高效液相色谱法测定痰咳净片中咖啡因的含量
高效液相色谱法测定痰咳净片中咖啡因的
含量
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222?安徽医药AnhuiMedicalandPhamuweuticalJournal2007Mar;ll(3)
高效液相色谱法测定痰咳净片中咖啡因的含量
张萍
(安徽芜湖市药品检验所,安徽芜湖241000)
摘要:目的建立以高效液相色谱法测定痰咳净片中咖啡因的含量的方法.方法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以
0.05mo1.L一.枸橼酸溶液.乙腈(79:21)(用三乙胺调节pH值至4.0)为流动相;检测波长为290nm,进样量为20.结果
咖啡因浓度在50,600mg?L范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999);平均加样回收率为99.0%(RSD=1.1%,n
=
6).结论本方法简单,快速,准确,稳定,重现性好.
关键词:痰咳净片;咖啡因;高效液相色谱法;含量
DeterminationofcaffeineintankejingtabletsbyHPLC
ZHANGPing
(WuhuInstituteforDrugControl,Wuhu241000,China)
Abstract:AimToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofcaffeineintankejingtablets.Metho
dsThevenusilXBPCl8col-
umnandthemobilephaseof0.05mol?L,citricacid.acetonitrile(79:21)(pHadjustedto4.0withtriethylamine)wasused,andthe
detectionwavelengthWas290nm.ResultsAgoodlinearrelationshipWasobt~nedwhenthedetectionco
ncentrationrangeWas50,60O
mg?LI1(r=0.9999);TheaveragerecoveryWas99.0%(RSD=1.1%,n=6).ConclusionThemethodWasr
apid,simple,accu-
rateandreproducible.
Keywords:tankejingtablet;caffeine;HPLC
痰咳净片是一种快速排痰镇咳的中成药,是由桔梗,咖啡
因,远志,冰片,苦杏仁等组成的复方制剂….其中咖啡因为
精神类管制药,也是制剂中具有多种药理作用的重要成
分.因此,测定咖啡因的含量对控制和评定产品质量以
及对卫生部规定的一类管理药物的审定有着十分重要的意
义.而目前的药品标准对痰咳净片中咖啡因含量的测定采用
碘量回滴法,操作繁琐,影响因素较多.近年来也有文献
报道了用HPLC法测定痰咳净散中的咖啡因,这些方法中
有的还同时运用了内标法,但内标物的选择使得实验过程变
得较为繁琐.目前还未见报道用HPLC法测定痰咳净片中的
0.104mg五味子醇甲),分别在0,4,8,12,24,48h吸取20
进样检测,记录色谱图,峰面积基本稳定,峰面积的相对标准
编差RSD=0.50%(n=6).结果
表
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明五味子醇甲的甲醇溶
液在48h内基本稳定,日内,日间误差均较小.
2.8加样回收率试验取已测含量的同一批样品细粉5份,
分别精密加入五味子醇甲对照品适量,各份均按上述供试品
溶液制备方法制得供试品溶液5份,再按上述色谱法条件测
定.计算加样回收率.结果平均回收率99.67%,RSD=
1.24%,见表1.
表1加样回收率试验结果
2.9样品测定按正文拟定的含量测定方法,取不同批号供
试品3份,依法测定,以外标法计算,结果批号050119,
050401,050923的样品含量分别为0.640,0.720,0.790mg?
g,,RSD分别为0.52%,1.15%,1.83%.
3讨论
本试验曾采用《中国药典》2005年版一部五味子项下
流动相甲醇.水(13:7),结果样品中五味子醇甲出峰太快,五
味子醇甲峰不能很好地实现基线分离.后参考文献将流
动相改为乙腈.甲醇.水(15:15:10)则分离度明显提高,五味
子醇甲峰实现基线分离.
将五味子醇甲对照品溶液和样品溶液在200,4OOnnl波
长范围内进行扫描,其均在250nm波长处有最大吸收,故选
定检测波长为250nm.
提取液的选择,首先选择甲醇直接提取检测,方法简便,
但提取液颜色较深,改用乙酸乙酯提取,提取液颜色变浅,有
利于延长分析柱的使用寿命.
本文采用高效液相色谱法测定肝复康丸中五味子醇甲的
含量,专属性强,准确可靠,可用于肝复康丸的质量控制.提
示有必要进一步为肝复康丸中五味子醇甲含量制定硬性指
标.
参考文献:
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部
药品标准.中药成方制剂,第7册.1993:77.
[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部).北京:化学工
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指纹图谱分析.东北师大学报(自然科学版),2004,36(2):50—
4.
