首页 专业实践总结

专业实践总结

举报
开通vip

专业实践总结硕士研究生专业实践总结 姓 名   学号   校内导师   专业领域 生物工程 学 院 生物工程学院 实践单位名称   企业导师   研究方向   实践简要内容及成果 本课题初步研究了部分野生丝状真菌对甾体化合物的羟基化作用,以从自然界分离纯化出的700余株丝状真菌为待筛菌...

专业实践总结
硕士研究生专业实践总结 姓 名   学号   校内导师   专业领域 生物工程 学 院 生物工程学院 实践单位名称   企业导师   研究方向   实践简要内容及成果 本课题初步研究了部分野生丝状真菌对甾体化合物的羟基化作用,以从自然界分离纯化出的700余株丝状真菌为待筛菌株,以左旋乙基甾烯双酮、酸性脱羧物、雄甾-4-烯-3,17-二酮和16,17α-环氧黄体酮为底物进行生物催化,筛选具有羟基化能力且催化特异性较好的优势菌株,同时期望通过新型催化系统的生物转化作用得到潜在可利用的新型甾体化合物。 性质(√) 应用性研究( √ ) 开发性研究( ) 其他( )   姓 名 职称及职务 工作单位 签字 组长         评审组成员                                 校内导师意见: 签字: 年 月 日 企业导师意见: 签字: 年 月 日 学院意见: 主管院长签字: 年 月 日 评审结果 ( )票同意 ( )票不同意 综合 评价 ( )通过 ( )不通过                                 (学院盖章) 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 日期:      年      月    日 填 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 说明 1. 专业实践是专业型硕士研究生培养过程中的重要环节,是检验和监督培养过程的重要依据,是学校对专业型硕士研究生毕业进行考核的基本依据。 2. 导师按照本专业培养方案的要求,根据因材施教的原则,结合硕士专业学位研究生本人的特点,全面考虑,合理安排,指导其制订个人实践计划,对其实践目标、内容、方法和进度做出计划和安排。 3. 实践计划一旦确定就应认真遵照执行,无特殊原因,原则上不予更改。因特殊情况确需更改者,应提出 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 面修改计划申请,经导师和学院同意后报研究生处备案。 4. 实践计划一般应在第二学期初,由导师(课题组)与研究生共同制定,并由导师负责,专业实践领导小组审核签字,方可执行。实践时间不少于半年(应届毕业生不少于1年)。 5. 研究生应按个人专业实践计划进行实习,实践结束后,撰写总结报告。专业实践总结报告应为5000字以上。报告内容一般包括实践的目的和意义、实践内容和实践计划执行情况等。专业实践总结报告最晚在第三学期末进行,报告采取全校公开方式进行。 6. 经专业实践领导小组考核。评价记录为“通过”或“不通过”。“通过”后方能获得学分。 7. 此表一律用A4纸正反面打印,一式1份。申请学位论文答辩时,由各相关学院放入学生本人答辩材料里。 1.专业实践目的和意义 实践背景 甾体化合物具有广泛的药理活性,它们在维持生命、调节性功能、皮肤疾病治疗及生育控制等方面有着重要的作用。其甾体母核结构如图1所示。例如各种性激素是治疗性机能衰退和内分泌失调的主要药物,也是治疗乳腺癌、前列腺癌的辅助治疗剂,同时又是近年来需求量很大的口服避孕药的主要成分。肾上腺皮质激素用于治疗各种炎症和过敏性休克等。近年来,甾体药物在医疗领域的应用范围不断扩大,被广泛用于心血管、淋巴白血病、人体器官移植以及老年性疾病等,成为了仅次于抗生素的第二大类药物。 图1 甾体化合物骨架结构 Fig. 1 The core structure of steroid 雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)是制备孕激素、皮质激素、利尿剂、雄激素和避孕药等甾体药物的重要中间体,在其甾体母核引入11α-羟基能增强甾体药物的抗炎活性。雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)的11α羟基衍生物是制备依普利酮(Eplerenone,商品名Inspra,第一个获准上市的选择性醛固酮受体阻断剂)的关键中间体。 甾体的微生物转化(microbial transformation of steroids),即微生物选择性地修饰或改造甾体化合物的分子结构,使其转化为更有价值的新化合物,它是通过微生物产生的酶催化进行的。