【doc】癌胚抗原和增殖细胞核抗原与中耳胆脂瘤上皮

【doc】癌胚抗原和增殖细胞核抗原与中耳胆脂瘤上皮 癌胚抗原和增殖细胞核抗原与中耳胆脂瘤 上皮 中国耳鼻咽喉头魏外科/2006年9月,第13卷,第9期 癌胚抗原和增殖细胞核抗原与中耳胆脂瘤上皮 苑铁军,仇沂洲,张凤英,刘清明,韩在文 (山东省潍坊市人民医院耳鼻咽喉科,山东潍坊261041) [摘要】目的观察癌胚抗原,增殖细胞核抗原在中耳 胆脂瘤上皮中的表达情况,分析其在胆脂瘤上皮增殖演 变过程中的作用.方法应用免疫组化SP染色方法和计 算机图像分析系统,检测癌胚抗原,增殖细胞核抗原在 32例Jla__JlH瘤上皮和14例胆脂瘤患者外耳道皮肤中的表达 ‘情况,并做比较.结果增殖细胞核抗原在胆脂瘤上皮 各层细胞均存在较强表达,主要定位在胞核,染色由基 底层向表皮层逐渐减弱,外耳道皮肤表达较弱,主要集 中在基底层及基底上层:癌胚抗原主要在胆脂瘤上皮的 颗粒细胞层及表皮层表达,少数在外耳道皮肤的基底层 表达.各组间胆脂瘤上皮各指标阳性细胞率和光密度值 均高于外耳道皮肤,和外耳道皮肤间的比较有高度差异 性.皮下结缔组织伴随着大量的淋巴细胞和浆细胞,中 性粒细胞和巨噬细胞,与胆脂瘤上皮中的阳性率呈一致 趋势.同一患者胆脂瘤上皮中癌胚抗原,增殖细胞核抗 原高表达,利用SPSS10.0软件包进行统计学分析,存 在正相关关系(P<0.01).结论癌胚抗原,增殖细胞 核抗原在胆脂瘤上皮的表达从不同方面反映了胆脂瘤上 皮的过度增生和角化,二者之间可能有协同作用,共同 促进胆脂瘤上皮细胞增殖与分化:上皮下炎症反应可能 是角化细胞过度增殖的一个原因,为胆脂瘤发病机制提 供新的理论依据,便于指导临床. [关键词】胆脂瘤,中耳:癌胚抗原:增殖细胞核抗原: 免疫组织化学 Associationofcarcinoembryonic,proliferativecell nuclearantigenexpressionwithhyperprOl-feratiOn inmiddleearcholesteatoma YUANTiejun,QIUYizhou,ZHANGFengying,LIU Qingming,HANZaiwen 伴有胆脂瘤发生的慢性中耳炎是一种持续性的 中耳黏膜骨膜疾病,其组织病理学特征是上皮细胞的 第一作者简介及通讯:苑铁君,男,吉林人,医学硕士,副教授,主 要从事耳鼻咽喉科临床研究工作. 通讯作者:仇沂洲(Email:Doctorqiuyzh@hotmailcom) (DepartmentofOtoIaryngoIogy,WeifangPeople’S Hospital,Weifang,Shandong,261041,China) Correspondingauthor:Doctorqiuyzh@hotmail.com [ABSTRACT】OBJECTIVETodetecttheexpression andIOCaIizationofCarcinoembryOnicfCEA1 andproliferativecellnuclearantigen(PCNA),in humanmiddIeearchoIesteatoma.andtoevaIuate theirrOIesintheProIiferatiOnofchOIesteatoma eP1dermis.METHODSThesPecimensofthe middleearcholesteatomatissuefrOm32casesand externaIearskinfrOm14caseswereexaminedby immunohistochemicalSPmethod.TheCEAand PCNAexpressionwasdetectedwithcomputerimage analysis.RESUL-TSAll32samplesofcholesteatoma showedastrongerexpressionofPCNAthanthatin theexternaIearskin.CEAdemonstratedthepresence