GB 17816-1999-T 饲料中总抗坏血酸的测定 邻苯二胺荧光法

GB/'r 17816--1999 前 言 本标准参考了美国公职分析化学家协会AOAC (1995年版))45.1.14-45.1.16《维生素制品和果汁 中的维生素C》、《维生素制品中的维生素C》和《食品中的总维生素C》的规定，在技术内容上，综合上述 三种方法，在操作步骤上作了相应的变更，以便于实际操作。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草。 本标准主要起草人;屈利文、钱肪。 中华人民共和国国家标准 饲料中总抗坏血酸的测定 邻苯二胺荧光法 GB/T 17816-1999 Determination of total ascorbic acid in feeds- o-Phenylenediamine fluorometry 1 范围 本标准规定了用邻苯二胺荧光法测定饲料中总抗坏血酸的方法。 本标准适用于单一饲料、配合饲料、预混料及浓缩饲料。不适用以酷化抗坏血酸形式添加的各种饲 料中抗坏血酸的测定。 在最终提取液中抗坏血酸最小检出限为。.022 pg/mL. 2 q1用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T 6682-1992分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 先将试样中抗坏血酸在弱酸性条件下提取出来，提取液中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗 坏血酸，与邻苯二胺(OPDA)反应生成有荧光的哇呢琳(quinoxaline)，其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓 度在一定条件下成正比。另外，根据脱氢抗坏血酸与硼酸可形成硼酸一脱氢抗坏血酸络合物而不与邻苯 二胺反应，以此作为“空白”排除试样中荧光杂质的干扰。 4 试剂 本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。 实验室用水应符合GB/丁6682中三级水的规格。 4门 偏磷酸一乙酸溶液:称取15g偏磷酸，加入40 mL冰乙酸及250 mL水，加温，搅拌，使之逐渐溶解， 冷却后加水至500 mL。于4'C冰箱可保存7-10天。 4.2 0. 15 mol/L硫酸溶液:取10 mL硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1 200 mL. 4. 3 偏磷酸一乙酸一硫酸溶液:以0. 15 mol/L硫酸溶液((4-2)为稀释液代替水，其余同4.1配制 4.4 50%乙酸钠溶液:称取500 g乙酸钠(CH,COONa·3H,O)，加水至1 000 mL. 4.5 硼酸一乙酸钠溶液:称取3g硼酸，溶于100 mL乙酸钠溶液(4-4)中。临用前配制。 4.6邻苯二胺溶液:称取20 mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至loo MI 4.7抗坏血酸标准溶液(1 mg/mL):准确称取50 mg杭坏血酸，用溶液(4. 1)溶于50 mI容量瓶中，并 稀释至刻度。临用前配制。 4.8 抗坏血酸标准工作溶液(100 pg/mL ):取10 mL抗坏血酸标准溶液((4.7)，用溶液((4.1)稀释至 国家质f技术监督局1999一08一10批准 2000一02一01实施 Gs/T 17816-1999 100 ml 稀释前测试pH值，如其pH大于2.2时，则应用溶液((4-3)稀释。 4.9 0.04%百里酚蓝指示剂溶液:称取。. 1 g百里酚蓝，加。.02 mol/1氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中 研磨至溶解，氢氧化钠的用量为10. 75 mL，磨溶后用水稀释至250 mL 变色范围:pH值等于1.2为红色;pH值等于2.8为黄色;pH值大于4.。为蓝色。 4. 10 活性炭的活化:加200 g炭粉于1L盐酸((1+9)中，加热回流1--2 h，过滤 用水洗至无铁离子 (Fe")为止，者于110^-120'C烘箱中干燥，备用。 检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。将2%亚铁氰化钾与〕%盐酸等量混合，将上述洗出滤液滴 入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。 5 仪器、设备 荧光分光光度计:激发波长350 nm，发射波长430 nm,l cm石英比色皿。 实验室用样品粉碎机。 实验室常用仪器、设备 ?? ?? ?? 6 试样制备 取具有代 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 性样品，用四分法缩分至200 g，然后粉碎至过。.45 mm(4。目)筛，混匀后装于密封容 器，保存备用。 7 测定步骤 了.1 试样中碱性物质量的预检 称取试样1g于烧杯中，加10 mL偏磷酸一乙酸溶液((4-1)，用百里酚蓝指示剂检查pH值 如呈红 色，即可用偏磷酸一乙酸溶液作样品提取稀释液。若呈黄色或蓝色，则滴加偏磷酸一乙酸一硫酸溶液(4.3), 使其变红，并 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 所用量 7.2 试样溶液的制备 称取试样若干克(精确至。000 1 g，含抗坏血酸约2.5^ 10 mg)于100 mL容量瓶中，按7.1预检 碱量，加偏磷酸一乙酸一硫酸溶液((4.3)调至pH为1.2，或者直接用偏磷酸一乙酸溶液((4-1)定容，摇匀。如 样品含大量悬浮物，则需进行过滤，滤液为试样溶液。 7.3 测定步骤 7. 11 氧化处理:分别取上述试样溶液((7-2)及标准工作溶液((4.8)100 mL于200 mL带盖三角瓶中， 加2 g活性炭(4. 10)，用力振摇1 min，干法过滤，弃去最初数毫升，收集其余全部滤液，即为样品氧化液 和标准氧化液 7. 3.2 各取10 mL标准氧化液于两个100 mL容量瓶中分别标明“标准”及“标准空白”。 7.3.3 各取10 ml样品氧化液于两个100 mL容量瓶中分别标明“样品”及“样品空白” 7. 3.4 于“标准空白”及“样品空白”溶液中各加5 mL硼酸一乙酸钠溶液((4.5),混合摇动15 min，用水 稀释至100 mL 7.3.5 -F“标准”及“样品”溶液中各加5 mL乙酸钠溶液((4-4)，用水稀释至100 mL, 7. 3.6 荧光反应:取7. 3.4中“标准空白”、“样品空白’，溶液及7.3.5中“样品”溶液2. 0 mL，分别置于 10 ml带盖试管中 在暗室迅速向各管中加人5 mL邻苯二胺溶液((4.6)，振摇混合，在室温下反应 35 min, -F激发波长350 nm，发射波长430 nm处测定荧光强度。 7.3.7标准曲线的绘制:取上述“标准”溶液((7-3-5)(抗坏血酸含量10 pg/mL) 0. 5,1. 0,1. 5和2. 0 ml- 标准系列，各双份分别置于10 mL带盖试管中，再用水补充至2.0 ml。荧光反应按7. 3.6。以标准系列 走光'71t度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应抗坏血酸含量('g )为横坐标，绘制标准曲线 Gs/T 17816-1999 8 分析结果的计算及表示 分析结果按式(1)计算 ? ?????? 式中:x 一每干克试样中含抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总量,mg; C一一从标准曲线上查得的试样液中抗坏血酸的含量,kg; 。， 试样质量,9; n— 试祥溶液的稀释倍数. 所得结果表示到小数点后一位。 9 允许差 每个试样称取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。 在侮千克饲料中抗坏血酸的含量小于或等于1 000 mg时，测定结果的相对偏差不大于io00 在每千克饲料中抗坏血酸的含量大于1 000 mg时，测定结果的相对偏差不大于,S0u