大量的研究表明细菌、放线菌、酵母、霉菌的某些菌种可以使甾体化合物的特定部位发生有价值的转化反应,微生物在甾体激素转化中的应用日益扩大。 从自然界获取的天然结构的甾体化合物往往活性极低,为增强其药用活性并减少毒副作用,需要对其结构的特定部位进行改造。最初的研究主要采用全化学合成法,但是甾体化合物结构复杂,含有多个不对称中心,因此其合成过程涉及多步繁琐的反应。例如在脱氧胆碱合成可的松的过程中,甾体母核的C11β位羟基化就需要十步反应。此外,化学合成法立体选择性差、耗时而且经济效益差。 微生物转化专一性强,具有较高的立体选择性,副产物少,弥补了化学合成法的不足。同时微生物转化条件温和,步骤少,避免了大量有机溶剂和化工原料的使用,因此微生物转化过程是一个环境友好型绿色过程。目前甾体药物的生产多采用半合成法,即利用化学合成和微生物转化相结合的工艺路线,其中关键几步反应采用微生物转化法实现。如11α-羟基化,11β-羟基化,A环的1,2位脱氢等。当前微生物转化技术己成为许多甾体药物或其中间体合成路线中不可缺少的关键技术。 C11α-羟基化反应是甾体激素类药物在生产过程中重要的转化反应之一。通过C11α-羟基化反应可以引入高生理活性基团,从而大大增加疗效,并减少副作用和改变作用的专属性,具有重大意义。 甾体分子特定位点上的羟化对于化学合成来说非常困难,除了甾体的C17位上能引入一个羟基,其他位置都很难用化学方法导入。1952年美国普强(Upjohn)药厂的Peterson和Murry最早发现了微生物对甾体Cl1α-羟化反应,他们成功地用黑根霉使孕酮一步转化成C11α-羟基孕酮。巧妙地解决了皮质激素合成中的关键问题:在C11位上引进氧原子,省去了化学合成的10个工序,反应专一性强,并且转化率高达90%以上,从而开辟了甾体微生物合成的新途径,促进了甾体药物工业的迅速发展。1958年,我国的著名化学家黄鸣龙教授用黑根霉(R. nigricans)成功地在16α,17α-环氧孕甾-4-烯-3,20-二酮的C11位进行了11α-羟基化,开创了我国甾体药物生物合成与化学合成相结合的甾体医药工业。 目前,工业生产中用于甾体C11α-羟化转化反应的微生物主要有黑根霉(R. nigricans)、赭曲霉(Aspergillus ochraceus)以及黄曲霉(Aspergillus flavus)、绿僵菌(Metarhizium sp.)等。考虑到霉菌中羟化酶系较丰富,本研究收集了不同来源的曲霉、根霉、犁头霉、绿僵菌等约100支霉菌菌种,对其雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)11α-羟化能力进行筛选,确定其中一株金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae M28具有较强的在AD上引入11α轻基的能力,并对此菌株进行了诱变育种提高其转化能力,在此基础上进行代谢调控研究以提高其转化效率。 实践意义 本研究旨在利用微生物转化方法在雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)上专一性引入11α羟基,为工业生产依普利酮提供关键中间体。本研究从不同来源的霉菌中筛选得到能在雄甾-4-烯-3,17-二酮上引入11α羟基的菌株Metarhizium anisopliae M28,通过菌种诱变和代谢调控,使转化率提高到65%以上,并对产物结构进行了鉴定。针对甾体底物水不溶性导致的投料浓度低、转化效率不高的问题,根据近年来的研究,考察了β-环糊精对甾体底物溶解度和羟化反应的影响,进一步提高了投料浓度和转化效率,并从结构上进行论证。 其技术路线如下: 2. 实践内容和实践计划执行情况 1发酵培养基的选择 (l)葡萄糖1%;黄豆粉1%;调节pH为6.5 (2)葡萄糖3%;玉米浆2%;大豆膝0.5%;磷酸氢二钾0.1%;硫酸镁0.05%;硫酸亚铁0.002%;调节pH为6.5 (3)葡萄糖3%;玉米浆2.5%;硫酸氨0.15%;调节pH为4.5 (4)葡萄糖1%;酵母膏0.25%;玉米浆1.5%;硫酸氨0.5%;调节pH为6.5 (5)葡萄糖1%;黄豆粉0.3%;玉米浆2%;调节pH为6.5 (6)葡萄糖3%;玉米浆2%;硫酸氨0.15%;磷酸氢二钾0.1%;硫酸镁0.05%;硫酸亚铁0.002%;蚕蛹粉1%;调节pH为6.5 2菌种活化、筛选及纯化 将菌种接种至斜面PDA培养基上27-28℃培养4-5天左右,长出孢子后进行羟化活性的筛选。采用1号发酵培养基进行筛选。 发酵转化:250mL摇瓶,装液量40mL,12l℃灭菌25min,挖块接种;28℃,发酵培养24-48h在已经长好的发酵液内加入预先溶于热乙醇甾体底物AD,继续转化72h。 