大豆球蛋白、β-伴球蛋白的分离提取及对猪外周血淋巴细胞

大豆球蛋白、β-伴球蛋白的分离提取及对猪外周血淋巴细胞大豆球蛋白、β-伴球蛋白的分离提取及对猪外周血淋巴细胞大豆球蛋白、β,伴球蛋白的分离提取及对猪外周血淋巴细胞增殖和免疫功能的影响动物营养研究所:李成贤指导教师:周安国研究员本研究采用实验研究方法，以分离纯化的豆粕抗原蛋白作实验材料，研究纯化抗原蛋白的特性和体外对体液免疫及细胞免疫的影响。研究分两个实验: 试验一:大豆球蛋白和β,伴球蛋白分离提取。利用豆粕中7S和11S球蛋白在pH6.1-6.6之间溶解度不同的特点，首先对两种球蛋白进行初步分离，然后利用硫酸铵进行盐析和凝胶过滤，除去非抗原蛋白组分...

大豆球蛋白、β-伴球蛋白的分离提取及对猪外周血淋巴细胞大豆球蛋白、β,伴球蛋白的分离提取及对猪外周血淋巴细胞增殖和免疫功能的影响动物营养研究所:李成贤指导教师:周安国研究员本研究采用实验研究方法，以分离纯化的豆粕抗原蛋白作实验材料，研究纯化抗原蛋白的特性和体外对体液免疫及细胞免疫的影响。研究分两个实验: 试验一:大豆球蛋白和β,伴球蛋白分离提取。利用豆粕中7S和11S球蛋白在pH6.1-6.6之间溶解度不同的特点，首先对两种球蛋白进行初步分离，然后利用硫酸铵进行盐析和凝胶过滤，除去非抗原蛋白组分，得到纯度相对较高的大豆球蛋白和β,伴球蛋白。结果表明:豆粕粉经0.03mMTris-HCl、料液比1:20、室温、PH8.0，提取2h，豆粕总蛋白提取率为32.88%。可分离出蛋白质含量71.53%的11S粗组分9.1%和蛋白质含量60.73%的7S粗组分7.9%;经盐析和凝胶过滤后，可得到蛋白含量84.19%的纯化大豆球蛋白4.3%和蛋白含量79.47%的纯化β,伴球蛋白6.0%;经过SDS-PAGE电泳鉴定，11S粗组分纯度达到87.0%，7S粗组分纯度达到62.5%;纯化后的大豆球蛋白纯度达到93.8%，β-伴大豆球蛋白达到67.2%，单位豆粕含大豆球蛋白182.34g/kg, β-伴大豆球蛋白126.94 g/kg。实验二:利用细胞培养技术，研究了不同水平纯化大豆球蛋白、β-伴球蛋白(0、0.5 mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml)对猪外周血单核淋巴细胞(PBMC)增殖和免疫功能的影响。结果表明:大豆球蛋白、β,伴球蛋白显著增加体外培养的猪外周单核淋巴细胞数量，极显著影响细胞MTT OD值(P<0.01)。β,伴球蛋白与培养液IL-2、IL-6、IFN-γ、IgA含量呈显著(P<0.05)正相关，大豆球蛋白对培养液中IL-2、IL-6、IFN-γ、IgG、IgM、IgA含量影响不显著(P>0.05)。本实验研究表明，豆粕可分离出纯度达到93.8%的大豆球蛋白182.34g/kg和纯度达到67.2%的β-伴大豆球蛋白126.94 g/kg。大豆球蛋白、β,伴球蛋白促进体外培养断奶仔猪外周淋巴血细胞转化和过度增殖，β,伴球蛋白可促使体外培养断奶仔猪外周血淋巴细胞产生炎性细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6和提高IgA水平。由结果可知:β,伴球蛋白抗原性强于大豆球蛋白。关键词:大豆球蛋白、β,伴球蛋白外周血淋巴细胞增殖免疫功能

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