利用中药药渣养灵芝菌

sciencea礼d丁echoto掣UF00aIndu5呻 讲究与摆讨 及生蛳话性成分敞硪究 陈合，赵燕，陈明。秦俊哲 (陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西成阳712081) 摘要：采用固体发酵技术，利用中药渣栽培灵芝茵。研究了灵芝 茵最适的发酵条件、子实体生长条件及其生物活性成分 (灵芝多糖及灵芝三萜化合物)和重金属的含量。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，灵芝茵固体发酵最适温度为26一一28℃，培养基含水量 55％r60％，pH5．0～6O，氧气充足，无需光照；子实体的适宜 生长条件为：温度25～30℃，空气湿度90％左右，pH4．0— 6O，氧气充足，需要光照。灵芝酸多糖含量：韩芝335％、赤 芝3．11％，甜芝403％。甜芝子实体中灵芝三萜含量为 113％；重金属含量均在安全范围内。 关键调：中药渣，固体发酵，灵芝菌，生物活性成分 Abstract：UsjnasOIjdfermenta!jonmethOdto cuIture Ga门00brma／uc』dL，mwi廿1herbaIresidues．the 00timumcOnditiOnsfOrsOlidfermentationand fruitbodVcuftivatiOnweredetermined，andthe mainbiOactiVecOmDonents．suchasGanod台rma ／Uc，(^』mpolvsaccharide(GLP)andqanodericacid (GA)，lhecontentsofheavvmetaIswereanaIyzed andmeasured，TheresuItsshowthatthe OptmnumcOnditionfor sOIidfermentatjOnby Ga几ode厂ma／uc矧L，mwithherbalresidueswere： temperature26～28℃．watercontentin cuIlure medium55％～60％．pH5O一6．O，suⅢcIentOxygen SupDIVandwithnOliqhtTOfruitbOdy，the temperature25～30℃，about90％airhumidity， pH4．O～6．0，suf—cientoxygensupplyandwith scattered—Iiaht．TheGLPcOntentSwere335％ (G． ／c【昭『aomK)，3．11％(G．见『c『(f㈣．R)and 4．03％(G． 1ucidum．S)． TheGAconlentinG． 山c『dum．Sfru什bOdvwas1．13％．ThecOntentsOf heawmelaIswerelOwerthannatIOnaIstandard． Keywords：herbresidues；s0IidfermentatiOn；Ganol丑erma 血c／乱，m；bioacfiVecompOnents 中图分类号：TS255．1文献标识码：A 文章编号：1002—0306(2006)10一0058一04 灵芝(G矾。如rmZ∽idum)俗称灵芝草，是一种珍 贵的药用真菌。它具有很高的药用价值，对人体有保 健作用，对疾病具有预防、治疗或抑制作用【1]。传统的 收稿日期：2006一02—10 作者简介：陈合(1956一)，男，教授，研究方向：食品生物技术与工程。 野外采集或人工栽培生产子实体(或菌核)受到野生 资源稀缺、子实体栽培生产周期长(4～5月)、生产受 气候等条件控制和生物活性物质含量低等诸多因素 制约[2-”，对灵芝的大量生产造成了阻碍。为了满足现 今人们对这一名贵药用真菌的需要，本研究采用固 体发酵技术，利用中药渣栽培灵芝菌并且研究了其 生物活性成分，旨在为灵芝菌的生产提供理论参考 依据。 1材料与方法 1．