ofproliferatingcellsintheepidermalandbeadcelI layers.Thereweresignificantdi仟erencesbetween cholesteatomatissueandthenormaIexternaIearskin. TheexpressionrateofCEAandPCNAalsoshoweda significantdifferenceinthetwogroups.Theexpression wasaccompaniedWithnumerousIVmPhocytes, plasmocytes,neutrophilsandmacrophages.Thehigh expressionofCEAwascorrelatedwithhighexpression ofPCNAfP<0.01).CONCLUS10NThedetectionof theexpressionofCEAandPCNAwerecorrelatedwith thehighproliferationofcholesteatoma. 【Keywords】Cholesteatoma,MiddleEar;Carcino— embryonicAntigen;ProliferatingCellNuclearAntigen; lmmun0histochemistry 失调性高度增生与角化.我们的研究检测了癌胚抗原 (cholesteatomaantigen,CEA)和增殖细胞核抗原 (proliferativecellnuclearantigen,PCNA)在胆脂瘤 上皮和外耳道皮肤的表达情况,进一步探讨胆脂瘤上皮 高增殖分化和角化的机制. CHINARCHOTOLARYNGOLHEADNECKSURGISeptember2006,Vo1.13,No.9641 中月,第13格,篇g期 1.1组织标本.32例胆脂瘤组织及14例外耳道皮肤 (取干32{~EJ胆脂瘤患者中)从潍坊市人民医院耳鼻咽 喉科近1年的中耳手术获得.其中男25例.女7倒.年 龄13N68岁.平均(391?177)岁.所有标本离体 后立即用中性福尔马林固定,石蜡包埋备检.中耳胆脂 瘤包括原发性(先天性和君天原发性),继发性. 12主要试剂.CEA抗体,PCNA抗体.SP试剂盒购 自北京中山生物技术有限公司 1.3方法常规石蜡包埋.作4m厚连续切片.一部 分做HE染色以明确诊断.另一部分行免疫组化染色, 染色步骤按SP免疫组化试剂盒 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 进行. 14结果评定.光学显微镜放大200倍下阳性细胞计 数,每片取5个视野200个细胞中阳性细胞的吾分 率+取其均值? 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差.正常皮肤与胆脂瘤上皮的差异 用t检验. 计算机图像分析采用北京航空航天大学CMIAS系 列多功雒真彩图像分析仪对染色结果进行定量分析,每 例标本切片于200倍视野下,选取不相重叠的5个代表 性部位.测量上皮阳性细胞的平均光密度值,取其均值 为该标本测量结果 1.5统计学分析a所有数据均采用?s表示.应用 SPSS10O软件包.对胆脂瘤组织及外耳瑾皮肤组织 CEA与PCNA染色阳性细胞率.平均光密度值行方差分 析,Pc005为差异有显着性. 21组织病理学检查胆脂瘤上皮组织是多屡角化上度 (基质)和免疫细胞及周边基质(如肉芽组织)混杂 在一起.膻脂瘤上皮是复层鳞状上皮.包括基底层, 棘层,颗粒瑶和角质层.而角质细胞占整个上皮细胞的 95% 22免疫组织化学染色结果. 221CEA~R性染色为胞膜和胞浆出现棕黄色颗粒状 (图1.图2)e32倒胆脂瘤上皮申有29倒(906%) 染色,定位于棘层颗粒细胞层.表皮层.阳性细胞 率为513750%?126666%.平均灰度1274167? 128679.14例外耳道皮肤中有4例(286%)呈弱阳 性表达,主要定位于基底层.阳性细胞率为20025% ?02392%.