复杂样品质谱分析技术的原理与应用

© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 特 约 来 稿 DO I: 10. 3724 /SP. J. 1096. 2010. 01069 复杂样品质谱分析技术的原理与应用 陈焕文 3 　胡 斌　张 燮 (东华理工大学 化学生物与材料科学学院 , 抚州 344000) 摘 　要 　原位、实时、在线、非破坏、高通量、低耗损的质谱学 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 是质谱分析技术发展的重要趋势。在无需样 品预处理的条件下对复杂基体样品中痕量待测物直接离子化技术的出现 ,极大地提高了质谱分析的效率 ,使 实际样品的快速质谱分析成为可能。本文着重综述了能够在无需样品预处理情况下对复杂基体样品离子化 的新兴质谱技术及其应用研究 ,系统阐述了直接离子化技术的基本原理和方法 ,介绍了几种典型的常压直接 离子化技术和装置 ,对直接离子化质谱分析技术在食品、药品、环境、活体分析、代谢组学、蛋白质组学以及生 物组织质谱成像等领域的典型应用进行了述评 ,讨论了提高复杂样品快速质谱分析选择性的可能方法 ,并展 望了常压直接离子化技术未来发展的可能趋势。 关键词 　快速分析质谱 ; 直接离子化技术 ; 仪器装置 ; 评述 　2010201219收稿 ; 2010204213接受 本文系国家科技部创新方法专项基金 ( No. 2008 IM040400 ) , 国际科技合作项目 ( No. 2009DFA30800 ) , 国家自然科学基金 (No. 20827007)资助3 E2mail: chw8868@gmail. com 1　引　言 质谱技术是现代众多分析测试技术中同时具备了灵敏度高、特异性好、响应速度快的普适性方法。 对于绝大多数质谱仪器而言 ,从待测物离子产生到获得离子的响应信号仅仅需要毫秒级的时间。然而 , 如采用目前大部分实验室装配的质谱仪器完成一个实际样品 (如尿样中痕量药物沙丁胺醇及其代谢产 物 )的定性和定量分析 ,需要采用色谱等分离技术将待测物组分分离后才可以进行后续的质谱检测 ,通 常需要数小时的时间。可见 ,实际样品的预处理过程是制约现代质谱技术分析效率的关键因素。 2004年 , Cooks等 [ 1 ]在无需进行样品预处理的情况下 ,利用电喷雾解吸电离 (DESI)技术 ,在常压下对固 体 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面上痕量待测物直接离子化 ,成功获得了不同表面上痕量物质的质谱 ,为实现无需样品预处理的常 压快速质谱分析打开了一个窗口 ,随即在国际上掀起了基于直接离子化技术的快速质谱分析研究热潮 , 标志着常压快速质谱分析技术研究新时代的来临。 常压快速分析质谱技术是泛指能够在无需样品预处理的条件下直接对各种复杂基体样品进行快速 分析的新兴质谱技术。因为进行快速质谱分析的关键是新兴的复杂基体样品的直接离子化技术 ,因此 在一般的讨论中 ,常压快速分析质谱技术的重点是离子化技术。经过约 5年的发展 ,目前已经出现了多 种直接离子化技术 ,建立了各具特色的实际样品快速质谱分析方法 ,对相关学科和领域的发展起到了重 要的推动作用。本文着重介绍常压条件下对复杂基体样品直接离子化技术的基本原理、实验装置和典 型应用 ,比较相关技术在概念和原理上的区别与联系 ,评述这些方法的优缺点 ,展望其可能的发展方向。 2　基本原理 2. 1　复杂基体样品直接离子化技术的工作模式 直接离子化技术开发体现了从传统封闭式到敞开式 ,从块状固体样品到各种固体 ,再扩大到包括膏 体、胶体、液体、气体等各种形态的样品 ,从二维平面电离到三维空间电离 ,从非生命静物分析到生命过 程的活体分析的思维过程 ,并通过实践 —理论 —实践循环往复进行 ,充分体现了辨证法的哲学思想。 第 38卷 2010年 8月 　　　　　　 　　　　　 分析化学 ( FENX I HUAXUE) 　特约来稿 Chinese Journal of Analytical Chem istry 　　　　 　　　　　　　 第 8期 1069～1088 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 封闭式的电离技术主要是指经典的质谱离子化技术 ,包括电喷雾电离 ( ESI) [ 2 ]、大气压化学电离 (APC I) [ 3 ]、基体辅助激光解吸电离 (MALD I) [ 4 ]、电子轰击电离 [ 5 ]以及低真空化学电离 (C I) [ 3 ]等。这些 技术的共同特点是 : (1)封闭式电离 　分析样品需要封闭在一定的管道 (如 ESI, APC I)或者一定的真空 环境 (如经典的 MALD I, E I, C I等 )中 ; (2)必要的样品预处理 　分析样品均需经过至少两步的样品预 处理阶段 ,将不同物质形态的样品转化成为分析样品。经过数十年的发展 , ESI/APC I技术已经很成熟 , 而且 ESI/MALD I技术还因为实现了生物大分子的质谱分析而获得了 2002年的诺贝尔化学奖 [ 6 ]。然 而 ,各种实际样品均含有大量物理及化学性质各异的基体物质 ,因此需要经过繁琐而复杂的样品预处理 后才能够用经典质谱技术对其进行检测 (图 1) ,导致分析效率较低 ,难以满足现代分析化学对原位、实 时、在线、非破坏、高通量、低耗损等质谱学方法的迫切需要。 