Doxycycline抑制人肝癌细胞系HepG2生长的实验研究毕业论文作者：张强波李杰时昌文李捷孙京杰曹莉莉【关键词】肝肿瘤·Doxycycline·细胞凋亡·FasL·MMP-2多西环素（Doxycycline）为4环素类抗生素的1种，已有研究表明其对前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌等多种肿瘤生长有明显的抑制作用［1-3］，而其对人肝癌细胞的生长抑制作用国内外未见报道。本研究观察了Doxycycline对人肝癌细胞系HepG2的生长抑制和凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。1材料与方法1.2方法1.2.2TUNEL检测细胞凋亡取对数生长期生长良好的HepG2细胞，将其分别接种于200mL培养瓶中，细胞贴壁后更换成含终质量浓度分别为5mg/L和20mg/LDoxycycline的条件培养液作用24、48和72h。胰酶消化各组细胞后，取1滴细胞悬液于已消毒载玻片上，细胞贴壁生长4h制成细胞爬片，用1∶1甲醇丙酮固定30min,保存备用。按TUNEL试剂说明书（Roche）操作，采用倒置荧光显微镜成像，随机选取5个视野300个细胞计算细胞凋亡率。1.3判断
标准
excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载
FasL、Fas及MMP-2蛋白定位于细胞膜和（或）细胞质，阳性反应为细胞膜和（或）细胞质内着棕黄色颗粒。免疫组织化学结果判定参照文献［4］，以阳性细胞百分比及着色强度计分做半定量
分析
定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析
。随机观察5个高倍视野，根据阳性细胞数占细胞总数的百分比计为0～4分：无阳性细胞为0分，<25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，>75％为4分；染色的深度以多数细胞的显色反应为准，着色强度计0～4分：无色为0分，淡黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色为3分，棕褐色为4分。将上述两项指标的评分相加。每张片分别由2个观察者进行盲法测定，最后取两观察者所得平均值。1.4统计学处理使用SPSS11.0统计软件，多组数据间的比较采用单因素方差分析或独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。[NextPage]2结果2.2Doxycycline对HepG2细胞凋亡的影响本研究选用5、20mg/L两个药物浓度观察其对HepG2细胞凋亡的影响,在24h后各组凋亡率差异无统计学意义（P>0.05），而在作用48、72h后各实验组细胞凋亡率较对照组明显增加，P<0.01（表2，图2）。2.3Doxycycline对HepG2细胞FasL、Fas及MMP-2蛋白表达的影响本研究选用20mg/LDoxycycline作用HepG2细胞观察对FasL、Fas及MMP-23种蛋白表达的影响，作用48h后，FasL、Fas及MMP-23种蛋白表达见表3。其中FasL蛋白表达积分较对照组明显增加(图3)，MMP-2蛋白表达积分较对照组明显降低(图4)，而Fas蛋白表达与对照组相比差异无统计学意义，P>0.05(图5)。3讨论细胞凋亡是1个比较复杂的过程，可通过多条启动途径实现，其中膜受体途径（Fas/FasL）是最重要的途径之1。LiuJ等［7］发现Doxycycline可通过Fas/FasL介导的膜受体途径诱导T淋巴细胞凋亡，最近研究报道Doxycycline能够明显抑制人胰腺癌细胞增殖，并证实其主要通过Caspase依赖的细胞凋亡发挥作用［3］。有报道表明人肝癌细胞系HepG2表面Fas有较强的表达［8］。本研究结果显示20mg/LDoxycycline作用HepG2细胞48h后FasL蛋白表达明显增加，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05），而Fas蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。提示Doxycycline可能通过上调细胞表面FasL的表达而启动Fas/FasL介导的信号传导途径诱导细胞凋亡。药物对肿瘤的抑制作用机制往往是多方面、多途径的，同样Doxycycline通过何种途径影响细胞FasL及MMP-2表达，其具体机制尚不完全清楚，有待做更进1步的实验研究和机制探讨。但初期的体外研究得到了较理想实验结果，有望为肝癌的临床诊治寻求1种新的药物治疗。【
浙公网安备 33021202002483