GB 6432-1994 饲料中粗蛋白的测定

中华人民共和国国家标准 饲 料 中 粗 蛋 白 测 定 方 法 GB/T 6432一94 Method for the determination of crude protein in feedstuffs 代替GB 6432一66 本标准参照采用[ISO 5983-1979《动物饲料一氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。 主腼内容与适用范围 本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 引用标准 GB 601化学试剂 滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备 原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸钱。加入 强碱进行蒸馏使氨逸出，用砚酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6. 25，计算出粗 蛋白含量。 4 试剂 4.1 硫酸(GB 625):化学纯，含量为98 %，无氮。 4. 2混合催化剂:0. 4 g硫酸铜，5个结晶水(GB 665),6 g硫酸钾(HG3-920)或硫酸钠(HG3-908), 均为化学纯，磨碎混匀。 4.3 氢氧化钠(GB 629):化学纯，40%水溶液(M/V) o 4.4 硼酸(GB 628):化学纯，2%水溶液(MY). 4. 5 混合指示剂:甲基红(HG3-958)0. 1%乙醇溶液，澳甲酚绿(HG 3-1220)0. 5%乙醉溶液，两溶液 等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。 4.6 盐酸标准溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。 4. 6.1 0. 1 mol/L盐酸(HCl)标准溶液:8.3 mL盐酸(GB 622)，分析纯，注入1 OOOMI蒸馏水中。 4.6.2 0.02 mol/L盐酸(HCl)标准溶液:1.67 ml,盐酸(GB 622)，分析纯，注入1 OOOml蒸馏水中。 4. 7 蔗搪(HG 3-1001):分析纯。 4.8 硫酸钱(GB 1396);分析纯，千燥。 4.9 硼酸吸收液:I%硼酸水溶液1 OOOmL，加入。I 0o溟甲酚绿乙醇溶液10 mL, 0. 1写甲基红乙醇溶 液7 mL,4%氢氧化钠水溶液。5 mL,混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。 5.1 仪器设备 实验室用样品粉碎机或研钵。 国家技米监督局1994一07一18批准 1995一01一01实施 GB/T 6432一 94 5.2 分样筛:孔径0.45 mm( 40目)。 5.3 分析天平:感量。，0001 g e 5.4 消煮炉或电炉 5.5滴定管:酸式，10,25 mL, 5.6凯氏烧瓶:250 mL, 5.7 凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水燕气蒸馏式。 5.8 锥形瓶:150,250 mL, 5. 9 容量瓶:100 mL, 5.10 消煮管:250 mL. 5.1， 定氮仪:以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。 6试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200 g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试 样成分的变化。 7 分析步蕊 了.， 仲裁法 7.1.1 试样的消煮 称取试样。5-1 g(含氮量5^ 80 mg)准确至0. 0002 g，放入凯氏烧瓶(5.6)中，加入6. 4 g混合 催化剂(4.2)，与试样混合均匀，再加入12 mL硫酸(4.1)和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶(5.6)置于电炉 (5.4)上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360^ 410℃)直至呈透明的蓝绿色，然 后再继续加热，至少2 h, 7门.2 氨的蒸馏(蒸馏步骤的检验见附录A) 7.1.2.1 常量蒸馏法 将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入60^-100 mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置(5. 7)的冷凝管 末端浸入装有25 mL硼酸(4.4)吸收液和2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶 (5. 6)中加入50 mL氢氧化钠溶液(4. 3)，轻轻摇动凯氏烧瓶(5. 6)，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至 流出液体积为100 mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1-2 min，并用蒸馏水冲洗冷凝 管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏. 71.2.2 半微量蒸馏法 将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入20 mL燕馏水，转入100 mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度， 摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端浸人装有20 mL硼酸(4.4)吸收液和 2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶( 5.8)内。蒸汽发生器(5.7)的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数 滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20 mL注入蒸馏装置 (5. 7)的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10 mL氢氧化钠溶液(4. 3)， 小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4 min降下锥形 瓶(5. 8)使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1 min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流人锥形瓶内， 然后停止蒸馏。 注:7.1.2.1和7.1.2.2燕馏法测定结果相近，可任选一种。 7.1.2.3 蒸馏步骤的检验 精确称取。.2g硫酸钱(4. 8)，代替试样，按7.1.2或7. 2. 2步骤进行操作，测得硫酸按含氮量为 21.”士。.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 7.，.3 滴定 Gs/'r 6432一94 用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用。.1 mol/L(4.6. 1)或0. 02 mol/l.(4. 6. 2)盐酸标 准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 7.2 7.2.1 推荐法 试样的消煮 称取。. 5-l g试样(含氮量5^ 80 mg)准确至。. 0002 g,放入消化管中，加2片消化片(仪器自备) 或6. 4 g混合催化剂(4.2),12 ml硫酸(4.1)，于420℃下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30 ml 蒸馏水。 7.2.2 氨的蒸馏 采用全自动定氮仪((5. 11)时，按仪器本身常量程序进行测定。 采用半自动定氮仪((5. 11)时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25 mL硼酸((4.4)为吸收液， 加入2滴混合指示剂((4.5),蒸馏装置((5.7)的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管 中加入50 ml氢氧化钠溶液((4. 3)进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100 snL时为宜。降下锥形 瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。 7.2. 3 滴定 用。1 mol/L的标准盐酸溶液((4.6.1)滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 8 空白测定 称取蔗糖0. 5 g，代替试样，按第七章进行空白测定，消耗。. 1 mol/I盐酸标准溶液(4.6.1)的体积 不得超过。.2 mL,消耗0. 02 mol/L盐酸标准溶液(4. 6.2)体积不得超过。.3 mLo 9 分析结果的表述 9.1 式中 计算见下式 粗蛋白质(%)=(V，一V,) XCX 0.0140X 6.25— — V, 阴X V 义 100 V— 滴定试样时所需标准酸溶液体积,mL; V— 滴定空白时所需标准酸溶液体积,mL; C一一盐酸标准溶液浓度，mol /L ; 。— 试样质量,g; V— 试样分解液总体积，mI; V'— 试样分解液蒸馏用体积，mL; 。·014。— 每毫克当量氮的克数; 6. 25- 氮换算成蛋白质的平均系数。 9.2 重复性 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%0 当粗蛋白质含量在10%-25%之间时，允许相对偏差为2 %a 当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%0 GB/'r 6432一94 附加说明: 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京 )负责修订 本标准起草人马东霞。