图 1　传统的离子化技术工作 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 Fig. 1　Concep tual illustration of traditional ways to generate ions of analytes 关键步骤 1 ( Key step 1) : 将不同状态的样品通过预处理 ,转化为不含大量复杂基体的分析样品 ( Comp lex matrices of raw samp les must be separated) ;关键步骤 2 ( Key step 2) :采用合适的离子化技术在特定的条件下进行离子化 ,产 生待测物离子 (U sing different ionization techniques under app rop riate conditions)。 由能量守恒和电荷不灭定律可知 ,能量交换和电荷传递完全可以在常压条件下进行。以此为出发 点 ,结合大量的实验过程 ,可总结出复杂基体样品直接离子化的工作模式 ,而发展出适用于指导复杂基 体样品直接电离技术研究的二维模型和三维模型 (图 2a)。不同类型的能量源 (如光子 ,电场等 )通过 关键两个步骤 : (1)作用于特定载体 (如试剂 ,微小液滴等 )上 ,形成具有一定能量的带电体 (如初级试剂 离子 ,带电液滴等 ) ; (2)采用一定手段将此电荷和能量的载体与二维表面或三维空间中的原生态样品 直接作用 ,在相对开放的空间内把能量和电荷传递给待测物分子 ,完成待测物的离子化 ,形成待测物离 子后进入质谱仪中进行后续分析。图 2b为二维理论模型下 DESI离子源对表面中痕量物质进行解吸电 离的基本过程。在 DESI技术中 ,经过步骤 1 (即电喷雾 ESI) ,将电场的能量转移到带电的微小液滴中 ; 这些负载了能量和电荷的液滴被喷射到二维表面上 ,液滴中含有的溶剂 (如甲醇 ,水等 )立即与固体体 表的待测物发生作用 ,发生二维表面的萃取、溶解过程 ;同时 ,液滴从表面反弹后形成更加细小的液滴 , 导致溶剂快速蒸发 ,发生由液相转变为气相 (即相转移 )过程 ,导致电荷残留在溶剂内的待测物分子中 , 从而完成了二维表面中待测物分子的离子化过程 ,即关键步骤 2。该过程目前已被相关研究所证实 ,也 解释了在 DESI过程中需要采用甲醇等有机溶剂的原因 [ 1, 7 ]。除了 DESI技术外 ,采用这种模式进行工 作的技术还有 DeSSI[ 8 ]和 EASI[ 9, 10 ]等。 表面解吸化学电离 (DAPC I) [ 11～16 ]技术采用常压电晕放电为基本手段 ,通过上述的步骤 1,将电场 的能量转移到带电的载体中。但是与 DESI不同 , DAPC I技术有两种工作模式。其一是在无有机溶剂 和无高速雾化气流 ( Gasless DAPC I)的条件下工作 ,利用空气中的水生成初级离子进行工作 ,电离效率 高 ,能够在单位时空内产生比 DESI更丰富的能 /荷载体。这些负载了能量 /电荷的载体被电场加速后 溅射到二维表面上 ,直接与裸露在固体体表的待测物发生能 /荷传递作用 ,从而完成了二维表面中待测 物分子的离子化过程 (图 2c) ,即步骤 2。在这个工作模式中 , DAPC I对各种挥发性物质或者在该固体 表面上结合不牢固的物质的灵敏度特别高 ,但是对于结合牢固的物质 (如沉积在纤维上的蛋白质 )则难 以获得理想的灵敏度。为了顺利地将这些结合相对牢固的物质从表面上解吸出来进行离子化 ,可以采 用第二种模式 ,利用电晕放电的方式获得高密度的带电液滴 ,然后将液滴喷射在固体表面 ,在动量的作 0701　　 分 析 化 学 第 38卷 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 用下沿着表面向前运动 ,能够将表面上的一些可溶性物质快速溶解在液体中 ,由于液滴带有大量电荷 , 溶解后的物质则根据其对电荷的结合能力大小结合不同数目的电荷 ;与此同时 ,液滴中的溶剂迅速蒸 发 ,从而形成一些更加微小的液滴和气相离子 ,完成表面物质电离的过程 (图 2d)。在 DAPC I的这两个 模式中 ,其显著的区别是宏观上是否使用液体试剂来产生相对较大的带电液滴 ,而微观上对应的是离子 产生过程中是否有表面溶解 2去溶的过程。此外 ,相应的二维模型也反映了 DESI和 DAPC I二者原理上 存在的区别 ,预言了 DAPC I具有的独特性能 ,包括灵敏度高、选择性好 ,操作方式更加灵活多样 ,能够在 一定条件下分析粉末、胶体等样品 ,并且对样品和环境无毒无污染。 图 2e展示了三维模型下电喷雾萃取电离 ( EESI) [ 17, 18 ]技术的工作原理和基本过程。在步骤 1中将 电场的能量转移到带电的载体中 ,这些载体在三维空间内与中性物质相互接触 ,发生能 /荷传递作用 ,从 而完成了三维空间中待测物分子的离子化过程 ,即关键步骤 2。显然 ,复杂基体样品在 EESI离子源中 被分散在一个相对较大的三维空间内 ,能量与电荷的传递以及中性物质的萃取和离子化过程均在此空 间内完成。根据能量和电荷载体的不同 ,三维空间内可以根据需要发生选择性的萃取或化学反应 ,增加 了该过程的可控性。相对于二维模型而言 ,由于进一步分散了复杂基体 , EESI对各种复杂基体的承受 能力进一步增强 ,从而能够对各种样品进行长时间的稳定监测 ,使得 EESI成为能够对样品进行实时、在 线质谱分析的重要工具。由于样品本身与能量源 (如 ESI高电压 )相距较远 ,具有较高的安全性 ,从而 发展出来了对各种生物样品无刺激性的原位、活体质谱分析技术。诺贝尔奖得主、ESI技术发明人 Fenn 图 2　直接电离质谱技术的基本方式 Fig. 2　Theoretical modes for direct ionization of ambient analytes a. 