大鼠正畸牙根吸收修复早期的组织学描述-第三军医大学学报

大鼠正畸牙根吸收修复早期的组织学描述-第三军医大学学报 大鼠正畸牙根吸收修复早期的组织学描述 112*122 张琳林，单春城，戴红卫，邹林洪，吴杨，周建萍 (1.重庆医科大学附属永川医院口腔科，重庆，402160; 2.重庆医科大学附属口腔医院正畸科，重庆， 400015) 【摘要】目的 本研究观察SD大鼠正畸牙根吸收后，早期修复过程中牙周组 织的修复情况。方法 选取72只雄性SD大鼠，加力14天后拆除加力装置，分别 在拆除加力装置后0、1、3、5、7、10、14 和28天处死，通过HE染色和扫描 电镜观察牙周组织形态学变化，TRAP染色检测破牙骨质细胞在牙根周围的变化 情况。结果 随着加力装置拆除时间的延长，牙周组织中出现越来越多的修复相 关性细胞，而破牙骨质细胞数量逐渐减少。 结论 在拆除加力装置后，吸收的牙 周组织逐渐发生不同程度的修复。 关键词:牙根吸收;牙根修复;正畸牙移动 中国法分类号:R783.5 Histologic describe of rats in the early reparative process of orthodontical tooth resorption ZHANG Lin-lin, SHAN Chun-cheng,DAI Hong-wei, ZOU Ling-hong, WU Yang (Yongchuan Hospital , Chongqing Medical University. The affiliated hospital of stomatology ,) Abstract: Objective To investigate repair situation of periodontal tissue during the repair process following experimentally induced tooth movement of SD rat. Methods After 14 days post treatment, the appliance was removed, 72 male SD rats were and killed in groups over the period of 0,1,3,5,7,10,14,28 days. Histological staining and scanning electron 作者简介: 张琳林(1984-),女,重庆人，硕士,主要从事口腔正畸学相关研究, 电话:(023)85381685，Email:zhanglinlin71@126.com 通讯作者: 单春城，电话:(023)85381685，E-mail: jakyshan@126.com microscopy (SEM) for observing changes of periodontium histomorphology, tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining was used to detect changes of cementoclasts around the root.Result Periodontal tissue appears more and more repair cells after withdrew the coils. and the number of cementoclasts gradually reduced. Conclusion Absorbent periodontal tissue can complete a degree of repair after remove the force. Key Words: Root resorption; Root repair; Orthodontic tooth movement [1]牙根吸收是正畸治疗常见的并发症。正畸矫治过程中，牙周组 织在正畸力的作用下发生改建和更新，可引起不同程度的牙根吸收。 牙根吸收后再修复的生物学过程及机制仍不清楚，因此正畸导致的牙 根吸收和修复成为目前正畸界研究的热点。正畸力去除后已发生吸收 的牙根可以自行进行一定程度的修复，为了解这种不加任何干预措施 的自行修复能达到什么程度，我们从组织学上对牙根修复过程进行了 研究，将为以后的研究提供依据，同时也为矫治效果的稳定和防止矫 治复发提供一定依据。 1材料和方法 1.材料和方法 1.1 实验动物与主要试剂 72只健康雄性12周龄SD(Spargue-Dewley)大鼠(重庆医科大学动物实验 中心提供)，体重(250?10) g。 