TA克隆1

TA克隆1TA克隆本实验室所用载体为PMD19-T载体 1. 载体使用前必须冰上融解。 2. 反应体系为：载体0.5μl，产物DNA4.5μl和5μl SolutionⅠ加入0.2mlPCR管中，混匀放置在16℃下过夜培养。 3. 将PCR管中10μl反应液加入100μl的预先融解的DH5α中，混匀后冰中放置30min。 4. 在42℃水浴锅中热击90s，再冰中放置1min。 5. 再加890μlLB液体培养基，37℃振荡培养60min。 6. 取固体LB平板，先混合40μlX-Gal、20μl氨苄和7μl I...

TA克隆本实验室所用载体为PMD19-T载体 1. 载体使用前必须冰上融解。 2. 反应体系为：载体0.5μl，产物DNA4.5μl和5μl SolutionⅠ加入0.2mlPCR管中，混匀放置在16℃下过夜培养。 3. 将PCR管中10μl反应液加入100μl的预先融解的DH5α中，混匀后冰中放置30min。 4. 在42℃水浴锅中热击90s，再冰中放置1min。 5. 再加890μlLB液体培养基，37℃振荡培养60min。 6. 取固体LB平板，先混合40μlX-Gal、20μl氨苄和7μl IPTG溶液，涂布均匀，至第5步时间到后，再加入100μl菌液，涂布均匀后放置37℃恒温培养箱中培养过夜，一般12-19h。 7. 进行后续试验（挑斑摇菌等）。注意事项： 1. 实验前相关试剂、仪器等需预先准备好，如水浴锅调温、载体预先融解、平板预先制备等等。 2. 步骤中在冰中操作时间可延长，但不可过长。 3. 涂布时要仔细操作，确保均匀。

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