复杂基体样品直接电离技术研究的二维模型和三维模型 (Concep tual illustration of 22D and 32D modes) ; b. 二维 理论模型下 DESI离子源对表面中痕量物质进行解吸电离的基本过程 (Desorp tion / ionization of analytes on surface using desorp tion electrosp ray ionization (DESI) ) [ 20 ] ; c. DAPC I对表面中待测物分子的离子的离子化过程 ( Formation of ions of volatile analytes on surface using desorp tion atmospheric p ressure chem ical ionization (DAPC I) without charged drop lets) [ 20 ] ; d. 鞘气辅助 DAPC I对表面物质电离的过程 (Desorp tion / ionization of non2volatile analytes on surface using DAPC Iwith charged drop lets) [ 20 ] ; e. 三维模型下 EESI电离技术的工作原理和基本过程 ( Formation of analyte ions in a 32D space using extraction electrosp ray ionization ( EESI) )。 1701第 8期 陈焕文等 : 复杂样品直接离子化技术的原理与应用 　　 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 曾预言了 EESI技术的广阔用途和良好的分析性能 [ 19 ] ,这与 EESI的三维空间工作模式有关。独特的三 维模型决定了 EESI具有更高的灵活性和宽广的用途 ,以致 EESI是目前进行生物活体分析、原位在线分 析和远距离分析的有效质谱方法。 从图 2a可见 ,二维模型与三维模型之间既存在本质的区别和联系 ,也可以在一定的条件下相互转 化。如液体样品 ,可以先将液体样品滴加在固体样品的表面 ,干燥后再采用典型的二维技术 (如 DESI, DAPC I等 )进行分析 ;也可以将液体样品直接引入到三维空间内 ,采用 EESI等三维技术进行分析。与 此类似 ,对于固体表面的样品 ,既可直接采用 DESI等进行分析 ,也可以采用中性解吸 (ND )的办法 ,将 样品引入到一个相对开阔的三维空间内 ,采用 EESI技术进行分析。 综上所述 ,常压直接质谱以某种能量产生初级离子 ,通过一定步骤实现复杂基体中能量与电荷的传 递 ,并根据待测物分子物理化学性质的差异 ,对能量和电荷进行选择性吸收 ,从而引发复杂基体样品中 待测物的离子化。此过程一般分为两步 : (1)初级离子的产生 　采用传统的离子源 (如化学电离、电子 电离、激光电离、等离子体电离 )对试剂进行离子化 , 产生初级离子 ; (2)样品的离子化 　初级离子与样 品进行作用使样品离子化。对于表面上的样品 ,辅助解吸技术对样品进行解吸电离 ,对于喷雾的液体或 气体样品 ,初级离子束与中性样品喷雾进行微萃取电离。值得注意的是 ,初级离子的产生与样品处理过 程并不是严格地完全独立的。有些离子源初级离子的产生与样品解吸处理在时间上和空间上是同步 的 ,例如激光解吸技术 ,光子用于待测物的解吸 ,又用于待测物的电离。在 DESI技术中 ,电喷雾产生的 带电液滴也是既具有解吸作用 ,又具有电离作用。 目前 ,关于快速质谱分析的报道很多 ,这些文献报道的多为新的离子化技术 ,已经发表了多篇综 述 [ 22～25 ]。表 1列出了近年来发表的部分代表性技术。 表 1　常压离子化技术的比较 Table 1　Comparison of ambient ionization methods 初级离子 /电离能量 Primary ions/ ionization energy 技术名称 Technique 样品状态 Physical states of samp le 技术特点 Dom inant samp ling p rocess 发表时间 Publishing time ( Year) 以喷雾电离 (电喷 雾 /超声喷雾 )产生 带电液滴 Charged drop let gen2 erated by sp ray ioni2 zation ( electro2sp ray/ sonic sp ray) 电喷雾解吸电离 Desorp tion electrosp ray ionization, DESI[ 1 ] S 3 , L3 喷射式解吸电离 Jet desorp tion ionization , JeD I[ 27 ] S, L 带电液滴的表面碰 撞 解 吸 Charged drop let jet surface desorp tion 2004 2008 电喷雾辅助激光解吸电离 Electrosp ray2assisted laser desorp tion ionization, ELD I[ 28 ] S, L 激光消融电喷雾电离 Laser ablation elecreosp ray ionization, LAESI[ 29 ] S, L 激光热消融 /解吸 Laser beam ablation / desorp tion 2005 2007 基质辅助激光解吸电喷雾 Matrix2assisted laser desorp tion electrosp ray, MALDESI[ 30 ] S, L 基质辅助激光解吸 Matrix2assisted