生物化学重点实验总结

第 1 页 共 3 页 生物化学实验重点 木木整理 原版资料提供 刘晓楠 向师哥师姐寻复习资料，就到我的煤医网：http://www.myncmc.com 一、蛋白质的沉淀凝固反应 在水溶液中，蛋白质分子的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面由于形成水化层和双电层而使蛋白质成为稳定的胶体颗粒。在一定的物理 化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，可以使蛋白质以固态形式从溶液中析出的过程。 这种反应可分为以下两种： 1. 可逆性沉淀反应：蛋白质虽已沉淀析出，但是它的分子内部结构并未发生显著变化，蛋白质仍然保持原 有的性质，沉淀因素除去后，蛋白质能够再溶于原来的溶剂中。这种作用称为可逆性沉淀反应。 例如，盐析作用，以及在低温下乙醇对蛋白质的短时间作用，利用等电点的沉淀等。 2. 不可逆沉淀反应：在发生沉淀反应的同时，蛋白质分子内部结构和空间构型遭到破坏，使蛋白质失去原 来的天然性质，这时候的蛋白质发生了变性。变性的蛋白质在沉淀因素去除后不能再溶解于原来溶剂中， 因此称为不可逆沉淀反应。 重金属盐，植物碱试剂，过酸，过碱，加热，震荡，超声波，有机溶剂等。 沉淀蛋白质的常用 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ： （1）蛋白质的盐析： ①将(NH4)2SO4，Na2SO4，NaCl等加入蛋白质溶液，蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，稳定 性遭受破坏而沉淀析出。析出的蛋白质仍保持其天然蛋白的性质。减低盐的浓度时，蛋白质还能再溶解。 ②沉淀不同的蛋白质所需中性盐的浓度不同，而使用的盐类不同时反应也有差异。 向含有清蛋白和球蛋白的鸡蛋清溶液中加硫酸镁或氯化钠至饱和，则球蛋白沉淀析出。加硫酸铵至 饱和，则清蛋白沉析出。在等电点时，清蛋白可被饱和硫酸镁或氯化钠或半饱和硫酸铵溶液沉淀析出， 该法称为蛋白质的分级盐析。 （2）乙醇沉淀蛋白质：乙醇能够破坏蛋白质胶体性质而使蛋白质沉淀。在室温中蛋白质与乙醇接触较久后， 变性形成不可逆沉淀。低温下，可以避免乙醇的变性作用。 （3）重金属沉淀蛋白质：结合成稳定沉淀析出。蛋白质在水溶液中是两性电解质，在碱性溶液中（对蛋白 质的等电点而言，pH>pI），蛋白质分子带负电荷，能与带正电荷的金属离子结合成蛋白质盐。 等电点：当蛋白质溶液处于某一 pH 时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷 为零，此时溶液的 pH称为蛋白质的等电点。 二、氨基酸的纸层析 ★ 层析：利用混合物在两种或两种以上的不同溶剂中的分配系数不同而使物质分离的方法。 用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法，它是分配层析法的一种。滤纸可吸附有机溶剂中的水 作为固定相，有机溶剂作为流动相。将样品点在滤纸上进行展层，由于它们各自的分配系数不同，故在流动 相中移动速率不等，从而在两相之间发生分配现象。在固定相中分配趋势越大，随流动相移动速度越慢。 氨基酸经层析在滤纸上形成距原点不等的层析点，氨基酸在滤纸上的移动速率用 Rf 表示。 氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。 三、血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 ★ 电泳：溶液中带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。 血清中含有清蛋白，a-球蛋白、b-球蛋白、g-球蛋白和各种脂蛋白等，pI均小于 8.6。各种不同的蛋白质 由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状的不同，在电场中迁移时泳动的速度有所不同。分子量 小、等电点低、在相同碱性 pH 缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度较快。用醋酸纤维 素薄膜为支持物，在薄膜毛面点样，电泳时点样面朝下，点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸上。正 常人血清在 pH 8.6的缓冲体系中电泳 1 h左右，可以使血清蛋白得到分离，经氨基黑 10B染色液染色后血清 蛋白质可显示出 5条不连续的区带。 以清蛋白泳动最快，其余依次为及 a1-，a2-，b-，及 g-球蛋白，在电泳图谱上由正极端排列至负极。 Rf = —————————————— 溶剂前缘与原点之间的距离 展层斑点中心与原点间的距离 第 2 页 共 3 页 生物化学实验重点 木木整理 原版资料提供 刘晓楠 向师哥师姐寻复习资料，就到我的煤医网：http://www.myncmc.com 四、血清 ALT活性的测定——赖氏比色法 血清中的谷-丙转氨酶（ALT）可催化底物中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸： 生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的 2，4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙， 进而在强碱性环境中产成红棕色反应，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，即与 ALT活性的高低 成正比关系。 正常血清中 ALT活性：<50单位 五、尿液淀粉酶活性测定——碘-淀粉比色法 淀粉在尿液淀粉酶作用下，37℃，30min，产生一系列水解物，用碘水检查淀粉水解的程度，找出不带蓝 色色调且尿液稀释倍数最高的进行结果测定。