烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响

烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响 河北医科大学 硕士学位 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响 姓名:张洁 申请学位级别:硕士 专业:口腔临床医学 指导教师:郭长军陈树国 20080301 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。 研究生签名(砟最导师签名新侈孚学院领导签名( 卫始年弓月“日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名:球箍导师签名:奔杉争 ,佣髫年弓月“日 中文摘要 烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响 摘 要 目的:探讨镍铬烤瓷合金、钴铬烤瓷合金和金铂烤瓷合金，以及镍铬烤瓷合金表面镀金对体外培养的人牙龈成纤维细胞(,,,,, ,,,,,,,,(,,,,,,,,,,，,,,)分泌免疫细胞因子白细胞介素(,(，,,,,,,,,,,(,，，,(,)、生长与增殖活性以及附着生长能力等生物学行为的影响。从而评价其生物相容性，为临床烤瓷合金的选择提供参考。 方法:,于临床取得正常牙龈组织，采用组织块贴壁法进行人牙龈 成纤维细胞的原代培养，运用细胞免疫组织化学染色方法 通过波形丝蛋白、角蛋白染色鉴定细胞来源。,用不同烤瓷合金提浸液分别对人牙龈成纤维细胞进行培 养，以未处理的,,,,培养液作为阴性对照。通过酶联免 疫吸附试验(,,,,,,—,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,，,,) 抗体加心法测定细胞培养上清液中，,(,的分泌量;通过四 甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,， ,,,()检测烤瓷合金提浸液对人牙龈成纤维细胞生长与增 殖的影响。,以盖玻片接种细胞作为阴性对照，在不同烤瓷合金表面分 别接种人牙龈成纤维细胞。采用,,,法检测人牙龈成纤维 细胞在不同烤瓷合金表面的附着生长与增殖活性;扫描电 镜观察细胞形态与排列附着情况。 中文摘要 结果:,细胞免疫组织化学染色，波形丝蛋白染色阳性、角蛋白染 色阴性，证实细胞符合中胚层来源的成纤维细胞特点。„,不同烤瓷合金提浸液培养人牙龈成纤维细胞，,,，,,结果 显示: ,小时细胞培养上清液中，,一,的浓度均值分别为:对照 组:,,,(,,?,,(,,,,,,,，镍铬烤瓷合金组(,):,,,(,, ?,,(,, ,,,,,，钴铬烤瓷合金组(,):,,,(,,，,,(,, ,,,,,， 镍铬烤瓷合金镀金组(,):,,,(,,?,(,, ,,,,,，金铂烤瓷 合金组(,):,,,(,,?,,(, , ,咖,。,、,组与对照组之间 有显著性差异(,,,(,,);,、,组与对照组之间无显著性 差异(,,,(,,);,组与,组、,组与,组比较，无显著性差 异(,,,(,,);,组与,组、,组与,组、,组与,组、,组与 ,组两两比较，有显著性差异(,,,(,,)。 ,,小时对照组与,、,、,、,组细胞上清液中，,一,的 浓度均值分别为:,,,(,,，,,(,,,,,,,，,,,(,,?,(,,,,,,,， ,,,(,,?,(,,,,,,,，,,,(,,?,(,,,,,,,， , ,,(,,? , ,(, ,,,,,,。,、,组与对照组之间有显著性差异(,,,(,,); ,、,组与对照组之间无显著性差异(,,,(,,);,组与,组、 ,组与,组比较，无显著性差异(,,,(,,);,组与,组、, 组与,组、,组与,组、,组与,组两两比较，有显著性差 异(,,,(,,)。,不同烤瓷合金提浸液培养人牙龈成纤维细胞，,,,比色实 验结果显示: 与对照组相比，,小时镍铬烤瓷合金组(,)，钴铬烤 瓷合金组(,)，镍铬烤瓷合金镀金组(,)，金铂烤瓷合金 中文摘要 组(,)细胞相对增殖率均值分别为:,,,(,,?,(,,,，,,,(,, ?,(,,,，,,,(,,,,,,(,,,，,,(,,?,(,,,。,、,组与对照 组之间有显著性差异(,,,(,,);,、,组与对照组之间无 显著性差异(,,,(,,);,组与,组、,组与,组比较无显著 性差异(,,,(,,);,组与,组、,组与,组、,组与,组、, 组与,组两两比较，有显著性差异(,,,(,,)。 与对照组相比，,,,?，时,、,、,、,组细胞相对增殖 率分别为:,,(,, ,,,(,,,，,,(,,?,(,,,，,,(,,,,,(, ,,， ,,(,,?,(,,,。