laser desorp tion 2006 红外线激光辅助解吸电喷雾电离 Infrared laser assisted desorp tion electrosp ray ioniza2 tion, IRLADESI[ 31 ] S, L 红外激光辅助解吸 Infrared laser assisted desorp tion 2008 中性解吸电喷雾萃取电离 Neutral desorp tion extrac2 tive electrosp ray ionization, ND2EESI[ 32 ] S, C3 , L 中性气体 /喷雾解吸Gas jet neutraldesorp tion 2007 电喷雾萃取电离 Extractive electrp sp ray ionization, EESI[ 17 ] L, G 3 纳升电喷雾萃取电离 Nano Extractive electrp sp ray ionization, nanoEESI[ 33 ] L 熔滴电喷雾萃取电离 Fused drop let electrosp ray ionization, FDESI[ 34 ] L 中性液体萃取 Extraction using a neutral liquid sp ray 2006 2005 表面取样探针 Surface samp ling p robe, SSP[ 35 ] S, L 液相微临界表面取样探针 L iquid m icrojunction surface2samp ling p robe, LMJSS[ 23 ] S, L 密封型表面取样探针 Sealing surface2samp le p robe, SSSP[ 36 ] S, L 中性表面薄层萃取 Extraction using a neutral film on surface 2004 2008 2004 超声喷雾解吸电离 Desorp tion sonic sp ray ionization S, L 常压超声喷雾电离 Easy ambient sonic sp ray ioniza2 tion, EASI[ 9 ] S, L 中性高速喷雾表面 解吸 Neutral high velocity sp ray desorp2 tion surface 2006 2008 2701　　 分 析 化 学 第 38卷 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 续表 1 (Continued to Table 1) 初级离子 /电离能量 Primary ions/ ionization energy 技术名称 Technique name 样品状态 Physical states of samp le 技术特点 Dom inant samp ling p rocess 发表时间 Publishing time ( Year) 以电场电离 (电子 / 等离子体 )产生初级 离子 Primary ions genera2 ted by electric field ionization ( electron / p lasma) 表面解吸常压化学电离 Desorp tion DAPC I[ 37 ] atmospheric p ressure chem ical ionization S, L 实时在线分析 D irect analysis in real time, DART[ 26 ] S, L, G 喷射离子气流表面 解吸 Gas ions jet desorp tion surface 2004 2005 常压萃取化学电离 Extractive atmospheric p ressure chem ical ionization[ 38 ] L, G 离子气流萃取 Gas ions extractive 2008 热解吸常压化学电离 Thermal desorp tion atmospheric p ressure chem ical ionization, TDAPC I[ 39 ] S 常压固体分析探针 Ambient solid analysis p robe, ASAP[ 40 ] S, L 离子气流喷射表面 热解吸 Gas ions jet thermal desorp tion surface 2004 2005 激光消融诱导串联等离子体 Laser ablation inductively coup led p lasma, LA2ICP[ 41 ] S 介质阻挡放电电离 D ielectric discharge barrier ionization, DBD I[ 42 ] S, L 低温等离子体探针 Low temperature p lasma p robe, LTP[ 43 ] S, L, G 等离子体辅助解吸电离 Plasma assisted desorp tion ionization, PAD I[ 44 ] S, L 常压辉光放电解吸电离 A tmospheric p ressure glow discharge desorp tion ionization, APGDD I[ 45 ] S, L 氦气常压辉光放电电离 Helium atmospheric p ressure glow discharge ionization, HAPGD I [ 46 ] S, L 等离子体气流喷射 解吸表面 Gas jet with p lasma desorp tion surface 2005 2007 2008 2007 2007 激光电离产生气相 离子 Gas ions