（正常值为 8-64活性单位） 在 37℃，Cl - 存在下，30分钟内能将 0.1%淀粉溶液 1ml水解的酶量定为淀粉酶的一个活性单位。 六、还原糖含量测定——比色法 单糖都是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。 在碱性条件下，还原糖与 3，5-二硝基水杨酸共热（沸水浴 5min），3，5-二硝基水杨酸被还原为 3-氨基 -5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。一定范围内，还原糖的量与棕红色物质 颜色深浅的程度成一定的比例关系，540nm波长下比色测定，求出样品中还原糖含量。 血糖：血液中的葡萄糖，正常值为 3.89-6.11mol/L。 七、双缩脲法测蛋白质含量 ★ 具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫红 色复合物。而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也能与 Cu2+形成紫红色络合物，其最大光吸收在 540nm处，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。（37℃水浴 15min） 朗伯-比尔定律：分光光度 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 的理论基础，表达式为 A=kcL。A为吸光度，k为吸光系数，c为溶液浓 度，L 为液体厚度。其物理意义为，当一束平行的单色光通过均匀透明的溶液时，该溶液对光的吸收程度与 溶液中物质的浓度和厚度的乘积成正比。 八、二乙酰一肟．法测定血清尿素含量 尿素在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物，其颜色深浅与尿素含量成正比。 （沸水浴 12min，540nm波长下比色） 尿素氮试剂含盐酸、氨基硫脲、硫酸。增强红色化合物稳定性，提高反应灵敏性。 九、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降 低。这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝作为受氢体， 亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的亚甲白。丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争性抑制琥珀 酸脱氢酶。通过观察亚甲蓝颜色消退的程度，可以判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制程度。 （琥珀酸+亚甲蓝 延胡索酸+亚甲白 ，加石蜡固封防止外界空气影响实验结果） 肝匀浆 pH7.4 丙二酸 第 3 页 共 3 页 生物化学实验重点 木木整理 原版资料提供 刘晓楠 向师哥师姐寻复习资料，就到我的煤医网：http://www.myncmc.com ● 吸量管选用原则及使用方法： 刻度吸量管的规格有 0.1ml、0.2ml、0.5ml、lml、2ml、5ml及 10ml等，供量取 10ml以下任意体积的液体： ① 选取与取液量接近的。 ② 取整数量的液体，吸取量需要准确时，应选用相应刻度的吸量管。 ③ 取同一种液体量不同，应选取与最大量接近的。 ④ 若几个试管中均加入 1ml同一种液体，可取一只 10ml的吸量管，逐个加入。 ⑴ 选择：使用前先根据需要选择适当的吸量管，刻度吸量管的总容量最好等于或稍大于最大取液量。临用 前看清总容量和刻度。 ⑵ 执管：将中指和拇指拿住吸量管上口，以食指堵住管上口，控制流速；刻度数字应朝向操作者。 ⑶ 取液：把吸量管插入液体内（切忌悬空，以免液体吸入洗耳球内），用洗耳球吸取液体至所取液量的刻度 上端 1~2cm处，然后迅速用食指按紧吸量管上口，使管内液体不再流出。 ⑷ 调准刻度：将已吸足液体的吸量管提出液面，然后垂直提起吸量管于供器内口（管尖悬离供器内液面）。 用食指控制液流至所需刻度，此时液体凹面、视线和刻度应在同一水平面上，并立即按紧吸量管上口。 ⑸ 放液：放松食指，让液体自然流入受器内，（如移液管标有“吹”字，则应将管口残余液滴吹入受器内） 此时，管尖应接触受器内壁，但不应插入受器内的原有液体之中，以免污染吸量管及试剂。 ⑹ 洗涤：吸取血液、尿、组织样品及粘稠试剂的吸量管，用后应及时用自来水冲洗干净。如果吸取一般试 剂的吸量管可不必马上冲洗，待实验完毕后，用自来水冲洗干净。晾干水分，再浸泡于铬酸洗液中， 数小时后，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗。晾干备用。 ●722分光光度计 分光光度计是利用物质特有的吸收光谱，对物质进行鉴定或测量其含量。其依据的原理是朗伯-比尔定 律（A=kcL）。该定律阐明了吸光度与溶液浓度、溶液厚度的关系。 使用方法： （1）开启电源，指示灯亮，仪器预热 20 min。 （2）调波长：旋动波长手轮，把所需波长对准刻度线。 （3）样品液准备：将装有溶液的比色皿放置比色架中，空白管对准光路。（不可用手接触比色杯的透光面） （4）调零：打开样品室暗箱盖（光门自动关闭），按 0%键，即可自动进行机械零点的调整，数码显示 0.000。 （5）调 100%：盖上样品室盖（光门自动开启），按“100﹪”，自动进行空白零点的调整，使数字显示为 “100.0”。（如显示不到 100﹪，则可加按一次。） （6）按“MODE（模式）”键，选择吸光度测定模式，数码显示自动转换为吸光度值 0.000。（此时空白管 处于光路中） （7）测量：拉动比色杯架的拉杆，使各测定杯依次进入光路，读出相应吸光度值。 （8）清洗：测定完毕后，断电源，取出比色杯，将暗箱盖盖好。比色杯清洗并晾干。 ◎玻璃仪器清洗合格的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 （去年 07级考试重点） 清洁透明，玻璃表面上没有附着物，水沿器壁自然流下时不挂水珠。