细胞内底物的靶作用有关[17]。4　功能细胞因子基因调节区中的NFAT结合部位可分为Ⅰ类(GroupⅠ)和Ⅱ类(GroupⅡ)。Ⅰ类包括在该位点上NFAT蛋白能与AP21或其它bZIP蛋白形成协同复合体的位点。Ⅱ类包括那些通常的Rel家族蛋白结合位点和与其相似的位点。NFAT通过与多种细胞因子基因调节区中多种NFAT结合部位结合引起共转录。NFAT蛋白的DBD可能与Rel家族蛋白的DBD三维结构相似,并用相应的环与DNA建立接触[6]。NFAT蛋白在结合DNA和使转录活化时表现出与AP21协同的能力,NFAT和AP21的协同见于许多不同细胞因子的增强子P启动子。在由Fos和Jun的bZIP成分,人NFAT1的RHR和含鼠IL22启动子远端ARRE2序列DNA片段形成的一种晶体化四元复合物中,NFAT和AP21间有一延伸的接触面,NFAT的DBD和AP21的bZIP成分结合并和DNA组成一紧密复合体,NFAT和AP21的接触表面形成了一个能识别15个硷基对的沟[18]。NFAT和AP21在DNA上接触邻近位点且包含两种转录因子的DNA2蛋白复合体较仅含一种蛋白的复合体具有更大的稳定性和亲和力。细胞因子基因的每个调节区域包含3～5个结合NFAT的部位,总长度在200～300个硷基对,表明有效的转录需包含NFAT复合体之间高度有效的协同。许多系统中的转录激活需要一个协同的转录复合体的有序集合,包括转录因子、协同激活因子和核心转录结构。NFAT位点的序列相对其它有关转录因子位点的排列有很大的可变性,这就决定了其诱导基因表达的特异性,如NFAT和Oct蛋白在IL22和IL24启动子上的相互作用,前一种为协同关系,后一种为争关系。很可能特定的NFAT蛋白和在不同类型细胞中表达的协同转录因子,或是介导这些转录因子和基础的转录复合物间相互作用的细胞特异的核协同刺激因子或抑制因子决定选择性的基因表达。NFAT1基因裂解导致无DNA结合活性蛋白表达[19]甚至无蛋白表达[20]。NFAT1缺陷鼠除有一定程度脾肿大外,发育和免疫正常。但某种初次和再次免疫应答显著增强,在至少3种实验环境中有发展为TH2反应的倾向:过敏炎症活体模型中检测到嗜酸性粒细胞在胸膜内的数目增加和血浆IgE水平升高[20];用TNP2卵白蛋白免疫接种时,血浆IgE水平升高;试管内受IL24和抗CD3刺激的脾细胞更易向TH2表现型分化。在正常鼠,NFAT1的活化可以诱发某些细胞内抑制因子或细胞表面受体表达,或减弱活化效应蛋白表达,从而减弱免疫反应强度,并可能限制TH2型细胞因子后期表达,而NFAT1缺陷鼠可能引起早期细胞因子的变化而改变后期细胞因子的平衡,从而改变总体反应的类型[19];或有另一种与NFAT1抗衡的NFAT蛋白支持TH2型细胞因子基因转录。综上,NFAT1的表达和功能缺陷与过敏性疾病的发生有很密切的关系。另外,编码所有4种NFAT蛋白的mRNA在睾丸和P或卵巢中及在骨骼或心肌细胞中均有表达,这表明NFAT可能在生殖和肌肉发育及其功能发展中起作用。《090　钙调神经磷酸酶和NFAT在T细胞活化中的作用》T淋巴细胞活化机制是现代免疫学重要命 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 之一,从TCR接受APC提供的抗原信息到T细胞基因活化并开始增殖或产生细胞因子是一个复杂而精细的过程,其间涉及诸多信号转导分子的相互作用。已知NFAT是T细胞基因活化的关键信号元件之一,而NFAT作用的发挥又依赖于CaN的作用。近年来有关CaN和NFAT在T淋巴细胞激活过程中的作用及其机理得到了广泛研究,并取得较大进展,现简要综述如下。一、钙调神经磷酸酶CaN是目前所知的唯一依赖于Ca2.