,、,组与对照组之间有显著性差异 (,,,(,,);,、,组与对照组之间无显著性差异(,,,(,,); ,组与,组、,组与,组比较，无显著性差异(,,,(,,);, 组与,组、,组与,组、,组与,组、,组与,组两两比较， 有显著性差异(,,,(,,)。,不同烤瓷合金表面人牙龈成纤维细胞的,,,比色结果显 示:与对照组相比，镍铬烤瓷合金组(,)，钴铬烤瓷合金 组(,)，镍铬烤瓷合金镀金组(,)，金铂烤瓷合金组(,) 细胞相对增殖率分别为:,,(,,?,(,,,，,,(,,,,,(,,,， ,,(,,?,(,,,，,,(,,?,(,,,。,、,、,、,组与对照组 之间均有显著性差异(,,,(,,);,组与,组、,组与,组比 较，无显著性差异(,,,(,,);,组与,组、,组与,组、, 组与,组、,组与,组两两比较，有显著性差异(,,,(,,)。,扫描电镜观察人牙龈成纤维细胞黏附行为:与对照组相 比，镍铬烤瓷合金(,)，钴铬烤瓷合金(,)，镍铬烤瓷合 金镀金(,)，金铂烤瓷合金(,)表面附着细胞数目少， 显示细胞极性，沿材料表面沟纹方向排列。,、,、,组细 胞形态变化明显。,组细胞形态变化不明显。 中文摘要 结论:,体外成功培养了人牙龈成纤维细胞。,镍铬烤瓷合金和钴铬烤瓷合金提浸液对人牙龈成纤维细 胞的增殖显示先促进后抑制作用;并且使细胞，,(,分泌 水平升高。镍铬烤瓷合金镀金与金铂烤瓷合金提浸液不?影响细胞细胞的增殖活性和，,(,的分泌水平。,镍铬烤瓷合金、钴铬烤瓷合金、镍铬烤瓷合金镀金和金铂 烤瓷合金均抑制人牙龈成纤维细胞的附着生长，影响细 胞排列与形态。,金铂烤瓷合金与镍铬烤瓷合金镀金对人牙龈成纤维细胞 生物学行为的影响较小，镍铬与钴铬烤瓷合金对细胞的 生物学行为影响较大。 关键词:人牙龈成纤维细胞;生物学行为;细胞培养;烤瓷合金;镀金 ，,,,,,,;, ,, ,,,,,,; ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,:,,,, ,,,,, ,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,, ,,—,,， ,,,,,,(,, ,,, ,,(,, ;,,,,,; ,,,,,, ,,, ,,—,, ;,,,,,; ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,一,(，,?,),, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,)，,,, ,,,,,,;:,,,, ,, ,,,( ,,,,,,,: ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,, , ,,,;,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,,(，, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,, ;,,,,，,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,;,,,;,,,,;,, ,,,,,,,, ,,;,,,,,, ;,,,,,,,,,, ,,,,,,,,( , ,曲,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,, ;,,,,(,,，,, ;,,,,,; ;,,,，,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,, ，,一, ,,;,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,(,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,(,,，,,)(，, ,,,,,,,,，,, ,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,;, ,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,, ;,,,,,; ,,,,,, ,, ,,,,? ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,”,, 英文摘要 ———————————————(, —————————„————————————————一一 , ,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,;, ,, ,,,,,,, ,,,,, ,, ;,,,,,; 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,,,,,,，,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,;,,,,,, ,, ,,,, ,,, ;,,,,,, ,,,,,，,,,,, ;,,,,,; ,,,,,,(,)，,,,,, ;,,,,,; ,,,,,,(,)，,,—,, ,,,;,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,(,),,, ,,—,, ,,,;,,,,, ,,,,,,(,),, ,,(,,?,(,,,，,,(,,，,(, ,,，,,(,,,,,(,,,， ,,, ,,(,,?,(,,,,,,,,;,,,,,,(,,;, ,, ,,, ,,,,, ,，,,,,, ,，,,,,, ,，,,, ,,,,, , ,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,, , 英文摘要 ;,,,,,,(,,,(,,)(,,,,,,,,,,,,，,,,,, , ,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, , ,, ,,,,, ,(,,,(,,)(,,,,,,,,,， ,,,,, , ,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, , ,, ,,,,, , (,,,(,,)(,,, ,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,, , ,,, ,,,,, ,，,,,,, , ,,, ,,,,, , (,,,(,,)(, ?裕瑁?,,, ,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,, ,,,,;,,, ,, ,,, ,,,,,;, ,, ,,—,, ;,,,,,; ,,,,,,(,)，,,—,, ;,,,,,; ,,,,,,(,)，,,—,, ;,,,,,; ,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,(,),,, ,,(,, ;,,,,,; ,,,,,,(,),,,, ,,,, ,,,, ,,,,, ,, ,,,, ,,,,;,,, ,, ,,, ,,,,,;, ,, ,,, ;,,,,,, ,,,,,(,,, ,,,,,,,,, ,, ,,, ;,,,, ,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,( ,,, ,,,,,,,,,, ;,, ;,,,,, ,, ;,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,，,，, ,,, ,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,,,;,,,(,,, ,,,,,,,,,,;,, ;,,,,, ,, ;,,,, ,,,,,,, ,,,,, , ,,, ,,, ;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;,,,( ,,,;,,,,,,:, ,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,(,,,,),,,, ;,,,,,,, ,,;;,,,,,,,, ,, ,,,,,(, ,,, ,,,,,,, ,, ,,(,, ,,, ,,(,, ;,,,,,; ,,,,,, ;,, ,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,，,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,( ,,,,,,,(,,,, ;,, ,,,,,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ，,一,(,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,(,, ;,,,,,; ,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,;,,,,, ,,,,,, ,,, ,,, ,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ，,(,(, ,,(,,，,,(,,，,,(,, ,,, ,,—,, ;,,,,,; ,,,,,, ,,, ,,?,, ;,,,,,; ,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,, ;,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,, , 英文摘要 ,,,,,,,, ,,,,。