null实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定1、实验目的1、实验目的掌握总糖和还原糖含量的测定方法2、实验重点和难点2、实验重点和难点利用蒽酮比色法测定还原糖含量的实验原理
多糖在浓硫酸加热条件下会降解为还原糖3、实验原理3、实验原理3.1、还原糖的概念
指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖多为非还原糖。
葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基，故它们都是还原糖。3.2、蒽酮比色法3.2、蒽酮比色法总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，在可见光620nm处有最大吸收，当糖的量在20一200mg范围内时．其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。null该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。null但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 null相对密度法
折光法
旋光法3.3、糖含量测定方法null直接滴定法
(改良的兰—爱农法）
高锰酸钾法
萨氏法
3，5—二硝基水杨酸
酚—硫酸法
蒽酮法
半胱氨酸—咔唑法null 纸色谱
薄层色谱
GC
HPLC
β—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖
葡萄糖氧化酶测葡萄糖
发酵法 ——测不可发酵糖
重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素
null直接滴定法（是GB法）
原理：将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀；
这种沉淀很快与酒石酸钾反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀；
这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
null特点是试剂用量少，操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。
适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时，因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。
本法是国家
标准
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分析方法。
蓝—爱农（Lane—Eynon)法
比直接法的试剂中少亚铁氰化钾，终点为红色。高锰酸钾滴定法
高锰酸钾滴定法
将一定量的样液与一定量过量的碱性酒石酸铜溶液反应，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜，经过滤，得到氧化亚铜沉淀，加入过量的酸性硫酸铁溶液将其氧化溶解，而三价铁盐被定量地还原为亚铁盐，用高锰酸钾标准溶液滴定所生成的亚铁盐，根据高锰酸钾溶液消耗量可计算出氧化亚铜的量，再从检索
表
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中查出与氧化亚铜量相当的还原糖量，即可计算出样品中还原糖含量萨氏(Somogyi)法萨氏(Somogyi)法将一定量的样液与过量的碱性铜盐溶液共热，样液中的还原糖定量地将二价铜还原为氧化亚铜，生成的氧化亚铜在酸性条件下溶解为一价铜离子，并能定量地消耗游离碘，碘被还原为碘化物，而一价铜被氧化为二价铜。剩余的碘用硫代硫酸钠标准溶液滴定，同时做空白试验，根据硫代硫酸钠标准溶液消耗量可求出与一价铜反应的碘量，从而计算出样品中还原糖含量。各步反应式如下：
2Cu+ + I2 = 2Cu2+ +2 I-
I2 + 2 Na2S2O3 = Na2S4O6 + 2 NaI3,5-二硝基水杨酸比色法 3,5-二硝基水杨酸比色法 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸(黄色）则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。碘量法
碘量法
(1) 原理
样品经处理后，取一定量样液于碘量瓶中，加入一定量过量的碘液和过量的氢氧化钠溶液，样液中的醛糖在碱性条件下被碘氧化为醛糖酸钠， 由于反应液中碘和氢氧化钠都是过量的，两者作用生成次碘酸钠残留在反应液中，当加入盐酸使反应液呈酸性时，析出碘，用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘，则可计算出氧化醛糖消耗的碘量，从而计算出样液中醛糖的含量。
醛糖 + I2 +3 NaOH = 醛糖酸钠 + 2 NaI +2H2O
I2 + 2 NaOH = NaIO + NaI + H2O
NaIO + NaI + 2 HCl = I2 + 2 NaCl + H2O
(2)适用范围
本法用于醛糖和酮糖共存时单独测定醛糖。适用于各类食品，如硬糖、异构糖、果汁等样品中葡萄糖的测定。4、操作步骤4、操作步骤4.1、制定标准曲线4.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取4.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取(1)还原糖：30mL水冲研钵2-3次(2)总糖：4.3、用蒽酮比色法测还原糖含量4.3、用蒽酮比色法测还原糖含量5、原始数据5、原始数据6、数据处理与问题6、数据处理与问题6.1、计算浓度
6.2、本实验的注意事项？蒽酮硫酸法标准曲线蒽酮硫酸法标准曲线
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