穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子
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达的影响作者:李明,陈伟强,胡太平,张丽蓉,蔡尤彪,古宏标【摘要】 目的研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNFα)和白细胞介素6(IL6)生成的影响。
方法
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培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分别加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,终质量浓度1μg/mL)和不同浓度的穿心莲内酯(终浓度1、10、50μmol/L)进行干预,并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照。取培养24h细胞上清,用Griess法检测NO产量;用Elisa法检测TNFα、IL6浓度。结果与空白组比较,LPS明显促进了RAW264.7细胞NO、TNFα、IL6等炎症因子的生成;穿心莲内酯单独作用不影响炎症因子的表达,但穿心莲内酯能显著下调LPS诱导的炎症因子表达,与LPS组差异有显著性。结论穿心莲内酯可明显降低LPS诱导的巨噬细胞炎症因子表达,抑制炎症反应。【关键词】 穿心莲内酯;巨噬细胞;炎症因子;内毒素)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitiveeffectsofandrographolideonlipopolysaccharideinducedinflammationfactorssecretioninmacrophagecells.MethodsAmacrophagecelllineRAW264.7cellswereculturedinvitro,andtreatedwithdifferentconcentrationofandrpgrapholideinthepresenceorabsenceoflipopolysaccharide(LPS).Theproductionofinflammatoryfactornitricoxide(NO),tumornecrosisfactorα(TNFα)andinterleukin6(IL6)inthesupernatantwasmeasuredbyGriessreagentandElisa,respectively.ResultsAfterstimulatedwithLPS,thecontentofNO,TNFαandIL6weremarkedlyupregulated.PretreatedwithandrographolidesignificantlyinhibitedLPSinducedinflammationfactorsexpressionlevels,whichwasstatisticallysignificantcomparedwithLPSgroup(P Keywords:andrographolide;macrophagecells;inflammationfactor;lipopolysaccharide 目前,炎症在心血管疾病、肿瘤中的促进作用日渐受到重视,抑制炎症反应防治心血管疾病及肿瘤成为研究的重点[1-2]。穿心莲为爵床科植物穿心莲属植物穿心莲干燥地上部分,作为常用中药,具有清热解毒、凉血消肿等功效。穿心莲内酯是穿心莲的主要药效成分,有研究表明,穿心莲内酯有显著的抗炎活性,能抑制二甲苯和醋酸所致的小鼠毛细血管通透性增加,还对大鼠蛋清蛋白、角叉菜胶足趾注射致炎模型有明显的抗炎作用[3]。炎症反应时,巨噬细胞在细菌及其内毒素的刺激下,分泌大量的炎症因子,如氧化亚氮(NO)、TNFα和IL1β等,这些炎症因子又可以进一步活化巨噬细胞,形成恶性循环,加重炎症反应。本研究通过观察穿心莲内酯对NO、TNFα和IL1β等炎症因子表达的影响,探讨其抗炎活性。 1
材料
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与方法 1.1试剂与仪器 穿心莲内酯(四川广汉市维康植化有限公司);细菌内毒素(LPS,EcoliSerotype055:B5,美国Sigma公司);NO检测试剂盒(南京建成生物公司);TNFα、IL6Elisa检测试剂盒(美国R&D公司);胎牛血清(杭州四季青公司);DMEM培养基(美国Gibco公司);酶标仪(美国BioRad公司)。 1.2细胞培养及干预实验 小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞由本室保存。用完全DMEM培养基(含体积分数10%胎牛血清、质量浓度100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素),体积分数5%CO2,37℃条件下传代培养。取生长状态良好的RAW264.7细胞,质量分数0.25%胰酶消化,用DMEM培养基调整细胞浓度为1×106/mL,接种到24孔培养板内,待细胞生长至80%融合后,加入不同浓度的穿心莲内酯(终浓度分别为1、10、50μmol/L)孵育1h,然后加入LPS(终质量浓度1μg/mL)进行刺激。实验分组:正常对照组、穿心莲内酯单独作用组、LPS组和穿心莲内酯加LPS组。