(收稿日期:2006—11—09)
安徽医药AnhuiMedicalandPharnu~ceuticalJournal2007Mar;11(3)
咖啡因,在此本文采用了HPLC法测定痰咳净片中的咖啡因,
并采用外标法计算了咖啡因的含量.此方法过程简单,线性
关系好,准确可靠.
1仪器与试药
1.1仪器日本岛津LC一10AT高效液相色谱仪,包括岛津
LC.10AT泵;SPD一10A检测器;浙江大学N2000色谱工作站.
VenusilXBPCl8柱(4.6mm×150mm,5);AB265一S电子
天平(瑞士梅特勒).
1.2试药与试液咖啡因对照品(中国药物生物制品检定
所);痰咳净片(郑州金磊药业集团有限公司);乙腈:色谱纯,
所用试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水.
2方法
2.1测定波长的选择取咖啡因对照品适量,加流动相溶
解,以流动相为空白,在200,600nm波长范围内扫描,在290
nm处有最大吸收,故测定波长选择290nm.
2.2色谱条件色谱柱:VenusilXBPCl8(4.6mm×150mm,
5岬);流动相:0.05tool?L枸橼酸溶液一乙腈(79:21)(用
三乙胺调节pH值至4.0);检测波长为290nm;柱温:25oC;流
速:1.0ml?min,;进样量为20l.理论塔板数按咖啡因计
算不低于2500,并与其他组分达到良好分离.色谱图见图
1.
2.3对照溶液的制备精密称取咖啡因对照品50mg置25
ml容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,作为储备液.
2.4供试品溶液的制备取供试品20片,精密称定,研细,
精密称取1片的重量(约相当于咖啡因20mg)置于50ml量
瓶中,加流动相适量,超声20min使充分溶解,放冷,再加流
动相至刻度,摇匀,即得.
3结果
3.1标准曲线的建立和线性范围精密吸取咖啡因对照品
储备液适量,加流动相稀释成含咖啡因1200,800,600,400,
200,100,50,20,10mg?L的溶液.取上述各液20l色谱
仪,以浓度(C)为横坐标,峰面积(S)为纵坐标绘制标准曲线,
得回归方程和相关系数:Y=80950.1+1832.4X,r=
0.9999;线性范围为:50,600mg?L一.
3.2专属性实验取不含咖啡因的痰咳净阴性对照样品,按
供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液,按上述测定方
法测定,在咖啡因出峰时间(约3.3min)不见吸收峰,即无干
扰,结果见图1.
3.3精密度实验按”2.4”项下制备供试品溶液,并按”2.
2”项下色谱条件连续重复进样5次,测定咖啡因的峰面积,结
果RSD=0.83%,表明仪器精密度良好.
3.4稳定性实验取精密度实验中的样品溶液,于室温放置
0,1,2,4,6,10h后重复进样测定,RSD为1.9%(n=6).结
果表明痰咳净片供试品溶液在10h内较稳定.
90
60
30
0
048048048
i./i”ABtime/mi”
c
ime/min
图1高效液相色谱法
注:A.咖啡因对照品;B.供试品;c.阴性对照品;1.咖啡因
3.5样品的含量测定取3批痰咳净片样品,按”2.4”项下
制备供试品溶液,并按”2.2”项下色谱条件进样,测定咖啡因
的峰面积,并由回归方程计算其含量,结果见表1.
表1样品含量测定结果(标示量%,n=5)
3.6加样回收率实验取供试品(批号05082801)适量(约
相当于咖啡因10mg),称取6份,精密称定,置于50ml容量
瓶中,精密量取咖啡因对照品储备液5ml(相当于咖啡因10
mg),按样品含量测定法测定,计算加样回收率,结果见表2.
平均回收率为99.0%,RSD为1.1%.
表2加样回收率测定结果(n:6)
4讨论
用HPLC法测定咖啡因含量,曾采用了多种流动相比例,
其中以0.05tool?L枸橼酸溶液一乙腈(79:21)为优,分离效
果好,保留时间适当,理论板数也较高.样品处理采用搅拌溶
解,加热溶解以及超声处理等方法,结果显示将样品溶解于流
动相后用超声处理15min以上,样品中的咖啡因即可提取完
全,过程简单方便.对于痰咳净片中咖啡因的含量测定,卫生
部1998年药品标准中采用碘量回滴法,此法操作繁琐,影响
因素较多,不利于产品的质量控制和检验.本文采用了
HPLC法测定痰咳净片中的咖啡因的含量,实验表明此方法
过程简单,线性关系好,准确可靠,适用于产品的质量控制.
参考文献:
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(收稿13期:20o6—1O一17)