、实验目的学习离体蛙心灌流方法，并观察温度、不同离子、神经递质及酸碱度等因素对心脏活动的影像，加深理解内环境相对稳定的生理学意义。二、实验原理窦房结或静脉窦是心脏节律性活动的正常起搏点，但要维持心脏的正常纪律性活动，还需要一个适宜的理化环境（即相对稳定的内环境）。因此，利用蟾蜍的离体心脏，用理化特性近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间内仍能保持节律性的舒缩活动。改变灌流液的成分，这种节律性的舒缩活动会随之发生改变，说明内环境理化因素的相对稳定是维持心脏正常节律性活动的必要条件。三、实验材料蟾蜍，蛙类手术器材，蛙钉，蛙板，双凹夹，试管夹，蛙心插管，蛙心夹，滴管，张力换能器，滑轮，任氏液，40摄氏度任氏液，无钙任氏液，0.65%NaCI,2%CaCI,1%KCl四、实验步骤暴露心脏：取蟾蜍一只，用探针刺毁脑和脊髓后，将蟾蜍仰卧固定在蛙板上，用镊子提起胸骨后端腹部的皮肤，剪一小口，然后将剪刀由切口伸入皮下，向左右两侧锁骨外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。用镊子提起胸骨后端的腹肌，在腹肌上，剪一小口，将大剪刀伸入胸腔内，剪断胸肋骨和左右锁骨，使创口成一个倒三角形。用小镊子提起心包膜，用小剪将心包膜剪开，暴露心脏。插蛙心：插管用连线蛙心夹在心室舒张期夹住心尖约1mm将蛙板倒转，使动物头端靠近实验者。结扎右主动脉，在左主动脉下穿一线以备固定插管用。用小剪在靠近动脉圆锥处，朝心脏方向将左主动脉斜形剪开一半（注意：既要剪破血管让血流通出，又不把血管剪断）。取一管尖大小适宜的蛙心插管，注入少量任氏液入管内，左手用小镊子夹住切口上缘轻轻上提，使切口扩大。右手持蛙心插管插入动脉内，直达动脉圆锥，然后左手放下镊子，轻轻向右提起蛙心夹上的连线，使心室与动脉圆锥成一直线。在心室收缩时，右手向前并略向左推动蛙心插管，使之进入心室（如进入心室，插管中的液面会随着心室的舒缩而上下移动）。最后结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，防止标本滑落。提起插管剪断左右侧动脉分支、前后腔静脉（注意勿损伤静脉窦和心房），取出心脏。用任氏液反复冲洗心脏直至插管内任氏液完全澄清无色。在插管的下1/3处画一刻度或结一线作为标志，每次换任氏液时，应使液面与此线相平。连接装置：用连线蛙心夹在心室舒张期夹住心尖约1mm并使蛙心夹的连线通过滑轮与张力换能器相连，换能器应固定在蛙心插管的上方。启动PLab生物医学信号采集处理系统，设置好仪器参数，开始采样观察。观察项目：1、描记正常蛙心搏动曲线：曲线的疏密显示心博的节律性，曲线的幅度
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示心室收缩的强弱，曲线的顶点表示心室收缩程度，曲线的基线表示心室舒张的程度。2、温度的影响：将蛙心任氏液吸出，换入40摄氏度的任氏液，观察曲线变化。待效应明显后，吸出灌流液，换任氏液，直至心脏收缩曲线恢复正常。3、离子的影响：（1）、缺Ca2+K+:将插管内任氏液更换为0.65%NaCI溶液，观察曲线变化。待效应明显后，用新鲜任氏液反复换洗，使心博基本恢复正常，在进行下面的实验，以下各项实验均同此。（2）Ca2+加1滴2%CaC溶液于新换入的任氏液中，混匀，观察心脏收缩曲线变化。（3）K+:加1—2滴1%KC溶液于新换的任氏液中，混匀，观察心脏收缩曲线变化。4、神经递质的影响（1）肾上腺素：加1—2滴1:10000肾上腺素溶液于新换的任氏液中，混匀，匀，观察心脏收缩曲线变化。5、酸、碱的影响：加1—2滴3%乳酸溶液于新换的任氏液中，混匀，观察心脏收缩曲线变化，待效应明显后再加入1—2滴2.5%NaHCO溶液，混匀，观察心脏收缩曲线变化。6、药物的影响（1）强心苷的影响：将插管内的任氏液吸出，换入等量无钙任氏液，观察曲线变化。当心脏出现明显抑制时，加入1—2滴0.025%毒K,观察曲线变化，当心脏活动较为恒定时，再加入3—4滴2%CaC溶液，观察曲线变化。
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