钙调素的Ser.Thr磷蛋白磷蛋白酸酶,在分类上属于磷蛋白磷酸酶22B(PP22,70年代末80年代初由加拿大籍华人王学荆教授,美籍华人张槐耀教授及美国的Klee教授的实验室分别在猪脑中发现并纯化成功,由于它结合CaM并且在动物神经元中大量存在,Klee将其命名为Calcineurin,我们将它汉译为钙调神经磷酸酶。CaN是一个由61KD的A亚基和19KD的B亚基组成的异二聚体,A亚基(CaNA)为催化亚基,与CaM结合;B亚基(CaN为调节亚基,与Ca2结合。生物化学和遗传学研究表明,CaNA由5个不同结构域组成:N2末端区,催化区,CaNB结合区,CaM结合区及自抑制区(auto2inhibitory,AI);CaNB结合4个Ca2,与CaM的序列有33235%的同源性,其二级结构与CaM很相似。CaN的磷酸酶活性由Ca2结合CaNB和CaM结合CaNA激活。此外,CaN的活性还需要二价金属离子如Mn2和Ni2的存在[1]。CaN是保守蛋白,广泛分布于真核生物中,从大鼠,小鼠,猪,蛙,鱼和鸡的脑匀浆中以及人和兔的非神经组织中均检出了CaN,在原生动物门的草履虫中也有发现[2]。非神经组织中的CaN含量仅为神经组织中的1ö2021ö10。免疫组织化学定位实验 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 ,CaN主要存在于突触密度区和树突密度区,且酶量的变化与突触形成有关。亚细胞定位研究表明,CaN在细胞浆和膜组分中的含量较高[3]。由此可见,CaN对脑的功能,尤其对突触活动具有重要作用。CaN能催化多种SeröThr残基已磷酸化的蛋白进行脱磷酸化,并具有显著的底物特异性,不同来源的CaN在底物特异性上并无差别。已知的CaN底物蛋白包括活化T细胞核因子(NFAT)、酪蛋白(casein)、组蛋白(histone)、鱼精蛋白(protamine)、卵黄高磷蛋白(phosvitin)、依赖于cAMP的蛋白激酶2的调节亚基、MAP22、tau蛋白以及四种哺乳动物脑内磷蛋白如DARRP232、G2底物、蛋白K2F和突触素I(SynapsinI)。此外,CaN还能作用于一些非蛋白类底物,主要是烯醇磷酸化合物,如PNPP、phosphotyrosine等。与蛋白类底物比较,在酶动力学上,它们与CaN反应时均具有较高的Km和Vmax。1991年,Liu等[4]发现免疫抑制剂环孢菌素A(CyclosporinA,CsA)和FK506与其各自的胞内受体Cyclophilin(CyP)和FK5062bind2ingprotein12(FKBP12)结合后,抑制细胞因子如IL22的表达,从而抑制T细胞分泌颗粒的胞吐作用。CyP和FKBP12具有异构酶活性。在体外,CsA2CyP或FK5062FKBP12复合物在Ca2存在下特异结合并抑制CaN酶活。通过对CsA和FK506类似物的研究表明,CaN磷酸酶活力的抑制与T细胞抑制具有极好的相关性,由此提示CaN是TCR信号转导中的一个关键酶。二、活化T细胞核因子(NFAT)NFAT是T淋巴细胞受抗原刺激后产生细胞因子如IL22所需的转录因子,在免疫应答期间细胞因子基因转录调控中起着重要作用,其分子量约为120KD。在细胞核内,它通过作用于一些细胞因子基因启动子中的顺式作用元件而调控细胞因子的基因表达。目前已报道的NFAT家族有4个成员,即NFAT1(NFATp),NFATc,NFAT3和NFAT4(NAFTxöNFATc3)。根据相似性程度,NFAT蛋白可分为3个结构域。