1材料与设备 韩芝、赤芝、甜芝 陕西科技大学生命科学与 工程学院菌种室提供；中药渣 陕西咸阳步长制药 有限公司。 YJ超净工作台，800离心机，303—3型电热培养 箱，CSl01—2A型银河电热鼓风干燥箱，DZF一1 (6050A)型福玛电热真空干燥箱，LS—C50L型立式压 力蒸汽灭菌锅，PYx—PHS隔水式电热恒温培养箱， RE一85C旋转蒸发仪，722光栅分光光度计，HSC一20 型高速冷冻离心机，紫外分光光度计。 1．2 实验方法 1．2．1 工艺流程 斜面菌种—+PDA活化—+二次活化—+转接制备二级种一培养 ，固体发酵一固体茵质 。转接制备三级种—+培养观察≮栽培子实体—，灵芝子 一样品制备一检测及活性成分分析 1．2．2培养基 1．2．2．1加富PDA培养基马铃薯300．09、葡萄糖 30．09、琼脂15．Og、KH2P043．09、酵母粉5．09、M毋04 0．89、VBl15嵋、VB27．5雌、加水至1500H1I，，pH自然。 1．2．2．2中药渣二级种培养基(培养基I)中药渣 88％、麸皮10％、石膏1％、蔗糖1％、KH2P040．4％、料 水重量比1：1．0—1．2，750mL玻璃瓶分装，pH自然。 万方数据 讲究与探讨 1．2．2．3棉籽壳二级种培养基(培养基Ⅱ) 中药渣 88％、麸皮10％、石膏1％、蔗糖1％、KH2P040．4％、料 水重量比1：1．2～1．4，750rnL玻璃瓶分装，pH自然。 1．2．2．4中药渣三级种培养基A(培养基11I)中药 渣80％、麸皮18％、石膏1％、砂糖1％、KH2P0d0．2％、 料水重量比1：1．4～1．5，13x30em聚丙烯塑料袋分装， pH自然。 1．2．2．5 中药渣三级种培养基B(培养基IV)中药 渣99％、石膏1％、料水重量比1：1．4～1．5，13x30em聚 丙烯塑料袋分装，pH自然。 1．2．2．6棉籽壳三级种培养基(培养基V)棉籽壳 80％、麸皮18％、石膏1％、砂糖1％、KH2P040．2％、料 水重量比1：1．4～1．5，13x30em聚丙烯塑料袋分装，pH 自然。 1．3灵芝菌质中有效成分的提取 1．3．1 灵芝菌质多糖(GLP)的提取【4，习提取过程见 图l所示。 灵芝菌质 脱脂、脱 滤渣 滤液(弃去)加}I ； 提取液 滤渣 浓缩，乙醇沉淀l 粗多糖 脱色，脱蛋白l 脱蛋白粗多糖 离子交 凝 GLP75 上清液 图1灵芝多糖分离提纯示意图 1．3．2灵芝酸三萜化合物的提取[6，71见图2。 l氯仿萃取 ● 蠹仿堕里鎏缠王堡灵芝酸粗品 图2灵芝酸三萜粗品的提取与分离 1．4分析方法 灵芝菌质多糖的测定：苯酚一硫酸法‘8’川；灵芝菌质 中水溶性蛋白质含量测定：考马斯亮蓝G-250法㈣； 灵芝菌质中灵芝酸三萜含量测定：紫外分光光度法 V01．27,20．10,2006 250nm处测定【111。 2结果与讨论 2．1 实验用中药渣的选择及组成分析 本研究采用咸阳步长制药公司的一种名为“香 菊”的中成药药渣，其药渣含水量适宜，性质均一，稳 定，无杂物，而且富含纤维素、木质素成分，适于灵芝 菌的培养，其化学组成为水9．3％，pH6．7，粗蛋白 0．97％，粗纤维65．6％，可溶性碳水化合物26．7％，重 金属极微。 2-2灵芝菌培养条件分析与控制 2．2．1 菌丝生长培养基的筛选 采用了三种不同的 培养基(培养基Ⅲ、Ⅳ、V)分别对菌种进行扩培，菌 丝生长的情况如表1所示。从表中看出，培养基Ⅲ最 适宜菌丝生长。分别将韩芝、赤芝和甜芝接种到中药 渣三级培养基A(培养基llI)中，观察菌丝生长情况， 其结果见表2。从表中可以看出，甜芝对环境的适应 能力最强，接种后2d便开始萌发，而且生长较快，平 均生长速度最大，培养29d左右基本全部满袋，长势 上优于其他两个品种。 表1不同的发酵培养基对菌丝生长的影响 培养基类别 菌丝生长观察 培养基m 培养基Ⅳ 培养基V 生长基本一致，菌丝浓密，粗壮，有少量黄斑产生 长势不齐，前期较快，后期生长基本停止，且分 泌色素形成黄斑 生长整齐，菌丝洁白，发菌过程中生长速度变 化不大 注：“+”表示菌丝长势一般，“++”表示菌丝长势强，“+++”表示 菌丝长势较强。 