实用pcr流程表知识讲解

用pcr流程表临床PCR佥验流程 记录表 体温记录表下载消防控制室值班记录表下载体温记录表 下载幼儿园关于防溺水的家访记录表绝缘阻值测试记录表下载 检验日期：检验 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 ：HBV-DNA扩增仪中保存文件名使用说明：①严格按单一流向进行实验,即试剂准备区一标本制备区一扩增区,严禁逆向移动.本记录表的流向亦遵循此流程；②各项工作执行后在相应工程前的方框内打“,〞；③本记录表最后归档保存在PCR实验室扩增区的专用文件夹中,以备查找.实验前准备口试剂在有效期内口扩增仪、加样器、金属浴、温湿度计等仪器在校准有效期内〔校准之日起1年〕口生物平安柜的滤膜在使用有效期内口离心管、带滤芯吸头已经过质检合格口各区按消毒液配制SOP®制500mg/L含氯消毒液、2000mg/L含氯消毒液和70%酉精,即用即配.口翻开通风设备操作者试剂准备区实验前：口更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套口实验台面清洁〔500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭〕冰箱温度：冷藏室〔2〜8C〕C；冷冻室〔-20±2C〕C实验室温度C〔允许范围：15〜30C〕；相对湿度：〔允许范围：30%-70%PCR式剂来源：试剂厂家：口深圳匹基生物工程批号：检验工程：HBV-DNA本次实验用量：人份；剩余量：人份其他有关试剂配制：仪器设备使用：离心机：口正常口不正常；振荡器：口正常口不正常；生物平安柜：口正常口不正常实验后：口按实验室清洁消毒SOP青洁实验室台面、地面、加样器和离心机,并进行紫外线照射30分钟以上.□按实验室废弃物处理SOP&理实验废弃物.操作者检验日期:检验工程：HBV-DNA样本处理区实验前：口更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套口实验台面清洁〔500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭〕冰箱温度：冷藏室〔2〜8C〕C；冷冻室〔-20±2C〕C实验室温度C〔允许范围：15〜30C〕；相对湿度：〔允许范围：30%-70%HBV-DNA0性室内质控物来源：浓度及批号：扩增位置：HBV-DNAW生室内质控物来源：批号：扩增位置：所处理的HBV-DN麻本〔对应标本接收的唯一编号〕及拟扩增位置:n91/2533~-41~-49576573-8189-2H018-26-34-42-5058।-66^14-82—90-3"11191273514351596775839141220128364452606876849251132112937145536169778593614223038465462707886947152331394755637179879581624324048566472808896核酸提取及加样过程：口按乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR操作程序SOP进行仪器设备使用：生物平安柜：口正常口不正常；恒温金属浴：C；离心机：口正常口不正常；振荡器：口正常口不正常；低温离心机：制冷：口正常口不正常；离心：口正常口不正常实验后：口按实验室清洁消毒SOP青洁实验室台面、地面、加样器和离心机,并进行紫外线照射30分钟以上.□按实验室废弃物处理SOPtt理实验废弃物.口使用后标本冷冻保存3个月,以备复查.操作者检验日期：检验工程：HBV-DNA扩增及产物 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 区实验前：口更换专用工作服、戴口罩、帽子、鞋套口实验台面清洁〔500mg/L含氯消毒液、70%酒精或水擦拭〕实验室温度C〔允许范围：15〜30C〕；相对湿度：〔允许范围：30%-70%LightCycler扩增仪操作：口开机自检及运行正常；口按LightCycler操作使用SOP进行编程、参数设定HBV-DNAfe准曲线计算值：Slope值：Intercept值：r2值：室内质控结果：阴性质控物结果：;阳性质控物结果：口填写室内质控记录、质控图；是否失控：□否口是室内质控结果：阴性质控物结果：;阳性质控物结果：口填写室内质控记录、质控图；是否失控：□否口是失控原因及分析：〔失控判断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 及原因分析按室内质控SOP进行〕实验结果：见所附扩增仪打印结果实验结果有效性判断：口有效口无效〔依据实验结果有效性判断SOP进行〕实验后：口按实验室清洁消毒SOP青洁实验室台面、地面、加样器和离心机,并进行紫外线照射30分钟以上.口按实验室废弃物处理SOPtt理实验废弃物.操作者.操作步骤：取n个1.5ml的灭菌离心管,作好标记.〔n=样本数+1管HCV阴性对照+1管HCV强阳性对照+1管HCV临界阳性对照〕向上述离心管中分别参加25ul蛋白酶溶液.分别参加待测样本、HCV阴性对照、HCV临界阳性对照和HCV强阳性对照各200ul.参加200ul新鲜配制的裂解液工作液,盖上盖子,振荡15秒,充分混匀.〔注意：不要把蛋白酶溶液直接参加裂解液工作液中〕.56摄氏度温浴15分钟.瞬时离心,以去除管盖上的滴液.参加250ul无水乙醇,盖上盖子,彻底混匀〔振荡15秒〕.在室温下静置5分钟〔15-25摄氏度〕.