平均灰度1926167?177905(表1.表 2].胆脂瘤皮下的肉芽蛆织中亦在部分阳性细胞出现 2.22PCNA~Bt’$染色主要在细胞楦.呈棕褐色细颗粒 状(图3.图4)46倒标本中均有pC酬生表达.在外 64.2CHINARCHoT口L且 GOLHEADNECKSURG/September2006.Vo1.13.No.9 中国耳鼻咽啦头魏外科/2006年9月.第13卷,第9期 口:王;托Pcli=u椎{干z歪 葶兰…::茹酱::’:孟 sP日lI,1 表1CEA,PCNA~B性细胞率,平均灰厦 塑塑(平均堡(? 胆嚣瘟?直51.拍1267 外耳道?皮20O?024 寰2CEA,PCNA~R性例数,阳性率 搬总剖敦 粪型fn) 胆脂箍上皮32 蚪耳薅上玻14 对照擅20 阳性恻越隅性翠<% 2A相关性分析结果.CE;k,PCNA在胆膳宿上皮组织 中部呈现高表达趋势,经相关回归分析二者之间呈正 相关关系.相关系数CEA与PCNAr:09896876,P O们厦发性与继发性胆脂瘤cEA和PcNA日性率比 较(表3),均无统计学差异(P,O05) 表3原发性与继发性胆脂瘤阳性倒数,阳性串 组缎盛铡敛 娄型(nJ 原发性胆脂癌16 发性腥脂痼16 对照鲳20 口性倒站性隼(%】 CEA~--种细胞表层的糖蛋白.Pignatelli等…研 究表明.cEA是一种新前细胞问黏附分子.在某些肺瘤 申.CEA的表达己经很熟知.但在慢性皮肤病的角化细 管的炎性上皮中.CEA的表述也己被报道.这些发现 表明,CEA能够导致上皮细胞的高度增生Sankovic? Babic等从慢性胆脂瘤型中耳炎患者申耳腔白勺不同部 位取得的118块组织块进行分析.发现这些上有CEA的 表达,主要持布于蝼状上皮,黏膜下层和结缔组织问 尤其分布莅纤维增生基质的胶席纤维. 本研究发现.胆脂瘤组织与外耳道皮肤相比. CEA在胆脂癌上皮组织中的表达有较高的阳性率.推 测可麓与胆脂瘤的发生有一定的关联.作为细胞黏附蛋 自,CEA在组织细胞内不同的分布特征,厘映着不同的 功能状态.在相对正常的外耳道皮肤中,cEA均匀地表 达在表皮的基底层上.而在胆脂癌上皮组织中.CEA 分布于细胞的各个部位.包括细胞与细胞间和细胞与细 瞻外基质结台处,这样就可以发挥黏附分子的生物学特 性.由于胆脂瘴上皮及正常皮肤的增生程度有差异,生 物学特征不同,故对CEA的表这行为也各有差异.本实 验发现在外耳道皮眭CEA主要分布在基底层纽胞 胞浆及周围的鄙分胞膜.而在胆腊瘤上应中,CEA可 遍及整个细胞膜及胞浆.有时甚至在周围的基质中亦有 分布在胆脂疤上皮的表达强度高干在外耳道皮肤的表 达.也就是说.胆脂瘤上皮的高度增生程度与CEA在胆 脂瘤上皮细胞中的表达分布有一定的关联性CEA的定 位方式和表达强度在一定程度上反映组织的增生分化水 平.对研究外耳道皮肤的高增殖性有较高参考价值本 研究还发现,在不同的胆脂瘤上皮组织与外耳道皮肤组 织中.都可有不表达CEA的标本存在.它们之间的差异 亦具有统计学意义.推测这可能胆脂瘤上庄细胞在失调 1生增生的过程中其表达CEA的基因组被封闭所致.但本 实验尚不能证实.也就是说,在病理结果证实同为胆脂 瘤上皮的组织中,为什么会出现CEA阴-性结果,其机制 有待进一步阐硝.胆脂瘤上皮下炎症反应越重,CEA表 这明显增强.CEA的表达伴随着大量的淋巴细胞和浆细 胞,中性粒细胞和巨噬细胞.这同Sankovic—Babicr2]研 究一致炎症是刺融上皮细胞增生的原因之一但是. CEA是否会影响淋巴细胞的迁穆和分化,或者说CEA 对炎症细胞是否具有趋向性,是否促其生长,辅助黏附 分子的作用,尚需进一步研究总之通过本实验发 现.CEA的异常表这.可能是胆脂瘤发生,发展众多 步骤中较为关键的环节+而且.术后对胆脂瘤标本进行 CEA的检测有助于临庥医师对胆脂痛的生物学特征做 出正确的判断.及对术后是否复发和其他综合治疗做 出台理选择o PCNA又称周期蛋自,是一种核内蛋白质,在G1 胞中.CEA高表达的数据还比较少.在胆囊和肝外胆期PCNA表达逐 渐增加.S期达高峰.