①长约400个氨基酸残基的N端结构域,它是由9个保守结构基元(motif)的同源片段组成的、中等相似(23～35%相似)的序列,称为NFAT同源区(NHR)[5],并包括3个保守SP框(SPBOX)的拷贝;②约300个氨基酸残基的中央结构域,它是NFAT中相似性最高(66～73%相似)的序列,与转录因子Rel家族的DNA结合区有微弱联系,故被称为Rel相似区(RSD)[6];③长约250～350个氨基酸残基的C端结构域,除一个存在于每一NFAT剪接突变体中的长约15个氨基酸的序列外,此区相似性最低。NFAT1的DNA结合能力依赖于其中央结构域RSD。对NFATx的一个剪接突变体NFATx1的研究也得到类似结果,缺乏SRD突变体均不能结合DNA。NFAT的最大量表达至少需要2个信号,即PKC激活和Ca2浓度上升,而NFAT任一结构域的缺失均降低其受PMA和Ca2载体A23187诱导的转录活化能力,这说明在NFAT的N端和C端均存在完整转录活化所需的序列。但有趣的是,转染缺失N端NFATx1的突变体pME2X△N时,仅PMA刺激即可导致明显的NFAT活力(但只有PMA2A23187联合刺激时的1.3),且该活力不受CsA的抑制。这说明NFATx1包含一个受Ca22CaN依赖性途径调控的N端抑制区。这个受CaN调节N端抑制区被称为CRI结构域(calcineurin2regulatoryinhibitorydomain)。NAFT家族成员在T细胞发育的不同阶段有不同的调节作用[7]。NFATx的mRNA在所有T细胞亚群中都有表达,而在双阳性(CD4CD8)胸腺细胞中表达最高。相反,NFAT1的mRNA主要在成熟的CD4的单阳性细胞中表达。NFATc的mRNA在所有T亚群中均很低,但沸波酯等可强烈诱导其表达。即PKC激活和Ca2浓度上升,而NFAT任一结构域的缺失均降低其受PMA和Ca2载体A23187诱导的转录活化能力,这说明在NFAT的N端和C端均存在完整转录活化所需的序列。但有趣的是,转染缺失N端NFATx1的突变体pME2X△N时,仅PMA刺激即可导致明显的NFAT活力(但只有PMA2A23187联合刺激时的1ö3),且该活力不受CsA的抑制。这说明NFATx1包含一个受Ca22CaN依赖性途径调控的N端抑制区。这个受CaN调节N端抑制区被称为CRI结构域(calcineurin2regulatoryinhibitorydomain)。NAFT家族成员在T细胞发育的不同阶段有不同的调节作用[7]。NFATx的mRNA在所有T细胞亚群中都有表达,而在双阳性(CD4CD8)胸腺细胞中表达最高。相反,NFAT1的mRNA主要在成熟的CD4的单阳性细胞中表达。NFATc的mRNA在所有T亚群中均很低,但沸波酯等可强烈诱导其表达。三、CaN和NFAT在T细胞激活中的作用APC提供的抗原—MHC复合体与T细胞表面TCR蛋白结合代表着T细胞活化过程中的主信号。而APC膜分子B7与T细胞表面的CD28分子结合为T细胞活化所必需,称为协同刺激信号。这些细胞—细胞间的相互作用相当复杂,一方面包括大量的膜受体与其配体(或称反受体,counter2receptor)相互作用;另一方面诸多自泌的或旁泌的细胞因子与其特异膜受体相互作用。主信号通过磷脂酰肌醇通路,首先活化磷脂酶C(PLC),PLC使4,5二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)断裂成1,4,5三磷酸肌醇(IP3)和二酰肌甘油(DAG)。IP3引起钙从钙库中释放到细胞溶质中,通过CaN和CaM活化NFAT、NFJB、AP21和Oct21等核因子,使IL2基因表达。DAG则通过活化PKC而激活上述的核因子。对于大部分T细胞而言,IL22都是自泌性生长因子,也是活化T细胞进入增殖和分化阶段的重要条件。T细胞的增长由IL22控制,IL22表达升高,则促进T细胞活化。有证据表明,IL22的表达依赖于NFAT的表达,而NFAT的活化又与脱磷酸化有关。