2．2．2灵芝菌固体发酵与子实体栽培条件的分析与 控制 灵芝菌固体发酵时将菌种接入袋中，进行菌 丝扩增。当菌丝满袋后，会在菌袋顶部生成子实体原 基，将此进行脱袋覆土栽培，控制合适的条件以得到 灵芝的子实体，二者的培养条件如表3所示。 表3灵芝基本生理特性表 分类温度(℃) 湿度 光照 空气pH 菌丝体 26～3060％左右 不需光 适当通风5—6 子实体 25．30 90％400～600W0．1％以下4N6 (空气) 烛光 (C0：) 2．3 固体发酵过程中相关指标的检测 2．3．1 固体发酵过程中生长曲线 以3d为一个单 位， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 发酵过程中韩芝、赤芝和甜芝在培养基Ⅲ中 接种后的平均生长速度，得到菌丝生长速度曲线如 瓜丽百丽渗≯ } 万方数据 万方数据 万方数据 利用中药渣培养灵芝菌及生物活性成分的研究 作者： 陈合， 赵燕， 陈明， 秦俊哲 作者单位： 陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西,咸阳,712081 刊名： 食品工业科技 英文刊名： SCIENCE AND TECHNOLOGY OF FOOD INDUSTRY 年，卷(期)： 2006，""(10) 被引用次数： 5次 参考文献(13条) 1.章克昌 药用真菌研究开发的现状及其发展[期刊论文]-食品与生物技术 2002(01) 2.庄毅 药用真菌新型(双向型)固体发酵工程[期刊论文]-中国食用菌 2002(04) 3.孙树英.张云.王磊 灵芝有效化学成分的研究 1997(01) 4.Structural features of immunologically active polysaccharides from Ganoderma lucidum 2002 5.刘美琴.李建中 灵芝多糖的研究进展 1998(03) 6.罗俊.林志彬 灵芝三萜类化合物药理作用研究进展[期刊论文]-药学学报 2002(07) 7.Shwu-Bin Lin.Chyi-Hann Li.Shiuh-Sheng Lee Triterpeneenriched exreacts from Ganoderma lucidum inhabit growth of hepatoma cells via suppressing protein Kinase C,activating mitogen-activated protein Kinases and G2-phase cell cycle arrest 2003 8.苏亚铃.程发良.李纠 灵芝菌生物活性多糖与总糖的测定[期刊论文]-食品科学 2001(09) 9.李晓晖.何云庆.李容芷 不同产地灵芝中多糖含量的测定 1997(02) 10.宋宏新.李敏康 生物化学与分子生物学实验技术教程 2002 11.Fang Qing-Hua.Zhong Jian-Jiang Two-stage culture process for improved production of ganoderic acid by liquid fermentation of higher fungus Ganoderma lucidum 2002 12.凌远育.郑有顺 段木及袋料栽培灵芝多糖,氨基酸和维生素的含量分析 1998(03) 13.邢增涛.唐庆九.周昌艳 不同灵芝子实体及粗多糖中微量元素及重金属含量分析[期刊论文]-药物系统 2002(01) 相似文献(5条) 1.期刊论文 秦俊哲.张洁.陈合.陈明 灵芝新型固体发酵菌质中活性成分的研究 -食用菌2005,27(1) 以中药渣为主要培养基质,对灵芝新型固体发酵菌质中多糖和氨基酸含量进行测定分析.