generated by photo ionization 表面解吸激光电离 Desorp tion atmospheric p ressure photo ionization, DAPP I[ 47 ] S, L 常压基质辅助激光解吸电离 A tmospheric p ressure laser matrix2assisted desorp tion ionization, APMALD I[ 48 ] S, L 常压激光解吸 /电离 atmospheric p ressure laser desorp tion / ionization, APLD I[ 49 ] S 等离子体气流喷射 解吸表面 Gas jet with p lasma surface desorp tion 2007 2004 2009 热电离产生气相离 子 Gas ions generated by thermal ionization 激光二极管热解吸 Laser diode thermal desorp tion, LDTD [ 50 ] S, L 激光 Laser diode desorp tion 2007 热解吸化学电离 Thermal desorp tion chem ical ionization, TDC I[ 51 ] S, L 常压 热 解 吸 电 离 A tmospheric p ressure thermal desorp tion ionization, APTD I[ 52 ] S, L 有机盐热解吸 O rganic salts ions thermal desorp tion 2005 2006 　S3 : 固体 ( Solid) ; L3 : 液体 (L iquid) ; G3 :气体 ( Gas) ; C3 : 胶体 (Colloid)。 　图 3　典型离子化技术的能量利用形式及其相互关系 Fig. 3　Typ ical methods to utilize energy for ionization of ambient analytes 内核 :能量源 ;五边形 : 5种常见能量形式 ;红色区间 :表示初 级能量载体 ;蓝色区间 :表示用于二维表面样品分析的技术 ; 外围粉红色空间 :表示用于三维空间样品分析的技术 ( The inner core: energy source; pentagon: 5 ways to use energy for p roduction of ionic reagents; red region: p rimary ionic reagents generated using 5 different methods; blue region: techniques based on the 22D ionization mode; p ink region: techniques based on the 32D ionization mode)。然而 ,由于不同研究者所采用的技术名称 (Acronym )太多 ,而且一般为描述性的缩写 (如 DART) [ 26 ] ,难以反映技术的本质。目前 Cooks等已倡议根据离子化过程的物理本质为界定 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ,可能有希望减少同一技术的重复命名 [ 22 ]。从本质上来看 ,目前利用能量的主要途径包括电场、电子、光、热和激发态原子等形式。图 3展示了这些能量利用方式所产生的代表性技术 ,以及部分技术之间的物理联系。电场能是目前在直接离子化技术中采用较多的能量形式。根据实施方式的不同 ,又可以分为电喷雾电离 ( ESI)、电晕放电 (Corona discharge)和等离子体 ( Plasma)等形式。在二维电离模型中 ,与此对应的代表性离子化技术有 DESI, DAPC I, DBD I和 LTP等广为人知的技术 ;在三维电离模型中 ,与电喷雾电离和电晕放电对应的技术主要有 EESI, nanoEE2SI[ 33, 53 ] , EAPC I[ 38 ]等。虽然有些技术如 EAPC I尚未获得深入研究 ,但是根据这些技术本身的物理过程可 3701第 8期 陈焕文等 : 复杂样品直接离子化技术的原理与应用 　　 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 以预测 ,这些技术将在复杂样品的快速分析方面具有一定的特色。这些特色主要取决于初级离子的产生 方式、电荷与能量的载体及其能量传递等因素。表 2简单归纳了常见技术的能量传递方式与特点。 表 2　常见离子化技术的特征 Table 2　Characteristics of common ionization techniques 能 源 Energy source 电场 Electric field 电喷雾 ESI 电晕放电 Corona discharge 等离子体 Plasam 电子 Electron 光 L ight 热 Heat 快原子 A tom 能量载体 Energy carriers 带电液滴 Charged drop lets 带电液滴或 气相分子 Charged drop lets or gaseous molecules 等离子体 Plasam 电子 Electrons 质子 Photons 辐射 Radiation 原子 A tom 初级离子 Primary ions 质子 Protons 质子 ,电子 Protons, electron 带电粒子 Charged particles 电子 Electrons 质子 ,电子 Protons, electrons 自由基离子 