有人对293T细胞中的SV40大T抗原有研究么?
293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高,转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地
检测
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到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
形态特点上皮细胞
致瘤性+
产物或抗原大T抗原
染色体核型亚三倍体人细胞系。染色体众数为64,30%的细胞有64 条染色体。4.2%的细胞染色体数目更多。多数细胞der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13),还有四条标记染色体,有的细胞另有5条标记染色体。der(1)与M8 (or Xq+)常常成对出现。N17 与N22各有四条。值得注意的是多数细胞有三条X染色体,两条Xq+,一条Xp+。
生长特性粘附
文献评价293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞。
表达转染的腺病毒5的基因。
早期报道认为此细胞含有Ad 5基因组左端和右端,现已清楚仅含有左端序列。
此细胞系人腺病毒滴度高。
室温不贴壁,37℃几日后重新贴壁。
表达由整合素beta-1 亚基与玻基结合素受体alpha-v 亚基组成的玻基结合素细胞表面受体. The Ad5 insert was cloned and sequenced, and it was determined that a colinear seqment from nts 1 to 4344 is integrated into chromosome 19 (19q13.2).
传代293:弃培养基,含0.25% 胰酶, 0.03% EDTA消化液洗涤,弃去,加1-2ml消化液室温或37℃消化。
加入新鲜培养基,吸出,分到新培养皿中。一传二至一传四。
293T:生长快,通常倍增时间不到一天。每3~4 天1:10至1:20稀释,5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松,可只用EDTA消化,不要用胰蛋白酶过度消化。
培养基更换每2-3天一次
冻存液95%培养基;5%,DMSO;culture medium 95%; DMSO, 5%;
培养条件A TCC培养基:90%的MEM Eagle,加入2mM L-谷氨酰胺,1.5g/L碳酸氢钠,0.1 mM必需氨基酸,1.0 mM 丙酮酸钠;10%加热灭活的马血清
37℃培养
浙公网安备 33021202002483