病毒的纯化和检测改

病毒的纯化和检测改文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！二、标本采取与送检应注意下列标准:1.对本身带有杂菌(如咽拭子、粪便)或易受污染标本,要进行病毒分离培养时,应使用抗生素。2.因病毒在室温中易失去活性,标本应低温保留并立即送检。3.血清学诊疗标本采取应在发病早期和病后各取血清,方便对比双份血清抗体效价动态改变。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！三、病毒和病毒成份提纯病毒纯度判定依据:物理均一性;病毒滴度与蛋白含量百分比;免疫反应单一而无非特异反应;结晶形成文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！在病毒不失活前提下,从宿主细胞中释放出来;病毒纯化能够应用提纯蛋白质技术方法;对大小、形状和密度高度一致病毒粒子,能够采取分级分离技术。病毒提纯关键标准:文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！四、病毒萃取液分级纯化沉淀法中性盐沉淀法聚乙二醇沉淀法有机溶剂沉淀法等电点沉淀法离心法差速离心法密度梯度离心法速率区带离心法等密度区带法凝胶色谱法电泳法文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！病毒感染单位（IU）:能够引发宿主或宿主细胞发生一定特异性反应病毒最小剂量;病毒效价:指单位体积(ml)病毒悬液感染单位数目(IU／ml)或称毒力;噬菌体效价（pfu):又称噬菌斑形成单位数指单位体积噬菌体,能使感染细菌裂解,产生噬菌斑数量。因为病毒粒子对细菌细胞感染率不会超出100％,所以依据噬菌斑或空斑计算出病毒粒子数总比噬菌体电镜下观察数低。一、侵染力测定第二节病毒检测文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！半致死剂量(LD50):使半数宿主细胞死亡病毒剂量称半致死剂量;半致感染剂量(ID50):使半数宿主细胞发生感染病毒剂量;半数组织培养感染剂量(TCID50):使半数组织培养物发生感染,产生细胞病变效应病毒剂量。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！二、病毒培养1.动物接种是最原始病毒培养方法,依据病毒种类不一样,选择敏感动物及适宜接种部位,如嗜神经性病毒（狂犬病毒）可接种于小鼠脑内,痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。2.鸡胚培养鸡胚对多个病毒敏感。通常采取孵化9～14天鸡胚,依据病毒种类不一样,将病毒标本接种于鸡胚不一样部位,最常见鸡胚接种部位有:羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等。3.组织培养法(tissueculture)或细胞培养(cellculture)法是将离体活组织块或分散组织细胞加以培养技术总称,为病毒分离判定中最常见基础方法。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！细胞改变有些病毒在细胞内增殖时可引发特有细胞病变,称为细胞病变效应(CPE)。常见改变有细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等作用于细胞膜,可使邻近细胞相互融合,形成多核巨细胞或称融合细胞。有些病毒(如狂犬病病毒、麻疹病毒等)可在培养细胞中形成胞浆或核内包涵体。病毒在培养细胞中增殖指标2.红细胞吸附(hemadsorption,HAd)流感或副流感病毒等感染细胞后,因为细胞膜上出现了血凝素(haemagglutinin,HA),含有吸附脊椎动物(豚鼠、鸡、猴等)红细胞能力,这一现象称红细胞吸附,常见来测定含有HA粘病毒与副粘病毒增殖。若有对应抗血清,则能中和细胞膜上HA,HAd不再发生,称红细胞吸附抑制试验。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！3.干扰现象(interference)部分病毒感染细胞时不出现CPE或其她易于测出改变(如HAd),但能干扰在其后感染另一病毒增殖。如风疹病毒感染Vero细胞时CPE不显著,但它能干扰后感染埃可病毒(ECHOV)增殖,从而阻抑后者所特有CPE。4.细胞代谢改变病毒感染细胞结果可使培养液pH值改变,说明细胞代谢在病毒感染后发生了改变。这种培养环境生化改变也可作为判定病毒增殖指标。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！(二)病毒数量与感染性测定1.蚀斑测定是一个检验和正确滴定病毒感染性方法。将稀释病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后,再覆盖一层融化半固体营养琼脂,使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性病毒在单层细胞中可产生一个不足感染灶。用活性染料(如中性红)染色,则活细胞着色,受病毒感染而破坏细胞不着色,形成肉眼可见蚀斑(plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成,称作蚀斑形成单位(plaqueformingunit,PFU)。