注意：如果环境温度超过25摄氏度,无水乙醇需预冷.瞬时离心,以去除管盖上的滴液.将n个核酸提取柱放入收集管中,小心地将步骤1.2.6中的液体移入核酸提取柱中.盖上盖子,6000*g离心1分钟.倒掉收集管中的废液,将提取柱重新放入收集管中.〔如果离心后核酸提取柱中仍有局部液体,以更高的速度再次离心,确保提取柱中无剩余的液体〕小心的翻开核酸提取柱的盖子,参加500ul洗液1,盖上盖子,6000*g离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将提取柱重新放入收集管中.小心的翻开核酸提取柱的盖子,参加500ul洗液2,盖上盖子,6000*g离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将提取柱重新放入收集管中.小心的翻开核酸提取柱的盖子,参加500ul无水乙醇,盖上盖子,6000*g离心1分钟,丢弃收集管,将提取柱放入新的收集管中.20000*g高速离心3分钟,彻底去除乙醇.丢弃收集管,将核酸提取柱放入干净的1.5ml离心管中,翻开提取柱的盖子,56摄氏度温浴3分钟,以彻底去除剩余的液体.核酸提取柱放入另一干净的1.5ml离心管中,小心翻开提取柱的盖子,参加60ul洗脱液〔请将洗脱液加到膜的中央〕,盖上盖子,室温静置5分钟.20000*g高速离心1分钟收集滤出液,做好标记,4摄氏度保存备用.提取的病毒核酸应在2小时内用于PCR扩增,或在-70摄氏度下可以保存一个月..扩增试剂准备〔PCR前准备区〕从试剂盒中取出HCVRT-PCR反响液、EnzymeMix,在室温下融化后,2000*g离心5秒.设所需要的PCR反响管数〔玻璃毛细管〕为n〔n=样本数+1管空白对照+1管HCV阴性对照+1管HCV强阳性对照+1管HCV临界阳性对照+4管HCV定量标准品〕,每个测试反响体系配制如下表：试齐HCVRT-PCR反响液EnzymeMix用量n*13uln*2ul计算好各试剂的使用量,参加到一适当体积试管中,充分混匀均匀后2000*g离心10秒,向各玻璃毛细管中分装15ul,转移至样本处理区..加样〔样本处理区〕吸取10ul样本处理步骤1.2.13中收集得到的RNA溶液及HCV定量标准品分别参加到上述反响管中〔空白对照直接参加10ul洗脱液〕,盖紧反响管管盖,连同Roche专用金属反响管套放在离心机中,于2000*g离心10秒,将毛细管转移到检测区.将毛细管排放好放入荧光PCR检测仪内,记录样本摆放顺序..RT-PCR反响〔检测区〕4.1循环条件设置ProgramCyclesTemperature摄氏度IncubationTime(min:sec)TemperatureTransitionRate(摄氏度/sec)AcquisitionModeAnalysisMode115030:0020NoneNone219515:0020NoneNone3459500:0520NoneQuantification5000:3020Single7200:2010None反响体系为25ul.具体设置方法请参照各仪器使用说明 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 仪器检测通道选择选择F1检测通道：HCV内对照〔IC〕选择F2检测通道.样本的设定在扩增开始前条件设定时,将HCV定量标准品设为“Standard〞并输入试剂盒内给定浓度值,待检样本和对照品设定为“Unknown〞.结果分析条件设定对HCV的曲线和HCV内对照〔IC〕的曲线进行分别分析.分析方式选择FitPoints,基线调整选择Arithmetic,阈值〔threshold〕设定原那么以阈值线刚好超过正常HCV阴性对照曲线的最高点,且正常HCV阴性对照病毒滴度为0.0IU/ml为准.具体设置方法请参照各仪器使用说明书.质控标准.将HCV定量标准品1-4的浓度值输入,仪器将自动以HCV定量标准品的浓度值为横坐标,以其实际测得的外标Ct值为纵坐标给出标准曲线,标准曲线的拟和度绝对值应大于等于0.980,四个HCV定量标准品的Ct值都应＜38.0,否那么视为定量结果无效..HCV阴性对照、空白对照HCVRNA应为0.0IU/ml;HCV强阳性对照HCVRNA应为5.0E+05-1.0E+07IU/ml;HCV临界阳性对照应为1.0E+03-1.0E+05IU/ml;且HCV阴性对照、HCV临界阳性对照中HCV内对照〔IC〕的Ct值都应小于等于33,否那么此次实验视为无效.所有实验从样本处理开始重做.结果判断.检测样本中1.0E+03IU/ml小于等于HCVRNA小于等于5.0E+07IU/ml,测定结果有效,可直接报告相应的浓度值..检测样本中HCVRNA大于5.0E+07IU/ml,可按实际测得值报告相应的病毒滴度,亦可将该样本用正常人血浆按10倍梯度稀释到本试剂盒定量检测线性范围内后重新测定,测定结果应以稀释倍数进行校正..检测样本中0.0IU/ml小于HCVRNA小于1.0E+03IU/ml,且HCV内对照〔IC〕的Ct值都应小于等于33,说明病毒载量较低,可直接报告浓度值,但注明该病毒滴度量仅供参考..检测样本中HCVRNA等于0.0IU/ml,且HCV内对照〔IC〕的Ct值都应小于等于33,应报告为小于试剂盒最低检测限..检测样本中HCV内对照〔IC〕的Ct值大于33或Ct值为无数值,且HCVRNA小于等于1.0E+03IU/ml〔包含0.0IU/ml或无数值〕时,那么此样本的定量结果视为无效,应查找并排除原因,并对此样本进行重复实验.