·876· 黑龙江医药Heilonl西iangMedicineJournalVoL23No.62010
高效液相色谱法测定维生素C片的含量
王蕊1,姜丽2,袁航2,孙学志1,曹阳1
I.黑龙江省大庆市药品检验所;2.吉林市精神病医院
摘要 目的:文章建立了高效液相色谱测定维生素c片含量的方法。方法:采用o.1%的草酸作为溶荆,色谱
中采用phenomenex—C18色谱拄,流动相:磷酸盐缓冲溶液(pH=5.8):甲醇:95:5。流速0.8ml/min,紫外检测器,
检测波长254nln。结果:维生素c在O.0l一0.5mg/ml内有良好的线性关系,线性回归方程为y=4E+06x+15508。
相关系数为R2=o.9998,方法乎均回收率为99.7l%,相对标准偏差小于2%。结论:本文测定方法简便,快速,能准
确测定维生素C片的含量.
关键词:维生素C;高效液相色谱;维生素C片
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1006—2882(2010)06—876—02
1仪器与试剂
岛津2010高效液榴色谱仪,色谱柱phenomenex—C18;
AE系列电子天平(梅特勒~托利多仪器上海有限公司);烧
杯,棕色容量瓶.维生索c标准对照品99.17%(中周药品
生物制品检定所);二次蒸馏水;甲醇(色谱纯,PRODUCT
OFDIKMATECHNOLOGIES);草酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二
采用加样回收率法,精密量取供试品溶液(6份)于
10mL量瓶中,分别加入不同量的黄芩苷和绿原酸对照品溶
液,加50%甲醇至刻度。制成低、中、高3种不同浓度供试品
溶液。按上述色谱条件进行测定,计算回收率。结果见表
2。
2.8样品含量测定
取双黄连片剂3批样品,按“2.2.2”项下方法分别制成
供试品溶液,精密吸取对照品溶液和供试品溶液注入液楣
色谱仪,按上述色谱条件测定,用外标法计算样品中黄芩苷
和绿原酸的含量,结果见表3。
表2加样回收率测定结果
由实验结果可知本品回收率良好。
表3样品含量测定结果
堂曼 差茎茎竺丛 堡垦墼型£
20070202 49.76 8.15
20070205 50.驱 &3l
200702ll 47.89 &06
3讨论
3.1流动相的选择
本实验中,曾采用甲醇与0.2%冰醋酸作为流动相,但
是出现的峰型拖尾效果严重,后采用甲醇与o.2%磷酸,峰
型比冰醋酸效果好,但仍然有些拖尾。增加了流动栩的酸
性,使磷酸到达o.4%,最后用甲醇与0.4%磷酸出峰的峰型
较好。
3.2洗脱方式的选择。
实验曾采用的洗脱过程为0—5分钟,甲醇:o.4%磷酸
溶液(14:86),5—10分钟,甲醇:0.4%磷酸溶液(16:84),11
—35分钟。甲醇:0.4%磷酸溶液(70:30)。结果流动相极性
过大,黄芩苷没有出峰。后来选择2.1项下色谱条件。在此条
件下,黄芩苷和绿原酸的保留时间适宜,峰型对称,分离度
好,从而可以将2种成份同时测定。
3.3选用梯度洗脱法的优缺点分析
优点:采用梯度洗脱方法可以方便,快捷,准确的同时
测得绿原酸和黄芩苷的含量。
缺点:梯度洗脱基线不稳,容易上飘。所以梯度洗脱时
梯度变化不能太快,本实验中的梯度洗脱程序经试验测定,
基线基本平稳。
参考文献
[1】国家药典委员会.中国药典(一部)[s】.北京:化学工业出版
杜.2005:405.
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西南民族大学(自然科学舨),2007.33(3,:538—541。
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【J】.哈尔滨商业大学学报(自然科学版),2004,20(3):275
—277.
收穑日期:2010一∞一07
万方数据
黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalVoL23No.62010 ·877·
钾均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱phenomene—C18;流动相:磷酸盐缓冲溶液(pH
=5.8):甲醇=95:5,流速0.8ml/min,紫外检测器,检测波
长254nm,进样10一。
2.2供试品溶液与对照品溶液的制备
维生索C供试品溶液的制备:取本品20片(规格
0.19),精密称定,研细,取本品l片(约相当于维生素
C100mg),加0.1%的草酸使溶解制成每lml含0.1mg的溶
液,分析前用0.45p.m滤膜过滤。
维生索C对照品溶液的制备:精密称取维生索c对照
品适量,加0.1%的草酸使溶解制成0.1mg/ml的标准溶液。
2.3标准工作曲线的绘制
精密称取对照品50.80mg置50ml量瓶中,用0.1%草
酸溶液稀释至刻度,精密量取0.5ml,2.5ml,5ml,12.5ml,
25n11分别置50ml量瓶中,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,制
成维生紊c标准溶液,用0.45p.m滤膜过滤。用微量进样器
进样lO止,依次测出峰面积,然后以维生索C标准溶液质
量浓度(mg/m1)作自变量,相对应的峰面积作因变量,绘制
标准工作曲线,如图1所示。标准曲线的相关系数R2=
0.9999.