,,, ,,,,,,,;, ,,, ;,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,(, ,,?,,, ;,,,,,; ,,,,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,; ,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,;, , , ,,, ,,,,,,,;,, ,,,,,,,, ,, ,,,,(,,,,, ,,(,, ,,, ,,(,, ;,,,,,; ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,;, ,, ,,,,( ,,, ,,,,,:,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,(,,,);,,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,,, ;,,,,,,;,,,,,,; ,,,,,;,,,, ,,,,,,, ,, 研究论文 烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响 (??(,,„, 刖 罱 金属烤瓷修复体由于兼有金属的强度和瓷的美观而受到患者和医生的普遍欢迎，为临床广泛应用。但许多研究表明，患者戴用金属烤瓷修复体后，引起牙龈炎症、龈缘灰染等问题?。,?，影响金属烤瓷修复体的修复效果。因此，评价烤瓷合金对牙周组织细胞健康的影响是评价金属烤瓷修复体修复效果的重要标准。人牙龈成纤维细胞(,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,，,,,)来源于与修复体直接接触的人体口腔牙周组织，通过体外细胞实验能够较准确真实地反映烤瓷合金材料的生物相容性。 本实验将镍铬烤瓷合金、钴铬烤瓷合金、金铂烤瓷合金和镍铬烤瓷合金镀金及其提浸液与人牙龈成纤维细胞体外接触培养，探讨其对牙龈成纤维细胞生物学行为的影响，比较不同烤瓷合金及镍铬烤瓷合金镀金的生物相容性，为临床烤瓷合金的选择提供理论依据。 研究论文 材料与方法 ,材料,(,仪器设备,,一,,,,,二氧化碳培养箱 美国,,,,公司,,,,,,(,,,,型生物安全柜 上海力申科学仪器有限公司,(,,,,型台式离心机 德国,,,,,,公司,,,,,,型倒置显微镜 日本,，:?,,,公司,,(,,型多功能显微镜 日本,脚,,公司,,,,,型扫描电子显微镜 日本日立公司普通冰箱 青岛海尔电器,,,(,,,,型超低温冰箱 日本,,,,,公司,,型酶联免疫检测仪 瑞士,,,,,,,公司,(,,,型高频离心铸造机 天津医院设备厂,,, ,,,,,,, ，，型笔式喷砂机 山东新华医疗器械厂,,,,,,,,, ,,,,齿科镀金仪含美国威兰德公司镀金液耗材,,,,,型表面粗糙度测量仪 英国泰勒公司,,,,,,,,,,电子天平 北京赛多利斯天平有限公司微量移液器 德国,,,,,,,,,公司细胞培养瓶、细胞培养板 ,,,,,, ，,;,,,,,,,,, ,,,,,,,(,材料镍铬烤瓷合金(,,,,,,,,, ,) 上海贺利氏古莎齿科公司钴铬烤瓷合金(,,,,,,,, ,) 德国,,,,公司金铂烤瓷合金(,,, ,,,,,,, ,)上海贺利氏古莎齿科公司,(,主要试剂 研究论文高糖,,,,培养基 美国,,;,,,,公司胎牛血清 美国,,;,,,,公司胰蛋白酶 美国,,,,,公司鼠抗人波形丝蛋白单克隆抗体 北京中杉金桥有限公司鼠抗人细胞角蛋白单克隆抗体 北京中杉金桥有限公司,,,试剂盒 北京中杉金桥有限公司,,, 河北博海生物工程有限公司二甲基亚砜(,,,,， 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯)河北博海生物工程有限公司人，,(, ,,，,,试剂盒 美国,,, ,,,,,,,公司,,,试剂盒 北京中杉金桥有限公司,实验方法,(,人牙龈成纤维细胞的原代培养及鉴定,(,(,取材及原代培养 于河北医科大学口腔医院颌面外科留取,,(,,岁正畸拔牙或拔除阻生齿时的正常牙龈组织，取材过程严格无菌操作。组织取下后立即放入含双抗(青霉素,,,,,,,,、链霉素,,,,,,,,)和,,胎牛血清(,,,)的培养液中。在超净工作台内用含有双抗(青霉素,,,,,,,,、链霉素,,,,,,,,)的,,,将组织漂洗,遍，尽量去除牙龈上皮 后，小烧杯里剪成,,,×,,, , ,,,大小的碎块，用牙科探针将组织碎块均匀平铺于,,抽,培养瓶底。加少许含,,,,,,的,,,,培养基，瓶底向上倒置于培养箱中，,,。