Ionica radicals 亚稳原子 Metastable atom 目标分子 Target molecules 极性物质 Polar species 极性 /非 极性物质 Polar/ non2polar species 极性 /非 极性物质 Polar/ non2polar species 极性 /非 极性物质 Polar/ non2polar species 非极性物质 Non2polar species 非极性物质 Non2polar species 极性 /非 极性物质 Polar/ non2polar species 离子形式 Ions formed [M + H ] + [M ] + , [M + H ] + [M ] + [M ] + [M ] + [M ] + · [M + H ] + 硬 度 Hardness + + + + + + + + + + + + + 　 + : 以 ESI源为最软级别 (Designates the softest level achieved by ESI) ; + + + + : 以 E I源为最硬级别 (Designates the hardest level achieved by E I)。 2. 2　喷雾电离 在经典质谱技术中 , 喷雾电离技术是通过鞘气或电场使液体产生带电小液滴的电离技术 ,如 ESI。 在快速质谱分析技术中 ,喷雾技术仅用于产生试剂离子及其载体 ,并将这些能量和电荷的载体转移到复 杂物质样品上 ,以便进行快速的电离。喷雾电离技术有电喷雾电离 ( ESI) [ 2, 5 ]、超声喷雾电离 ( SSI) [ 54 ]、 纳升电喷雾电离 ( nanoESI) [ 55 ]及超声电喷雾电离 ( ESSI) [ 56, 57 ]。表 3简单归纳了喷雾电离技术的离子 产生方式和技术条件 (条件参数无严格界限 )。 表 3　喷雾离子化技术的参数比较 Table 3　Comparison of sp ray ionization parameter 离子源名称缩写 Ionization source name acronym 鞘气压力 Sheath gas p ressure (p si) 喷雾溶剂流速 Solvent flow rate (μL /m in) 毛细管电压 Voltages app lied on the cap illary ( kV) ESI 200～300 1～20 1. 0～5. 0 Sonic sp ray ionization ( SSI) 200～450 1～20 0 Nano ESI 0 0. 01～1. 0 3. 0～5. 5 Electrosonic sp ray ionization ( ESSI) 200～450 1～50 0. 01～5. 5 　 2. 3　电场放电 基于电场放电产生初级离子的技术主要有采用常压电晕放电进行的大气压化学电离 (APC I)和等 离子体电离。在电晕放电空间插入绝缘介质的非平衡态气体放电称为介质阻挡放电 (DBD ) [ 42 ]。DBD 产生的等离子体可作为能量和电荷的载体 ,用于作为质谱的离子源或光谱的激发源。等离子体的放电 过程中会产生大量的化学性质非常活跃的自由基 (如 HO·, O·, NO·等 ) ,它们易与其它原子、分子 等发生反应获得电子 ,从而电离样品分子。在电场作用下 ,以氦气为试剂 ,可获得激发态的氦原子。如 果激发态的氦气原子直接与待测物碰撞 ,也可以引发待测物的电离。此时 ,如果待测物中没有活泼氢的 供体 (如甲醇 ,水等 ) ,则可以获得待测物自由基阳离子。这些阳离子具有与质子化离子不同的质谱学 行为 ,也是一个值得重视的研究领域。 同样 ,在氦气介质中 ,采用辉光放电 (APGD ) [ 45 ]与低温等离子体 (LTP) [ 46 ]技术能在大气压条件下 进行电极间的匀稳放电 ,产生激发态的氦原子并产生辉光 ,同时产生的大量电子和正离子 ,后者可用作 能量和电荷的载体对样品中的待测物进行电离。电场放电多采用气体 (一般为潮湿空气、氮气、氦气 4701　　 分 析 化 学 第 38卷 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 等 )为介质 ,产生的初级离子 (如氦离子或激发态氦原子 )电离能较高 ,可以直接对非极性分子电离 ,并 且一般不会污染样品。 2. 4　光致电离 用作光电离的光源主要有紫外、红外、激光等 ,通常采取直接光电离或者基质辅助激光电离产生初 级离子对样品进行电离。由于溶剂和被分析物均有可能被电离 ,所以获得谱图一般在低质荷比端较为 复杂。紫外光源的光子能量一般大于常见分析物分子的电离电势 ,而且小于空气组分和绝大多数常用 溶剂的电离电势。因此 ,合理选择波长就可选择性电离待测物 ,减少基体物质的干扰。激光具有方向性 好、分辨率高、能量高的特点 ,非常适合对检测生物大分子。 2. 5　热致电离 热电离是通过高温、热辐射光子的能量激发分子离子化的技术。在常压质谱技术中通过加热有机 盐 ,如离子液体或芳香族重氮盐 ,在强烈热辐射下快速分解形成阳离子和阴离子。在外加电场的作用 下 ,这些离子具有很高的反应活性和电离能力 ,可以与一般离子源难以离子化的弱极性、非极性化合物 作用产生分子 2离子反应而使样品中待测物离子化。 由于热电离是在没有溶剂的作用下产生气相离子 ,加热的过程同时还起到热解吸的作用。通过载 气将加热的离子液体蒸汽吹扫在样品表面上 ,离子液体中的阳离子与表面的待测物进行气相离子 2分子 反应 ,其带电的反应物和产物都可用质谱进行分析检测 [ 51 ]。可见 ,这种热电离方式中存在着较为复杂 的物理化学过程 ,可望发展成为常压化学 (Ambient chem istry)研究的重要工具。 