病毒悬液中感染性病毒量滴度可用PFU／ml 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！2.50%组织细胞感染量(TCID50)测定法该方法是测定病毒能使50%组织培养细胞发生感染最小量。通常是将病毒悬液作10倍系列稀释,分别接种细胞,经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标,以最高稀释度能感染50%细胞量为终点。最终用统计方法计算出50%组织细胞感染量。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！三、病毒感染血清学诊疗原理是用已知病毒抗原来检测病人血清中有没有对应抗体,故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。另外,在采取临床标本及病人血清应注意病程,必需采取患者急性期血清与恢复期血清(双份血清)进行血清学试验。若第2次血清抗体滴度比第1次高出4倍以上时,才有诊疗意义。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！2.中和试验(neutralizingtest,NTtest)是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性一个试验。中和抗体是作用于病毒表面抗原(衣壳或包膜)抗体,同种不一样型病毒间通常无交叉,特异性高,而且抗体在体内维持时间长。中和抗体阳性不一定表示正在感染中,也可能因以前有过隐性感染所致。所以,中和试验适适适用于人群免疫情况调查,在临床诊疗上较少使用。1.免疫沉淀法使Ag-Ab形成不溶性沉淀。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！3.补体结合试验(complementfixationtest,CFtest)假如反应系统中存在待测抗体（或抗原）,则抗原抗体发生反应后可结合补体;再加入指示系统时,因为反应液中已没有游离补体而不出现溶血,是为补体结合试验阳性。假如反应系统中不存在待检抗体（或抗原）,则在液体中仍有游离补体存在,当加入指示系统时会出现溶血,是为补体结合试验阴性。所以补体结合试验可用已知抗原来检测对应抗体,或用已知抗体来检测对应抗原。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！补体结合试验图示受检系统指示系统溶血反应补体结合试验1、仅有抗原或抗体补体红细胞溶血素阳性阴性2、抗原抗体反应红细胞溶血素阴性阳性抗原抗体补体抗原/抗体文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！5.酶联免疫吸附测定法（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA）以待测抗原（或抗体）与酶标抗体（或抗原）特异结合反应为基础,经过酶活力测定来确定抗原（或抗体）含量。4.凝胶扩散法Ag和Ab相遇形成沉降带。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！ELISA基础类型先将已知抗体或抗原结合在某种固相裁体上,并保持其免疫活性。测定时,将待检标本和酶标抗原或抗体按不一样时骤与固相载体表面吸附抗体或抗原发生反应。用洗涤方法分离抗原抗体复合物和游离成份。然后加入酶作用底物催化显色,进行定性或定量测定。依据检测目和操作步骤不一样,有竞争法、双抗体夹心法、间接法三种类型常见方法。文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！此法可用于抗原和半抗原定量测定,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将抗原吸附于固相载体;加入待测抗原和一定量特异性抗体,使固相抗原与待测抗原二者竞争与抗体结合;经过洗涤分离,最终止合于固相抗体与待测抗原含量呈负相关。竞争法文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！此法常见于测定抗原,将已知抗体吸附于固相载体,加入待检标本(含对应抗原)与之结合。温育后洗涤,加入酶标抗体和底物进行测定。双抗体夹心法文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！此法是测定抗体最常见方法。将已知抗原吸附于固相载体,加入待检标本(含对应抗体)与之结合。洗涤后,加入酶标抗球蛋白抗体(酶标抗抗体)和底物进行测定。间接法文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！四、病毒核酸检测杂交法用于病毒检测有斑点杂交、细胞内原位杂交、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交等。PCR法现在多数病毒基因已经过分子克隆技术被明确了核苷酸序列,使得DNA扩增技术逐步发展为常规诊疗技术之一。反转录PCR文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！