免疫组化实验
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及流程试剂：即用型免疫组化Elivisionplus试剂盒（鼠|兔）（迈新KIT-9901）（迈新KIT-9902）二抗批号1203209901效期201301120502405C效期201304试剂A：增加剂试剂B：酶标羊抗鼠兔抗IgG聚合物DAB显色试剂盒（迈新KIT0031）溶液：蒸馏水、（PH7.25~7.35）、柠檬酸（PH6.0）、乙醇（无水、95%、85%、75%）、二甲苯、双氧水、苏木素等溶液配制：1.PBS缓冲液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L，KCl2.7mmol/L,Na2HPO43mmol/L,KH2PO41.4mmol/L.2.0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0.4g。3.3%蒸馏水或甲醇H2O2溶液，用30%H2O2和蒸馏水或甲醇溶液配制。仪器：移液器、微波炉、微波修复盒、玻璃器皿等。流程简介样本来源：迈新阳性片抗体（简称）：CD34(兔源)浓度选用：CD341:200免疫组化染色步骤1.石蜡切片脱蜡至水，二甲苯（两缸5min、5min）、梯度酒精（无水、95%、85%、75%）每缸5min，PBS冲洗3次，每次三分钟。2.微波修复，高火2~3min，中火5min，低火5min，冷却至室温，PBS冲洗3次，每次三分钟3.3%双氧水阻断内源性过氧化物酶室温（18~30度）10~30min。PBS冲洗3次，每次三分钟。4.5%BSA孵育30min5.滴加一抗（客户自选），4度过夜。PBS冲洗3次，每次三分钟。6.除去PBS，每张切片滴加50ul聚合物增加剂A,室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次三分钟。7.除去PBS，每张切片滴加50ul试剂B酶标羊抗鼠兔抗IgG聚合物，室温孵育30min，PBS冲洗3次，每次三分钟。8.除去PBS，每张切片滴加50ul新鲜配制的DAB,镜下观察。9.自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，自来水冲洗，温水返蓝。10.切片梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片镜检。注：本次做了阴性对照结果显示：120502405C效期201304这个批次的二抗有问题
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