如上所述 ,不同的常压质谱电离技术 ,化学和物理过程也不同 ,导致获得的待测物离子的形式和能 量均可能存在差异。这种差异可以在一些爆炸物检测的研究中看到 [ 11, 22, 42, 58～63 ]。例如 ,用 LTP检测炸 药 TNT(MW 227)时 ,主要获得其去质子化负离子 (m / z 226) ,而用 DAPC I和 DART则同时获得 TNT的 两个信号 (即 m / z 226, 227) ,这两个信号的比率随电离源工作条件的变化而变化 ;在 DBD I条件下 ,可检 测到 m / z 197碎片离子 ,甚至使该碎片成为质谱全扫描检测 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 的最高峰。单粒子气溶胶质谱 ( SPAMS)则以去质子化 TNT离子作为基峰 ,没有出现高丰度的自由基负离子 (m / z 227)。相反 ,使用 DESI和 EESI则可获得 TNT的自由基负离子 (m / z 227)为基峰。有趣的是 ,去质子化的 TNT信号 (m / z 226)只能在用二次电喷雾电离 ( SESI)条件下获得显著的信号强度 ,这也表明 SESI的机制与 DESI 和 EESI的截然不同。同时 , TNT自由基负离子也只能在能量较低的单光子电离质谱中观察到。因此 , 这些数据表明 , EESI/DESI是这些技术中最为温和的技术 ,而 SESI则是最硬的技术 ,其它技术如 DAPC I 等则介于这个范围之间。基于电喷雾技术的常压质谱电离技术在爆炸物检测方面通常比电晕放电技术 更加温和。 3　典型仪器装置 3. 1　D ES I技术 DESI的典型装置由 ESI装置和承载样品表面两部分组成 (图 4a) ,是 ESI和解吸附作用的综合体 现。DESI技术是典型的二维技术 ,能够对非粉尘状固体表面进行直接分析。对于液体样品则可以将样 品溶液滴在承载表面 (如聚四氟乙烯、纸张等 )上 ,然后进行 DESI2MS检测。影响 DESI离子化效率的参 数较多 ,主要有 : (1)空间参数 ,包括喷射角度、距离 ; (2) ESI工作参数 ,包括喷射溶剂的毛细管内径、雾 化气流速、喷射溶液流速及所加载的电离电压 ; (3)溶液参数 ,包括 ESI喷射溶液的组成和被滴加的样 品的组成 ; (4)表面参数 ,包括载体的物化性质、表面温度及表面加载的电压等。这些参数同样影响其 它表面解吸电离技术的离子化效率。研究表明 , DESI与 ESI的谱图非常类似 [ 24, 37, 64～68 ] ,可以对照 ESI 的谱图进行分析和鉴定。DESI技术已经广泛应用于化学反应和分析各种化合物 , DESI技术的原理、装 置、应用已有评述 [ 64～66, 68, 69 ] ,本文不作赘述。 为了降低实验参数的影响 ,提高 DESI的稳定性和结果的可重复性 , Cooks等将开放式 (Open2air) DESI源发展成为新型的半封闭的独立结构 DESI源 ( Geometry2Independent DESI) [ 69, 70 ]。在这种新型 DESI源中 , ESI喷雾方向与质谱离子的入口方向相反 ,而且位置相对固定 (图 4b) ,将待测样品 (如手指 5701第 8期 陈焕文等 : 复杂样品直接离子化技术的原理与应用 　　 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 的皮肤等 )直接放置在 ESI离子源的喷嘴处 ,则可以获得稳定的信号 ,显著地简化了实验操作 ,提高了精 密度。但是 ,该结构的 DESI中 ,离子的收集效率仍然较低 ,如果能够将产生的待测物离子全部引入到 质谱中 ,则有望将 DESI的灵敏度再提高 1～2个数量级。 　图 4　 ( a)经典 DESI离子源装置 [ 1 ]和 ( b) GI2DESI2MS结构示意图 [ 2 ] Fig. 4　 ( a) Schematic diagram s of open2air DESI source[ 1 ] and ( b) Geometry2independent DESI source with easy operation[ 2 ] 3. 2　DAPC I技术 表面解吸常压化学电离源是一种结合了 APC I和 DESI主要优点的新型离子源。研究表明 , DAPC I 离子源 (图 5)具有如下显著优点 : (1)高灵敏度 ,在 DAPC I中 ,电晕放电能够比 ESI等产生更多的初级 　图 5 　DAPC I离子源的原理和典型仪器装 置 [ 14 ] Fig. 5　Schematic diagram and p ictures of differ2 ent versions of DAPC I sources[ 14 ] 离子 ,因而具有较高的灵敏度 ; ( 2 ) DAPC I在常温常压下 , 采用低压 (0～0. 2 MPa)潮湿的空气或水蒸汽等作为试剂 离子 ,具有电离效率高、无化学污染的特点 ; ( 3) DAPC I可 以在不需要鞘气和液态水等试剂的辅助下工作 ,从而可以 方便地检测固体粉末样品 ; ( 4 )由于高密度的试剂离子 , DAPC I对弱极性和非极性的物质的检测能力比 DESI和 EESI高 ; (5) DAPC I利用氦气等作为辅助气体时 ,可以获得 自由基阳离子 ,甚至获得生物分子如多肽等的自由基阳离 子 [ 12 ] ; (6) DAPC I中可以方便地进行试剂的添加和切换 ,因 而可通过选择性的化学反应来提高分析的选择性 ; ( 7 ) DAPC I结构简单、甚至可以不需笨重的高压氮气钢瓶和有 毒试剂 ,有利于在小型质谱仪中进行现场快速分析。