而G2期和M期减 CHINARCHOTOLARYNGOLHEADHEcKSURGtSeptember2006.Vo 1.13.No.9643 中国耳鼻咽喉头颈外科/2006年9月,第13卷,第9期 少,G0期基本无表达,在正常己分化的非增殖细胞中 检测不到. PCNA是目前应用最广的用于检测细胞增殖活性的 指标.Desloge等通过对人类胆脂瘤组织和正常组织 的DNA研究分析,并没有发现1111瘤组织的染色体异 常,也没有基因的突变,所以胆脂瘤不是肿瘤.我们的 研究表明,1111瘤上皮中PCNAr~E]性细胞分布在1111瘤 上皮的全层,以棘层细胞为多,说明棘细胞层,颗粒细 胞层及表皮层部分细胞仍具有细胞分裂的能力.外耳道 皮肤中阳性细胞主要分布在基底层及基底上层.正常皮 肤中细胞分化过程从细胞与基底层分离后开始,而1111 瘤上皮从基底层脱落的细胞仍然未成熟并保持细胞增殖 的能力,这可能是1111瘤的高度增殖的组织学基础.同 一 患者1~11瘤上皮和外耳道上皮的表达呈平行性,说明 外耳道上皮细胞活性亦有增强,这支持1111瘤形成的上 皮迁入学说,同祝威等研究结果一致.同时我们也注 意到在同一标本中的不同部位也表现出增殖的差异,上 皮下组织炎性细胞浸润多的部位,PCNA表达越高,也 就是说1111瘤上皮细胞的增殖能力受中耳腔微环境的影 响,而微环境的构成除炎性细胞浸润以外,尚有细胞 因子等,任晓勇等J用免疫组化法检测了1111瘤及外耳 道的白细胞介素-1的表达,结果1111瘤与外耳道皮肤相 比较有显着差异.上皮下炎症愈重,细胞因子生成愈 多,细胞因子增多,将加重炎症反应,通过控制炎症, 或应用单克隆抗体封闭细胞因子受体可降低细胞的增殖 能力,从而达到预防和治疗1111瘤的目的.但是细胞增 殖能力的提高,炎症细胞浸润以及细胞因子之间的关系 不很明确,所以胆脂瘤上皮增殖能力提高的机制尚需进 一 步研究. 原发I’~lAll瘤(包括先天性和后天原发性)与继 发性胆脂瘤CEA和PCNA阳性比较,均无统计学差异, 但它们的病因不同,高增殖性亦不同.本实验可能例数 少,未能显示出来,这里不做单独讨论. 总之,胆脂瘤的高增殖性是主要的生物学行为,作 者认为,这种生物学行为不是单一因素造成的,而是多 种因素相互作用的结果.CEA与PCNA呈高水平表达,且 二者之间有显着相关性,CEA;~IPCNA异常表达可能共同 参与了1111瘤的发生,发展,并与其高增殖活性有关. 1.PignatelliM.DurbinH.BodmerWF.Carcinoembryonic antigenfunctionsasanaccessoryadhesionmoleculemediating colonepithelialcell—collageninteractionsProcNatlAcad 1545 ScienceUSA.199087:1541— 2.Sankovic-BabicS,Sofronic—MilosavljevicLjCarcinoembryonic antigeninchrOnicotitismediawithcholesteatomaSrpArh CelokLek..2000128:80—83 3DeslogeRB,CarewJF,FinstadCL,eta1.DNAanalysisof humancholesteatomas.AmJOto1.1997.18:155—159 4祝威,黄冬雁,井玲,等上皮细胞增殖和凋亡在中耳胆脂瘤 发病学的意义临床耳鼻咽喉杂志,2001,15:291—295 5.TanakaY,ShiwaM,KojimaH,eta1.Astudyonepidermal proliferationabilityincholesteatoma.LaryngOscOpe,1998, 108:537—542. 6.任晓勇,陈文弦,崔鹏程,等.中耳1111瘤上皮中自介素一1a的表 达.中国耳鼻咽喉头颈外科,2005,12:367—369 (收稿日期:2005—07—26) 编辑沈懿 644CHINARCHOTOLARYNGOLHEADNECKSURG/September2006,Vo1.13,No.9