细菌数量测定---标准平板计数法

细菌数量测定---标准平板计数法细菌数量测定---标准平板计数法一、实训目的1、掌握菌液稀释的方法和步骤。2、掌握浇混接种的操作步骤。3、掌握菌落计数的原理与方法平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即代表原样品中的一个单细胞。二、实训原理统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。三、实训仪器和材料1、仪器：恒温培...

细菌数量测定--- 标准平板计数法一、实训目的1、掌握菌液稀释的方法和步骤。2、掌握浇混接种的操作步骤。3、掌握菌落计数的原理与方法平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即代表原样品中的一个单细胞。二、实训原理统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。三、实训仪器和材料1、仪器：恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅，电热套、托盘天平吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、试管架、酒精灯2试剂：大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂培养基），生理盐水、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水四、实训步骤（一）培养基配制与灭菌1.生理盐水：180mL/2组→分16支（9mL/支）→加塞包扎灭菌2.营养琼脂培养基：330mL/2组→加热煮沸→溶解→调pH=7.2±0.2→分4个→加塞包扎灭菌(二)仪器包扎（每组用量）培养皿7套1mL吸量管7支，包扎灭菌（三）菌液稀释1、编号（1）无菌平皿7套，分别标记为10-4、10-5、10-6各2套，留一平皿做空白对照。2、标记(2）6支盛9mL生理盐水的灭菌试管一次标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6（四）浇混接种1、取样：用3支无菌吸管分别精确吸取10-4、10-5、10-6的的稀释液0.2mL，对号放入编好号的培养皿中。2、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基约15~20mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，于37℃培养箱中倒置培养24h。（五）计数取出平皿，观察并计算菌落数。一般选择平皿上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的菌落数最合适。算出同一稀释度2个平皿上的菌落平均数，并按下列公式计算：活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5检验结果活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5活菌数/mL平均21平均21平均21菌落数10-610-510-4稀释度

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