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植物组织过氧化氢含量的测定

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植物组织过氧化氢含量的测定配制100ml、100umol/L的过氧化氢溶液需要多少30%的过氧化氢原液?请写出计算过程。答:首先计算其摩尔浓度:若30%为其质量百分数双氧水30%浓度的试剂(上海国药集团出品),室温时实测密度为:1,122g/L,所以,1L30%含量的双氧水中过氧化氢含量为:1122g/L×1L×30%=337g又H2O2的分子量为34.0146,那么1L30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为:337/34.0146=9.908mol/L.100ml×10-3×100umol/L&...

配制100ml、100umol/L的过氧化氢溶液需要多少30%的过氧化氢原液?请写出计算过程。答:首先计算其摩尔浓度:若30%为其质量百分数双氧水30%浓度的试剂(上海国药集团出品),室温时实测密度为:1,122g/L,所以,1L30%含量的双氧水中过氧化氢含量为:1122g/L×1L×30%=337g又H2O2的分子量为34.0146,那么1L30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为:337/34.0146=9.908mol/L.100ml×10-3×100umol/L×10-6=9.908mol/L×VV=10-6L=1ul若30%为体积分数100%H2O2密度是1,440g/L,30mlH2O2的质量为1440g/L×30ml×10-3=43.2g,30%含量的双氧水中过氧化氢浓度为:43.2/34.0146/0.1=12.7mol/L.100ml×10-3×100umol/L×10-6=12.7mol/L×VV=7.9×10-7L=0.79ul植物组织中过氧化氢含量测定植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。【原理】H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。【仪器和用具】研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。【试剂】100μmol/LH2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O257μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水。【方法】1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,并按表加入试剂。测定H2O2浓度标准曲线配置表 试剂(ml) 离心管号 1 2 3 4 5 6 7 100μmol/LH2O2 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 4℃下预冷丙酮 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 5%硫酸钛 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 浓氨水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2   3000r/min离心10min,弃去上清夜,留沉淀 2mol硫酸 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2g,按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后5000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色。3.结果计算:植物组织中H2O2含量(μmol/gFw)=式中C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度(μmol);Vt—样品提取液总体积(ml);V1—测定时用样品提取液体积(ml);FW—植物组织鲜重(g)。4、实验结果: 1 2 3 4 5 6 7 H2O2浓度 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 吸光度A 0 0.049 0.126 0.315 0.425 0.625 0.778得出标准曲线如下图:测定所得样品的吸光度为0.188,带入得0.2459,考虑到称取鲜重2.116g代入公式含量为H2O2=0.116μmol/gFw。注意事项1、离心机离心时应该先配平。2、加试剂的顺序一定不可以错。3、每次加完一种试剂后都要充分摇匀。4、注意所用H2O2的浓度。
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