COMPANYCONFIDENTIALAUC(Analyticalultracentrifugation)分析型超速离心技术郜十伟18668908532swgao@beckman.com分析超速离心技术内容仪器的原理及构成技术特点及应用优势应用举例分析超离技术在离心力作用下，分子量或构型构象不同的分子在溶液中的沉降系数不同实时扫描分子的沉降过程，并根据扫描数据计算其他参数，从而推断分子的特性及其之间的相互作用关系可视化的离心过程对于蛋白的异质性、相互作用系统、分子构象改变以及化学计量学，分析超离总是能给出是或否的回答检测机理衍射光栅入射光检测器光电倍增管7紫外-可见光检测器(Absorbance)灵敏度：5µg/ml波长范围：190-800nm可同时扫描三个波长样本：蛋白、DNA以及具有光吸收的纳米颗粒等样本浓度范围：5µg/mL–2mg/mL干涉光检测器(Interference)样本：产生光干涉计算干涉条纹的位移浓度范围：25µg/mL–5mg/mL检测装置数据收集及分析RecognizablePeaks数据收集数据分析Absorbancedetector LightingandrecordabsorbanceintensitysignalatcellLightreceivingsectionsignalsolventsampleScanningsystemforabsorbance conc浓度radius(cm)Centerside转子中心侧Bottomside样本池底部CentrifugalforceScanradialdirection半径方向VelocitySampleCellAbsorbance(mAU)Radius分析超离技术在模拟生理状态下研究溶液中蛋白质性质的经典技术FDA认可的研究蛋白相互作用的最好方法实验方法测定生物分子运动的速率与分子量、分子形状相关运行2-5h沉降速率沉降系数扩散系数摩擦系数分子量实验方法分子量结合/解离常数亚单位组成Noneedofstandard,absolutevaluesobtainedfromprovencalculation不需要
标准
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物Non-destructivemethod,samplecanberecoveredandusedforotherpurpose非破坏性Characterizemacromoleculesinnativesolution研究天然溶液状态下的生物大分子性质UsefultoolforProteomicsproteinsinteractionresearch蛋白组学中蛋白质相互作用研究Efficientmethodtostudyenvironmentaleffects(pH,ionicstrength,temperature,etc.)多种不同条件的检测FDArecognizedFDA检测蛋白聚集的金标准AUC技术特点应用优势真正在液相环境中检测自聚合系统(Self-associatingSystems)分子构象(MolecularConformation)异质性(Heterogeneity)Sub-unitRatio亚单位比例A:B=1:2(AB2orA2B4)(A)(B)AB2orA2B4应用优势应用领域科研生物制药相互作用（蛋白与蛋白、蛋白与小分子等）自聚合研究蛋白质聚集分子构象亚基结合比例(stoichiometry)蛋白结晶条件筛选药物/疫苗类产品研发和质控蛋白质聚集和降解（质保）药物配方研发（pH、离子强度、浓度、温度……）批次一致性分析（纯度、QA&QC，<1%）小分子和蛋白药物筛选应用举例蛋白质-蛋白质相互作用蛋白质-蛋白质相互作用22蛋白之间相互作用【Nature,2015】TsinghuaUniversity蛋白质-小分子的相互作用Csn-B在320nm处有光吸收，不能沉降若Csn-B与Nur77(孤核受体）结合，则在对应的分子量处沉降蛋白质聚集的研究-70℃：抗体以单体存在40℃放置了6个月：两个降解峰和几个聚集峰自聚合研究等渗溶液：7S低离子强度：8S、14S和22S(自聚合)Thanks!
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