主要试剂:萘酚AS-B磷酸酯酶(美国Sigma公司)，多聚赖氨酸(武汉博士 德生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 有限公司)，10%水合氯醛(重庆医科大学附属儿童医院)。 1.2 实验分组与模型建立 [2]将72只SD大鼠按随机数字 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 法随机分为8个实验组(牙根修复0、1、3、5、7、10、14 和28d组)，每组9只(6只用于TRAP染色和HE染色，3只用于扫描电镜观察)。设置自身对照，对照组取对侧(右侧)未加力侧。参考Jäger [3]的方法建立模型，选取左侧上颌为实验侧。10%水合氯醛按3ml/kg对大鼠进行麻醉，固定，沿左侧上前牙唇、舌、远中三面和左侧第一磨牙近中轴面角龈缘磨出深约0.2 mm浅凹，在上颌左侧第一磨牙与上切牙之间安置一闭隙镍钛拉簧, 施加50g的拉力。持续施力14d后拆除装置。 1.3 TRAP染色和HE染色 分别于拆除加力装置后第0、1、3、5、7、10、14、28 d将SD大鼠麻醉。4%多聚甲醛灌注内固定样本。取实验侧第一磨牙及其周围牙槽骨组织，4%多聚甲醛溶液固定，4?10%EDTA脱钙6-8周，常规石蜡浸润包埋。沿近中根长轴，将标本按牙齿近远中进行矢状面连续切片6张(4μm)。每个标本选择1张切片常规HE染色，显微镜下观察牙周组织变化。每个标本选择1张切片按试剂 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 进行TRAP染色，显微镜下观察破牙骨质细胞变化。 1.4扫描电镜观察 大鼠处死后，取大鼠左侧上颌骨第一磨牙及周围组织，冲洗，4%多聚甲醛固定8小时，10%次氯酸钠消化48小时，取出左侧上颌第一磨牙，要求近中根完整，梯度酒精脱水，在60?恒温烤箱烘烤1周后，表面喷镀一层50,300埃厚的铂金属膜，扫描电镜下观察第一磨牙近中根的近中面吸收后发生修复的情况。 1.5图像 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 和统计学处理 在400倍高倍镜下，在上颌第一磨牙近中根近中侧随机选取5个视野对TRAP阳性染色破牙骨质细胞计数，取平均值。采用SPSS 17.0统计分析软件对所得数据进行两独立样本t检验，P<0.05为有统计学意义。 2 实验结果 2.1 HE染色观察组织学改变 对照组:显微镜下切片均未见明显牙根吸收和成骨活动，偶见单核破骨细胞。大鼠第一磨牙近中根近远中两侧牙周间隙均匀，宽度接近，牙周膜纤维排列规则，牙骨质表面平整连续。(见图1) 实验组:显微镜下观察第一磨牙近中根切片，根尖1/3区域以及根分叉附近可见:第0天组牙槽骨发生大量破骨活动，可见显著的吸收现象，吸收陷窝大小不一、形状不同，吸收陷窝分布着大量破骨细胞和炎症细胞。根尖1/3区域以及根分叉牙骨质发生不同程度吸收，无细胞性牙骨质和细胞性牙骨质均可受累，有些大面积吸收深至牙本质区，牙骨质表面和吸收陷窝分布着大量多核破牙骨质细胞和炎症细胞。根近中牙周间隙变窄，远中牙周间隙增宽，牙周纤维排列紊乱，有时可见无细胞区的玻璃样变。 随着加力装置拆除时间延长，牙槽骨和牙骨质吸收逐渐停止，吸收陷窝中出现越来越多的成骨细胞和成牙骨质细胞，破骨细胞和破牙骨质细胞数量逐渐减少，修复性牙骨质增多，并出现新沉积的类骨质。牙骨质吸收陷窝可见新生牙骨质形成。牙周胶原纤维增生，牙周间隙逐渐恢复正常。 到28天时，新生牙槽骨进一步钙化，牙骨质表面变得比较光滑，除了牙根颈部和根中份少量的未完全修复的陷窝，未见明显的吸收陷窝，牙周间隙宽度基本恢复正常。 2.2 扫描电镜观察牙根情况 对照组:根面较平滑，未见到明显吸收陷窝。(见图2) 实验组:0天组，可见不规则的吸收陷窝，主要出现在牙根颈部和根尖1/3处。随着时间延长，陷窝数量变少，宽度变窄，深度变浅，陷窝底变得平滑。28天组时依然可以看见出现在牙根颈部少量的吸收陷窝。 2.3 TRAP染色观察破牙骨质细胞数量 阳性破牙骨质细胞胞浆红染，细胞形态完整，结构清晰，见图3、4，计数见表1。 对照组:偶见阳性的破牙骨质细胞，染色颜色较浅。 实验组:0天组可见细胞核在三个及其以上TRAP阳性染色破牙骨质细胞，主要排列在牙根表面吸收陷窝内，破牙骨质细胞数量和对照组出现显著差别 (P<0.05)。1天组可见破牙骨质细胞数量最多，随着时间延长破牙骨质细胞数量减少。7天时破牙骨质细胞数量已恢复到生理水平，和对照组无统计学差异。 