但是 , 普通无鞘气辅助的 DAPC I没有足够的解吸能力 ,不能解吸出大分子和结合强度较高的分子。胡斌 等 [ 71 ]采用改进的喷雾辅助DAPC I,成功检测了复杂基体的蛋白质等大分子的。可以采用辅助加热系 统 [ 14 ] ,对三聚氰胺等强吸附物质进行较好地解吸电离。由于 DAPC I探针式结构 ,还可应用于生物样品 的质谱成像研究 [ 15 ]。 目前 , DAPC I离子源已经研发出能够与多种常见质谱仪器配套使用的具有较高自动化程度的数字 式 DAPC I离子源 ,能够对各种实验参数进行控制和操作 ,提高了操作的方便性、测量的稳定性和结果的 可靠性。 3. 3　D BD I技术 介质阻挡放电电离 (DBD I)一般采用玻璃等作为阻挡介质 ,在电极之间施加高频的交变电压 (约 10 kV)进行介质阻挡放电 ,与此同时将中性气体通入放电电极之间 ,产生大量的试剂离子 ;在电场和气 流的共同作用下 ,这些试剂离子对放置在绝缘介质表面上的样品进行解吸电离 ,产生大量的待测物离子 以供后续的质谱分析 (图 6)。与 DAPC I类似 , DBD I目前仍然主要应用于小分子分析。与此类似的低 温等离子体 (LTP)探针 [ 43, 72, 73 ]也是采用介质阻挡放电电离 ,但 LTP的电极由筒状外电极和内置的同轴 柱状电极组成。施加合适的电压后在电极间形成等离子体 ,并由载气吹出形成探针式的低温等离子体 (图 7)对样品进行电离 ,而不需要将样品放置在两个电极之间。在 LTP的两个电极之间通以持续的气 6701　　 分 析 化 学 第 38卷 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 流 ,该气流起到维持放电、冷却电极和提供试剂离子等重要作用 ,还将产生的低温等离子体吹扫到表面 上 ,从而实现对复杂基体中待测物 (包括大分子和小分子 )的快速电离。 　图 6　DBD I2MS原理与结构示意图 [ 42 ] Fig. 6　Schematic diagram of dielectric barrier discharge (DBD I) source[ 42 ] 　图 7　LTP2MS原理与结构示意图 [ 43 ] Fig. 7　Schematics of an low temperature p lasma (LTP) source [ 43 ] 通过等离子放电提供基本能量进行电离的类似技术还有 APGDD I[ 45 ]和 HAPGD I[ 46 ]。这些技术采 用辉光放电在大气压下产生激发态氦原子等作为电离试剂 ,对表面上的待测物进行碰撞后发生解吸电 离 ,形成的待测物离子进入质谱进行质量分析。辉光放电的特点是电流密度小 ,温度不高 ,适合非热稳 定物质的分析。与此类似 ,低温等离子体具有电离温和、温度低、装置简单等优点 ,既能够在等离子体内 部直接使气体样品离子化 ,也能在固体表面将待测物分子解吸电离 ,应用非常广泛。最近 ,刘月英等 [ 74 ] 等采用 LTP探针对字画中的印章化学成分进行质谱成像 ,比较不同品牌的成像图可获得各品牌印泥中 独有的化学物质 ,从而对字画进行鉴定。随着研究的深入 , DBD I离子源将可能应用于形态分析的领域 , 并结合小型质谱仪 ,充分发挥其结构简单、快速方便的优势而应用于现场分析。 　图 8　DAPP I原理与结构示意图 [ 47 ] Fig. 8　Schematics of DAPP I source[ 47 ] 3. 4　DAPP I技术 与 DESI类似 ,大气压解吸光电离 (DAPP I) [ 47 ]也是采 用喷雾解吸的表面分析技术。与 DESI不同 , DAPP I采用的 是中性喷雾 ,同时采用紫外灯照射解吸后的样品 (图 8)从 而发生光致电离。与大气压基质辅助激光解吸电离 (AP2 MALD I)不同 , AP2MALD I需要将样品小心地与基体混合 , 干燥后在大气压下采用激光照射样品 ,基体物质吸收光子 能量首先电离 ,形成试剂离子后与样品中的待测物进行电 荷和能量交换 ,从而产生待测物分子离子和准分子离子 ,适 合于分析多肽、蛋白质、核酸等生物大分子。在 DAPP I中 , 如采用苯作试剂 ,苯被紫外光激发电离为自由基阳离子后与样品可进行自由基转移 ,使样品成为自由基 阳离子 ,或者进行电荷转移使样品质子化进入质谱分析。此外 ,中性液滴在雾化气的作用下能够将样品 从表面进行萃取 ,形成气溶胶后在雾化气的作用下迅速去溶 ,因此光子与裸露的待测物分子作用 ,可以 获得较普通光电离 (如 MALD I)更高的灵敏度。 3. 5　APTD I技术 大气压热解吸电离 (APTD I) [ 52, 75 ]技术同其它二维表面解吸技术一样 ,首先将样品承载在表面上 , 离子化试剂 (如离子液体等 )放置在管内加热 ,同时在管内通以载气将离子液体蒸汽和分解后形成的离 子吹扫在样品表面 ,从而对样品进行解吸电离 (图 9)。在 APTD I中 ,由于压力大 ,离子的平均自由程 短 ,碰撞频率明显增加。而离子液体等形成的阳离子一般具有化学活性 ,因此在这个过程中很容易发生 离子 2分子反应 ,形成离子液体中的阴 /阳离子与表面的待测物的配位离子。此外 ,通过这种加热电离的 方式可以方便地产生金属有机物的气相离子簇 ,甚至发生离子的氧化还原反应 ,不过形成的产物可以方 便地进行串联质谱表征 [ 51, 52, 75 ]。 7701第 8期 陈焕文等 : 复杂样品直接离子化技术的原理与应用 　　 © 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 　图 9　APTD I2MS原理与结构