,，,,,,,及湿度,,,条件下培养,(,小时，待贴壁牢固后翻转培养瓶继续培养，隔日换液，并在倒置显微镜下观察细胞生长情况。,(,(,牙龈成纤维细胞的纯化与传代培养 当从组织块中游出的细胞铺满瓶底,,,时，用,(,,,胰 研究论文蛋白酶消化细胞，于原培养瓶内以,:,进行首次传代。待细胞长满后，以,:,传代，换,,,,,培养瓶继续培养。,(,(,细胞来源的鉴定 将纯化且传代培养的第,代细胞接种子含有盖玻片的,孔板中，待细胞长至半满时取出盖片，丙酮固定，吹干按常规,,法操作，进行波形丝蛋白和细胞角蛋白染色，光镜下观察细胞的染色情况。,(,(,生长曲线绘制 取第,代对数生长的细胞，以,(,,,胰蛋白酶消化细胞，制成细胞密度为,×,,,,,,的单细胞悬液，接种于,,孔板,,,,孔，每,孔为一组，共,组。放入,,,培养箱内连续培养,天。每天取一组，胰酶消化后进行细胞记数，取三孔平均值，绘制生长线。,(,烤瓷合金试件的准备,(,(,烤瓷合金试件材料成分(见,,,,, ,),(,(,烤瓷合金试件的制备(见,,,(,) 将几种烤瓷合金铸造成,,,,,,，,,,,,的圆片(使用统一模具翻制所有蜡型)，镍铬烤瓷合金,,枚试件，钴铬烤瓷合金和金铂烤瓷合金各,,枚试件(肉眼可见的变形和铸造缺陷)试件常规喷砂、打磨、抛光(整个打磨过程均按统一方向)。,(,(,„镍铬合金镀金处理 随机选取, ,枚镍铬合金试件采用,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,齿科镀金技术按照其镀金 工艺 钢结构制作工艺流程车尿素生产工艺流程自动玻璃钢生产工艺2工艺纪律检查制度q345焊接工艺规程 使用说明，做表面镀金处理。步骤如下: 预先净化——使用专用的,,,,(,超声波清洗盐净化镀件表面。 研究论文 脱脂电解——将镀件浸入电子脱脂槽的,,,电子脱脂溶液中，电压调至,,，时间,,,,，将电压降至,,，取出镀件，清水冲净。 ( ? 附着表面镀金一一将镀件浸入附着镀金槽的,,,,,,,,,,,,附着镀金液(金含量,(,,,,)中，电压为,,，时间,,,,,。取出镀件，清水冲净。 增亮镀金——将镀件浸入增亮镀金槽的,,,,,,,, ,,,,增亮镀金液(金含量,叽)中，电压为,(,,，时间,,,,,。取出后清水冲净。 经过以上步骤，在基底合金表面形成一层厚度约,岬均匀光亮的金镀层。,(,(,试件表面粗糙度测定 使用电动触针式表面粗糙度测量仪，于试件表面随机选取,点测量粗糙度值(,,值)，均值为试件表面粗糙度。,(,(,清洁试件 流水下清洗试件，晾干，在,,,乙醇中脱脂，晾干。然后依次在丙酮中超声清洗,,分钟，,,,乙醇超声清洗,,,,,×,次，三蒸水超声清洗,,,,,×,次，,,。,烤箱烘干。最后在,个大气压，,,,?条件下消毒,,分钟备用。,(,烤瓷合金提浸液对人牙龈成纤维细胞，,(,分泌行为及增殖活性的检测? ?,(,(,烤瓷合金试件的准备 取镍铬烤瓷合金、钴铬烤瓷合金、镍铬烤瓷合金镀金和金铂烤瓷合金各,枚试件，用于实验。,(,(,提浸液制备 将所有试件置于,,孔板中，按照我国医疗器械生物学评 研究论文价标准,,,,,,,,, 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 的方法，以,,,,,,,的比例加入含,,,,,,的,,,,培养液，静置于培养箱。在,,?，,,,,,，湿度,,,条件下提浸，,,小时后收集合金析出液。,(,(,实验分组 实验组为:,组:镍铬烤瓷合金提浸液组;,组:钴铬烤瓷合金提浸液组;,组:镍铬烤瓷合金镀金提浸液组;,组:金铂烤瓷合金提浸液组 阴性对照组为含,,,,,,的, ,,,培养液,(,(,细胞接种 取生长良好的第,代牙龈成纤维细胞，,(,,,胰蛋白酶消化，显微镜下计数，用含, ,,,,,的,,,,培养液配成密度为,×, ,?,,,的单细胞悬液。将悬液接种于,,孔板，每组,复孔，每,,,,,卜,,，即每孔接种细胞数,,,个，然后将培养板置于培养箱，,,?，,,,,,，湿度,,,条件下孵育,,,?，时。,(,(,细胞同步化 吸弃孔内培养液，更换含,,,,,,的,,,,培养液，继续培养,小时。弃液后实验组各孔加入,,,,,实验组不同烤瓷合金提浸液，阴性对照组各孔加入,,,,,含,,,,,,的,,,,培养液，并设空白对照组(无,,,细胞，仅,,,,,(,,,“,含,,,,,,的,,,,培养液作调零用)，共,组。置于培养箱中,,?，,,,,,，„湿度,,,条件下孵育。 „,(,(, ,,，,,检测细胞培养上清液中，,(,的浓度 按使用说明书推荐的方法操作。于,小时和,,小时收集各实验组的细胞培养上清液。在常温下溶解后，分别加入己包被好，,(,抗体的,,，,, ,,孔板中，根据,,，,,夹心法检测。反应终止后，用酶联免疫检测仪测定,,,,,处的,值，根据，,(, 研究论文标准品,值曲线，换算所测上清中，,(,的浓度。,(,(, ,,,比色法检测细胞.