用牛肉膏和蛋白胨固体培育基进行大肠杆菌的纯化培育，包含两大阶段：⑴制备牛肉高蛋白胨固体培育基①计算：依据牛肉膏蛋白胨培育基配方的比率，计算配制100ml培育基中各种成分的用量。②称量：正确称取各种成分。③熔解：将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少许的水，加热；当牛肉膏熔解并与称量纸分别后，用玻璃棒拿出称量纸；箱烧杯中加入称量好的蛋白胨和氯化钠，玻璃棒搅拌，使其溶解；加入琼脂，加热使其融化。连续搅拌防范糊底以致烧杯破裂；当琼脂完整融化，补加自来水至100ml。④灭菌：将配置好的培育基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，用皮筋勒紧，放入高压灭菌锅，压力为100KPa，温度为121℃，灭菌15～30min。将培育皿用几层旧报纸包紧，5～8套培育皿一包，放入干热灭菌箱，160～170℃灭菌2h。⑤倒平板：待培育基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰周边倒平板。倒平板操作步骤：．将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培育基的锥形瓶，左手拔出棉塞；．右手拿锥形瓶，使瓶口迅速经过分焰；C．用左手的拇指和食指将培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培育基（约10～20ml）倒入培育皿，左手马上盖上培育皿的皿盖；．等候平板冷却凝固后，将平板倒过来搁置，使皿盖在下、皿底在上。小资料：牛肉膏蛋白胨固体培育基配方成分含量供给的主要营养牛肉膏5.0g碳源、磷酸盐、维生素蛋白胨10.0g氮源、维生素NaCl5.0g无机盐琼脂20.0g承载物⑵纯化大肠杆菌①微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布法；还包含斜面接种、穿刺接种等方法。尽管操作方法各有不一样，其核心都是防范杂菌污染，保证培育物的纯度。②平板划线法就是经过接种环在琼脂固体培育基
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面连续划线的操作，步稀释分别到培育基的表面。将齐聚的菌种逐（在数次划线后，可以分别到由一个细胞生殖而来的肉眼可见的子细胞集体——菌落。）平板划线法操作步骤：A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；B．在火焰胖冷却接种环，并打开棉塞；C．将试管口经过分焰；D．将已经冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液；E．将试管口经过分焰，并塞上棉塞。F．左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。（注意：不要划破培育基）G．灼烧接种环，待其冷却后，从第一地域划线的尾端开始往第二地域内划线，重复以上操作，在第三、四、五地域内划线。（注意：不要将最后一区的划线与第一区相连）．将平板倒置，放入培育箱中培育。③什么是稀释涂布法？将菌液经过一系列的梯度稀释，而后将不一样浓度的菌液分别涂布到培育基的表面进行培养。（在稀释度足够高的菌液里，齐聚在一同的微生物被分别成单个细胞，从而能在培育基表面形成单个的菌落）稀释涂布法操作步骤：A．将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按10-1～10-6的序次进行编号；-1B．用移液管汲取1ml培育的菌液，注入10倍稀释液的试管中。用手指轻压移液管的橡皮，吹吸三次使菌液与水充分混杂。C．从10-1倍稀释液的试管中汲取1ml培育的菌液，注入10-2倍稀释液的试管中。重读进行，以此类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。涂布平板操作步骤：．将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；B．取少许菌液（不超出0.1ml），滴加到培育基表面；C．将沾有少许酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s；D．用涂布器将菌液均匀地涂布在培育基表面。涂布时可转动培育皿，使涂布均匀。注意：将涂布器尾端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中，拿出时，要让多于的酒精在烧杯中滴尽，而后将沾有少许酒精的涂布器在火焰上引燃。操作中必定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，省得引燃此中的酒精。将接种后的培育基和一个未接种的培育基都放入37℃恒温箱中，培育12h和24h后，分别观察并记录结果。
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