微生物实验实验二稀释平板测数第一页，共11页实验二（P74)微生物测数——稀释平板测数法第二页，共11页一、实验原理微生物测数：测定各类样品中微生物的数量。土壤、食品、微生物制品（菌肥、农药等）微生物测数方法DBCA稀释平板测数法显微镜直接计数法比浊法滤膜浓缩法第三页，共11页稀释平板测数法原理：又叫平板菌落计数法。将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量稀释样液接种到平板上。经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和接种量即可换算出样品中的含菌数。优点：能够获得活菌的信息；对环境微生物分离纯化。缺点：受多种因素限制，计数的结果比实际含菌量偏低。第四页，共11页以小组为单位，用实验一准备的物品、采用稀释平板测数测定土壤样品中的细菌、放线菌、真菌的数量。学习无菌操作（接种、菌液稀释、倒培养基）的基本方法。二、实验内容第五页，共11页三、实验方法1.编号（培养皿无菌水）3.接种（倾注法、涂板法）4.倒培养基，制备混菌平板2.制备样品稀释液5.培养30℃，培养箱倒置培养6.数菌落、计算稀释平板计数法操作流程第六页，共11页马丁氏培养基接种液稀释浓度：细菌：10﹣4、10﹣5、10﹣6放线菌：10﹣3、10﹣4、10-5真菌：10-2、10-3、10-4每组每个稀释度作2个重复，共6个人平板第七页，共11页四、实验结果观察与计算菌落计数培养后取出培养平板，计数平板上的菌落数,计算出同一稀释度2个平板上的菌落平均数。计算含菌量（CFU）/g(ml)鲜样=（计数皿平均菌落数×计数皿稀释倍数）÷接种量含菌量（CFU）/g(ml)干样=CFU/g(ml)鲜样×样品水分系数样品水分系数=1/(1-样品水分含量)CFU：colonyformingunits，菌落形成单位第八页，共11页计算菌落总数方法例举（细菌）注：计数皿选择平均菌落数范围为：细菌、放线菌30—300个/皿、真菌10—100个/皿。含菌量（CFU）结果采取4舍五入、保留2为有效数字。第九页，共11页计数皿的选择方法1.只有一个稀释度的平均菌落数符合范围：选择该稀释度计算含菌数。2.两个稀释度的菌落数符合范围：高稀释倍数菌落数×稀释倍数低稀释倍数菌落数×稀释倍数比值<2，取两个稀释度计算CFU的均值；比值>2，取稀释倍数较低的菌落平均数计算CFU。3.所有的稀释度平均菌落数>300或100：按稀释倍数最高的平均菌落数计算。4.所有的稀释度平均菌落数<10或30：按稀释倍数最低的平均菌落数计算。计算：第十页，共11页五、实验作业《微生物实验报告册》P3：1;P4:3;P5:1-3第十一页，共11页
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