x表1:破牙骨质细胞在近中侧的数量,?s, Table 1: Cementoclasts number of root mesial surface 时间,天, 对照组 实验组 0 0.27?0.10 5.63?0.50 * 1 0.23?0.15 6.90?0.21 * 3 0.20?0.18 3.97?0.69 * 5 0.17?0.15 0.47?0.16 * 7 0.20?0.13 0.27?0.10 # 10 0.20?0.18 0.33?0.16 # 14 0.17?0.15 0.20?0.13 # 28 0.27?0.10 0.23?0.15 # *:实验组与对照组比较～ P,0.05～#:实验组与对照组比较～P,0.05 图3:牙根近中侧破牙骨质细胞变化情况 3 讨论 正畸力作为细胞外信号加在牙上，通过信号转导可引起破牙骨质细胞、成骨细胞、成牙骨质细胞等生物活性细胞的一系列变化，从而使整个牙周组织受到影 [4]响，牙根长度在矫治中可能发生吸收。研究表明在接受正畸治疗的患者中牙根 [5,6]吸收的发生率在3%-100%，严重的牙根吸收会影响牙齿的功能和使用时间。 [7]Brezniak等认为正畸导致的牙根吸收包括炎症反应的所有特征，称其为正畸炎性牙根吸收，并分为三种类型:牙骨质吸收，牙本质吸收，环状面根尖吸收。本研究在实验0天组发现，在50g力作用下，大鼠牙根会发生不同程度的吸收，吸收的形式表现多样性，既有牙骨质吸收，也有牙本质吸收，吸收部位多分布在牙根颈部、根尖1/3和根分叉处，说明了在力作用下大鼠牙根发生吸收的部位和形式差异很大。 [8]有研究指出，人类牙根具有高修复能力。本研究发现在拆除大鼠加力装置28天时，观察到牙骨质内未见明显的吸收陷窝，而在牙本质内仍存在吸收陷窝，陷窝内有新生的牙骨质覆盖，因此推测发生在牙骨质区域的吸收较发生在牙本质区域的吸收修复更好，牙骨质具有更强的修复能力，牙骨质修复在正畸牙根吸收 [7]的修复过程中发挥着重要作用，本研究结果与Brezniak等研究结果一致。 [9]TRAP染色法是鉴定破牙骨质细胞常用的方法。本研究通过TRAP染色法观察到拆除加力装置当天大鼠牙根吸收陷窝中存在较多的破牙骨质细胞，破牙骨质细胞数量在1天组达到最高水平，随着拆除加力装置时间的延长，破牙骨质细胞数量减少，直至7天时破牙骨质细胞数量和对照组无统计学差异。破牙骨质细胞最多出现在1天组而不是拆除加力装置当天，可能是牙受到持续性压力的作用，即使终止矫治力，但是牙周膜内透明样区域仍然存在，牙根发生修复的同时吸收也还在进行。7天时，破牙骨质细胞数量恢复到生理水平，牙根吸收过程才停止，可能与此时牙周组织中透明样变明显减少或消失有关，此时牙根修复过程还在继续，两者呈现此消彼长的状态。 大鼠牙根吸收陷窝中既存在破骨吸收性标记物，也存在有成骨修复性标记物[3][10]。Brudvik等认为当正畸力减小或者是透明样变消失后，吸收过程便停止了， [11]牙骨质修复开始。也有研究认为，牙根修复的全面启动，是在终止矫治力后，牙根吸收陷窝修复从吸收陷窝的边缘或中央任意处开始，修复是牙骨质的沉积过 程。最初沉积的是无细胞牙骨质，中断牙所受压力两周后，修复性牙骨质开始矿 化;到了修复后期，细胞性牙骨质开始沉积。本实验结果提示:正畸力会使牙根 发生吸收，但是拆除加力装置停止施力后，成牙骨质细胞活性增强，不断生成新 生牙骨质，并在牙根表面有新的牙骨质沉积和牙周附着形成，使粗糙的根面变得 光滑平整，牙周膜间隙恢复正常。吸收的牙骨质发生一定程度的修复，但是这种 修复是有限的，一些部位的吸收陷窝并不能完全修复达到最初的状态。 本实验结果提示:50g的力会使大鼠牙根发生吸收，吸收部位多分布在牙根 颈部、根分叉处和根尖1/3。在拆除加力装置后牙根吸收并未完全停止，牙根吸 收与牙根修复过程并存，7天后主要是牙根修复现象存在。在拆除加力装置后， 牙根吸收可以发生不同程度的修复，发生在牙骨质区域的吸收较发生在牙本质区 域的吸收修复更好，牙骨质与牙本质比较具有更强的修复能力。28天时，牙周 间隙宽度基本恢复正常，这与临床上正畸病人一个月复诊加力时间比较一致，小 于一个月时间的正畸加力应谨慎进行。力值的大小是否对成年大鼠正畸牙根的吸 收有影响，以及吸收后修复的影响是否存在差异得仍需进一步深入研究。 参考文献 [1] Albaker BK, Wong RW.Diagnosis and management of root resorption by erupting canines using cone-beam computed tomography and fixed palatal appliance: a case report[J]. 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