结果表明灵芝药渣菌质中多糖含量是子实体中含量的2.4倍 ,氨基酸总量是子实体中含量的2.64倍,必需氨基酸是子实体中的2.67倍.试验表明:药渣菌质能促进灵芝菌丝生长,发菌快、长势好.从灵芝药渣菌质中提 取有效成分,具有原料资源丰富,方法简便,功能成分丰富等特点. 2.期刊论文 王芸芸.刘利军.马俊俊 甘草渣固体发酵后总黄酮的提取研究 -黑龙江畜牧兽医（科技版） 2009,""(12) 长期以来,工业化生产只对甘草中的甘草甜素(又名甘草酸)作为主要有效成分进行提取,而提取甘草酸后的甘草药渣则被当作废弃物遗弃,造成了环境 污染和资源浪费. 3.会议论文 庄毅.洪净 药用真菌双向性固体发酵工程与中成药药渣再开发 2006 本文对药材加工后剩留的各种残余成分药渣的利用进行了研究。文章阐述了药用菌"双向发酵"与药渣再开发，分析了"双向发酵"开发中成药药渣的 优势。 4.期刊论文 庄毅.洪净 药用真菌双向性固体发酵工程与中成药药渣再开发 -中国中药杂志2006,31(22) 中成药以中药材为原料,在中医药理论指导下,按 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 处方和 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 制成一定剂型的现成药物,它是中药的一个重要组成部分,估计现有中成药约8 000种 ,其中不乏历史悠久、疗效卓著、影响深远的品种,如六味地黄丸、小柴胡汤、丹参滴丸等. 5.学位论文 陈明 利用中药渣培养灵芝菌及生物活性成分的研究 2004 中药渣常被视为废物抛弃,自身的资源未被充分利用,提取药用成分后的中药渣尚保留许多有效成分,如大量的粗纤维、粗脂肪、淀粉、粗蛋白及微量 元素等,是培养药用真菌的优良原料,国内对利用中药渣培养药用真菌的报道很少,且缺乏对其有效成分的研究.该课 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 选择具有代表性的灵芝菌为试验菌 株,提出了"利用中药渣双向发酵培养灵芝菌及生物活性成分的研究".该文在中药渣原料资源和利用现状调查的基础上,选择咸阳步长制药有限公司的中成 药"香菊"的药渣为主要原料,进行灵芝菌固体发酵的研究,以中药渣、棉籽壳代料栽培灵芝子实体作对照,确定出固体发酵和灵芝子实体栽培的适宜条件 ,并对发酵产物(灵芝菌质)和栽培产物(灵芝子实体)中的主要生物活性成分进行了分析检测,采取水提醇沉法提取菌质多糖,苯酚-硫酸法测定固体菌质和 灵芝子实体中的多糖含量,研究灵芝酸三萜的提取分离方法,探讨了提取灵芝酸的特性(紫外吸收、显色、红外光谱、抗菌特性、薄层层析)、确定了灵芝 酸含量的测定方法,利用HPLC方法测定了固体菌质和灵芝子实体中氨基酸的组成,原子吸收法测定固体菌质、灵芝子实体、菌质水提多糖中As、Pb、Hg的 含量.以中药渣为主要原料,采用固体发酵法生产的灵芝固体菌质,其主要活性成分含量高于中药渣、棉籽壳代料栽培的灵芝子实体,重金属含量低,工艺简 单,成本低,周期短,可以作为代替子实体栽培而获取灵芝菌有效成分的一条重要途径,但对其药理、药效和毒理仍需进一步研究. 引证文献(4条) 1.张跃群.佘德琴.胡永进 中药渣有机基质栽培番茄试验研究[期刊论文]-长江蔬菜 2009(12) 2.蔡景义.周安国 中草药渣在动物生产中的应用[期刊论文]-黑龙江畜牧兽医 2009(1) 3.赵雯玮.陈祥贵.李鑫 微生物发酵在中药研究中的应用[期刊论文]-生命科学仪器 2008(10) 4.邹艳敏.吴静波.仰榴青.赵江丽.吴向阳 中药渣的综合利用研究进展[期刊论文]-江苏中医药 2008(12) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_spgykj200610016.aspx 授权使用：武汉大学(whdx)，授权号：314ec46e-6ce4-43c0-9289-9e4700f48226 下载时间：2010年12月9日