存在于胞浆中的NFAT亚基自身磷酸化,是CaN的作用底物,且CaN催化的脱磷酸化作用受CsA和FK506的抑制。1992年,O’Keefe等证明[8],在转染CaN的细胞中,在PMA和Ca2载体刺激下,IL22驱动的基因表达提高约2倍,而过表达组成型活跃的CaN突变体(去掉自抑制区和CaM结合区)的细胞中,仅PMA存在即提高约150倍,这说明活跃的CaN可代替基因表达对Ca2载体的需要。Clipstone等[9]也获得类似的结果。由此可见,CaN的过表达产生对CsA和FK506的抵抗作用,同时提高NFAT和NFIL22A依赖性转录,提高了Ca2和PKC刺激下T细胞的活化。CaN在此过程中起关键作用,即CaN是T细胞活化的关键酶。新近的研究证明[10],Tpl22激酶也可激活NFAT而诱导IL22表达,这种激活作用依赖于CaNöNFAT通路和MAPK(mitogen2activatedproteinkinase)通路。对NFAT4.x1[11]和NFAT1的研究发现,在SDS2PAGE中,此两种NFAT的迁移变化与其N端结构域有关,说明NFAT的N端可能是其(脱)磷酸化位点;而免疫共沉淀实验和转染实验也均发现N端NFAT结构域是CaN靶位点。NFAT的CaN靶位点是一段短的保守序列,其中一个氨基酸残基改变都会影响CaN介导的脱磷酸化和核转位作用[12]。Lou等[13]发现,细胞受刺激时,CaN结合N端NFAT1(1～415),NFAT1被磷酸化并随之进入细胞核;而对于NFATx1,CaN不仅结合其氨基端,且通过多个NFATxl停靠位点而结合。NFATxl中包含CaN活性靶的146～310区段的序列已被确定。此外,CaN与NFATx1氨基端结合,可使NFATx1的CRI特定氨基酸脱磷酸化,CRI的抑制活力丧失,从而活化NFATx1转录。CRI图谱已在着手进行,现已确定SP框前的约60对NFAT4öx1[11]和NFAT1的研究发现,在SDS2PAGE中,此两种NFAT的迁移变化与其N端结构域有关,说明NFAT的N端可能是其(脱)磷酸化位点;而免疫共沉淀实验和转染实验也均发现N端NFAT结构域是CaN靶位点。NFAT的CaN靶位点是一段短的保守序列,其中一个氨基酸残基改变都会影响CaN介导的脱磷酸化和核转位作用[12]。Lou等[13]发现,细胞受刺激时,CaN结合N端NFAT1(1～415),NFAT1被磷酸化并随之进入细胞核;而对于NFATx1,CaN不仅结合其氨基端,且通过多个NFATxl停靠位点而结合。NFATxl中包含CaN活性靶的146～310区段的序列已被确定。此外,CaN与NFATx1氨基端结合,可使NFATx1的CRI特定氨基酸脱磷酸化,CRI的抑制活力丧失,从而活化NFATx1转录。CRI图谱已在着手进行,现已确定SP框前的约60个残基。此区缺失时,对Ca2传递的依赖性可部分被克服。NFAT1c也有类似情况[14]。NFAT1活化的早期事件包括其迅速脱磷酸化、与DNA上NFAT位点亲和力增强及进入核内,这三个过程都与CaN有关,因为它们均能被CsA和FK506阻断。CaN与NFAT4.x1的N末端结合并与之形成复合物转移到核内,而入核运输必然发生在DNA结合和转录活化之前。NFATx.4以依赖于CaN的方式转移至核内[13]。持续高浓度的Ca2,而非瞬时的Ca2脉冲对于维持NFAT停留在核内是必须的。在核内,NFAT依赖于Ca2,诱导淋巴细胞活化和增殖所需的基因进行转录[15]。T细胞应答被认为是依赖于一个域值量TCR的活化[16],此域值与Ca2迁移持续时间有关。仅当一特定域值的Ca2持续运动,结合并活化CaN,后者使NFAT的CRI功能丧失时,NFAT蛋白才与之应答而参与此调控。