菌株筛选:发酵结束,1:1加入乙酸乙酯浸提12h以上,利用TLC的方法 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 样品,在紫外仪2537A下检测斑点,根据斑点深浅,筛选转化菌种。 对筛选得到的菌种按下列方式进行单菌分离,分离得到的单菌落进行发酵筛选,方法如下: 3诱变育种 用无菌水将孢子从斜面上洗下,用无菌玻璃珠将孢子打散,无菌纱布过滤备用。将上述菌液进行不同时间UV处理,置28℃黑暗条件下,培养7-10天,经初筛、复筛、精筛,斜面保存。 4转化条件控制 (l) 温度控制 采用正交试验所得最佳培养基,孢子悬浮液接种,接种量5%,220r/min,培养48h,加入终浓度2g/L的底物,继续转化72h.考察在24℃, 26℃, 28℃, 30℃,32℃及37℃不同温度下发酵,对转化率的影响。 (2) pH控制 采用以上优化的最佳发酵条件,考察不同pH(4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0, 7.5)对转化率的影响。 (3) 发酵时间控制 生长时间:采用以上优化条件,转化72h,考察不同生长时间(24h,36h,48h,60h,72h,84h及96h)对转化率的影响。 转化时间:在以上最优条件下,考察不同转化时间(24h,30h,42h,48h,72h,96h及120h)对转化率的影响。 (4) 接种量控制 在以上最优条件下,考察不同接种量(l.5%, 2.5%,5%,7.5%及10%)对转化率的影响。 (5) 底物投料量 采用以上优化条件,考察不同底物投料量(0.1%,0.15%,0.2%,0.25%,0.3%及0.4%)对转化率的影响。 (6) 底物溶解性与细胞通透性控制 a.无水乙醇的用量 因为甾体的水溶性极差,会对细胞产生一定的毒性,引起转化的反馈抑制。因此,我们先将底物用无水乙醇溶解再加入发酵液的方式进行投料。在底物投料量0.2%时,以3%、4%、5%和6%(v/v,%)的乙醇溶解底物,考察乙醇浓度对转化的影响。 b.表面活性剂 由于微生物转化的一般过程是底物 细胞内转化 产物,所以改善细胞膜通透性,促进底物向细胞内转移可提高转化率。我们考察Tween40,Tween80,Birj,span60和TritonX-100等表面活性剂对转化率的影响。 5 β-环糊精(CD)对底物溶解度的影响 CD的增溶作用能使底物迅速转移到菌体内部与酶接触,从而提高甾体微生物转化效率。由于β-环糊精不影响菌体的生长,因此其对轻化反应的促进作用主要来源于对疏水性甾体底物的增溶作用和转运效率的提高,这与文献报道一致。 将底物AD与CD加入到液体培基中, 250mL 摇瓶每瓶装40mL,将上述培养好的菌丝投入摇瓶中,使每瓶菌体浓度120mg/mL~130mg/mL。28℃,220r/min转化72h。 乙醇对照实验:将上述培养好的菌丝投入摇瓶中,使每瓶菌体浓120mg/mL-130mg/mL。AD用4%(v/v)无水乙醇溶解后,直接投入上述摇瓶。相同条件下转化72h。 底物投料浓度0.2%(w/v),CD加入量为8g/L(CD与AD摩尔比1:1 , MW: CD1135, AD 284),在1.3.6所述条件下转化,24h、36h、48h、60h和72h取样分析,并与4%无水乙醇溶解底物的投料方式比较。   3. 专业实践成果总结 (1)获得能在雄甾-4-烯-3,17-二酮上专一性引入11α-羟基的菌株Metarhizium anisopliae M28-203并优化发酵条件,最佳发酵条件为:最佳培养基为(6)号、发酵温度为30℃、最佳pH6.0-6.5、最佳投料时间在48h~60h、最佳接种量为5%、在投料浓度0.2%(w/v)时转化率达到65%左右。 (2)针对甾体水不溶性导致的投料浓度低、转化效率不高的问题,利用β—环糊精与雄甾-4-烯-3,17-二酮形成包合物的方法增加其在发酵培养基中的溶解度,使投料浓度提高到0.3%(w/v),转化率70%以上,并缩短转化时间。  
本文档为【专业实践总结】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享,如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服,我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
下载需要: 免费 已有0 人下载
最新资料
资料动态
专题动态
is_482581
暂无简介~
格式:doc
大小:55KB
软件:Word
页数:8
分类:
上传时间:2019-02-04
浏览量:24