说明
关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书
曲线的线性关系良好。
图l维生素C的标准工作曲线
2.4精密度试验
取同一对照品溶液,进样10出,重复迸样6次,峰面积
的RSD=O.4%。证明采用该方法测定维生素C含量。精密
度良好,符合精密度试验要求。
2.5稳定性试验
取同一供试品溶液在0、2、4、6、8、12小时分别进样
10以,记录峰面积,结果峰面积的RSD=0.6%。证明供试品
溶液在12小时内稳定性良好。
2.6重复性试验
取同一批号维生索C片,平行制备5份样品。按样品测
定法测定,结果每片含维生索C平均值为98.58mg(RSD=
0.56%,n=5)。证明采用该方法测定样品中维生素C含
量,煎现性较好。
2.7回收率实验
分别加入不同最的维生索C对照品溶液,按样品含量
测定方法操作,平均回收率100.26%。RSD为0.7%。
精密|i【取维生索C片细粉适量(含量为98.58%,约含
维生索C5mg),暨100ml嫩瓶中,加人维生索c对照品约
5mg,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,照含量测定法操作,测
碍结果见表l。平均回收率99.71%。RSD为0.6l%。
表l回收率结果
5.26855.062410.151298.98
090522135.20235.120210.206599.5999.710.80%
5.18615.160310.3303loo.56
2.8样品测定
分别精密量取供试品与对照品溶液10“,注入液相色
谱仪记录色谱图见图2、3,测定结果见表2。
表2样品含量测定
批号 w20(g)w挂(g)w盟(g)A拦 A盟 百分含.Iit%
丽0901112.413石—6.1182一一—i药48丽————_T丽百r
200905062.5112 0.1253o.0l14742013214781561102.71
200912082.38960.1220 412685298.60
图2维生素C对照品色谱图
图3维生素C样品色谱图
3讨论
3.1维生素C溶液热稳定性较差,在中性或碱性水溶液中
易被氧化,但在酸性溶液中却很稳定。因此用0.1%草酸溶
液作溶剂来溶解样品及标样。维生索c在pH值5.0—6.5
之间吸收比较大,灵敏度比较高,因此选择流动相pH=5.8
磷酸盐缓冲液,B:甲醇(A:B=95:5v/v)[11。为使分离效
果更好,选择流速为0.8ml/min。维生素C在254nln有最
大吸收,故选择254nm作为检测波长。
3.2由于维生岽C对光不稳定,遇氧易分解。故本实验应
避光操作,整个实验均用棕色容量瓶定容雎】.流动栩脱气后
尽量不要引起气泡。
3.3维生索C测定的方法一般有化学法、比色法、紫外分
光光度法、荧光法等。这些方法所需试剂较多、操作繁琐¨J。
由上述分析可知,采用高效液栩色谱法测定维生素C片的
含量是可靠的。操作简便、快速、稳定。结果准确可靠。
参考文献
[1】胡应杰.谣康标.陈昌云。等.高效液栩色谱法测定辣椒巾维生
东C的含最【J】.南京晓庄学院学报.2008.6(1I):30—32.
[2】高志杰,李静涛.饶小恩.高效液相色潜一二极管阵列检测器
法测定饮料中维生索C的研究【J].中国卫生检验杂志,
2006.16(4):446—447.
[3】贾君.5种水果中维生素C含量的测定研究[J].冷饮与速冻
食品工业.2004,10(2):33—34.
收稿日期:2010—07—29
万方数据
高效液相色谱法测定维生素C片的含量
作者: 王蕊, 姜丽, 袁航, 孙学志, 曹阳
作者单位: 王蕊,孙学志,曹阳(黑龙江省大庆市药品检验所), 姜丽,袁航(吉林市精神病医院)
刊名: 黑龙江医药
英文刊名: HEILONGJIANG MEDICINE JOURNAL
年,卷(期): 2010,23(6)
参考文献(3条)
1.胡应杰.潘康标.陈昌云.柳闽生 高效液相色谱法测定辣椒中维生素C的含量 2008(6)
2.高志杰.李静涛.饶小思 高效液相色谱-二极管阵列检测器法检测饮料中Vc的研究 2006(4)
3.贾君 5种水果中维生素C含量的测定研究 2004(2)
本文链接:http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_hljyy201006003.aspx