此时,控制可迁移Ca2的数量和持续时间可决定NFAT蛋白是否具有转录活化能力。个残基。此区缺失时,对Ca2传递的依赖性可部分被克服。NFAT1c也有类似情况[14]。NFAT1活化的早期事件包括其迅速脱磷酸化、与DNA上NFAT位点亲和力增强及进入核内,这三个过程都与CaN有关,因为它们均能被CsA和FK506阻断。CaN与NFAT4öx1的N末端结合并与之形成复合物转移到核内,而入核运输必然发生在DNA结合和转录活化之前。NFATxö4以依赖于CaN的方式转移至核内[13]。持续高浓度的Ca2,而非瞬时的Ca2脉冲对于维持NFAT停留在核内是必须的。在核内,NFAT依赖于Ca2,诱导淋巴细胞活化和增殖所需的基因进行转录[15]。T细胞应答被认为是依赖于一个域值量TCR的活化[16],此域值与Ca2迁移持续时间有关。仅当一特定域值的Ca2持续运动,结合并活化CaN,后者使NFAT的CRI功能丧失时,NFAT蛋白才与之应答而参与此调控。此时,控制可迁移Ca2的数量和持续时间可决定NFAT蛋白是否具有转录活化能力。激酶与磷酸酶在NFAT多个残基上相互作用。无论磷酸化或非磷酸化形式的NFATp均结合CaN,且此结合均可由于FK5062FKBP12复合物预处理CaN而阻断。一旦CaN2FKBP122FK506复合物形成,活化或非活化T细胞中的NFATp均不能再于CaN结合[17]。但在体外,一旦NFATp与CaN作用,外加的FK5062FKBP12复合物则不能破坏这一作用。FK5062FKBP12复合物抑制结合CaN的底物,而非影响CaN的磷酸酶活力。CaN不仅通过使NFAT特定残基脱磷酸化以活化NFAT进入细胞核,后者通过结合DNA和转录活化以激活IL22的基因表达,还可间接作用于其他一些细胞因子。Tsubio等[18]曾发现组成型活跃的CaN与PKC或NFJB.AP21协同作用可以活化粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子(GM2CSF)启动子的转录。在T细胞激活的下游,NFJB、AP21和NFAT结合序列是通过PKC和Ca2信号转导诱导GM2CSF基激酶与磷酸酶在NFAT多个残基上相互作用。无论磷酸化或非磷酸化形式的NFATp均结合CaN,且此结合均可由于FK5062FKBP12复合物预处理CaN而阻断。一旦CaN2FKBP122FK506复合物形成,活化或非活化T细胞中的NFATp均不能再于CaN结合[17]。但在体外,一旦NFATp与CaN作用,外加的FK5062FKBP12复合物则不能破坏这一作用。FK5062FKBP12复合物抑制结合CaN的底物,而非影响CaN的磷酸酶活力。CaN不仅通过使NFAT特定残基脱磷酸化以活化NFAT进入细胞核,后者通过结合DNA和转录活化以激活IL22的基因表达,还可间接作用于其他一些细胞因子。Tsubio等[18]曾发现组成型活跃的CaN与PKC或NFJBöAP21协同作用可以活化粒细胞ö巨噬细胞集落刺激因子(GM2CSF)启动子的转录。在T细胞激活的下游,NFJB、AP21和NFAT结合序列是通过PKC和Ca2信号转导诱导GM2CSF基因表达所必须的。CaN也是通过活化NFAT而促进GM2CSF基因表达。此外,研究表明,免疫抑制剂CsA和FK506通过抑制T细胞活化中的早期事件而阻止一些细胞因子的转录。这些细胞因子除IL22、GM2CSF外,还有IL23、IL24、TNF2A以及其它一些在协同免疫应答中起主要作用的分子。CaN是药物—受体复合物的特异靶酶,而NFAT蛋白则可能是CaN和免疫抑制剂的主要靶分子。由此可见,CaN通过作用于NFAT蛋白而调控T细胞活化时不同细胞因子的基因表达,因而对T细胞激活至关重要。