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猪免疫球蛋白G2bIgG2b试剂盒ELISA.doc

猪免疫球蛋白G2bIgG2b试剂盒ELISA

广广神秘之岛
2019-02-27 0人阅读 举报 0 0 0 暂无简介

简介:本文档为《猪免疫球蛋白G2bIgG2b试剂盒ELISAdoc》,可适用于工程科技领域

猪免疫球蛋白Gb(IgGb)试剂盒(ELISA)使用说明书●本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中猪免疫球蛋白Gb(IgGb)的含量。●有效期:个月●保存条件:℃●本试剂盒仅供体外研究使用不用于临床诊断实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被猪免疫球蛋白Gb(IgGb)捕获抗体的包被微孔中依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪免疫球蛋白Gb(IgGb)呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度(OD值)计算样品浓度。样本处理及要求 血清:全血标本请于室温放置小时或℃过夜后于g离心分钟取上清即可检测或将标本放于℃或℃保存但应避免反复冻融。 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后分钟内于°Cg离心分钟或将标本放于℃或℃保存但应避免反复冻融。 组织匀浆:用预冷的PBS(M,pH=)冲洗组织去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按:的重量体积比比如g的组织样品对应mL的PBS具体体积可根据实验需要适当调整并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液于×g离心~分钟取上清检测。 细胞培养物上清或其它生物标本:g离心分钟取上清即可检测或将标本放于℃或℃保存但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果因此溶血标本不宜进行此项检测。标本处理 本公司只对试剂盒本身负责不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量预留充足的样本。 实验前应预测标本含量如果标本浓度过高应对标本进行稀释使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用molL的PBS稀释(PH=)。 若所检样本不包含在说明书所列样本之中建议进行预实验验证其有效性并注意留存样本。 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。 若样本为细胞培养上清因该类样本干扰因素较多如:细胞状态、细胞数量、采样时间等所以可能存在检测不出的情况。 某些天然蛋白或重组蛋白包括原核及真核重组蛋白可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配而不被检测出。 建议使用新鲜样本保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。需要而未提供的试剂和器材酶标仪(nm)高精度加样器及枪头:uL、uL、uL、uL℃恒温箱蒸馏水或去离子水试剂盒组成名称孔配置孔配置备注微孔酶标板孔×条孔×条无标准品mL*管mL*管无样本稀释液mLmL无检测抗体HRPmLmL无×洗涤缓冲液mLmL按说明书进行稀释底物AmLmL无底物BmLmL无终止液mLmL无封板膜张张无说明书份份无自封袋个个无    备注: 标准品浓度依次为:、、、、、μgmL 经过大量正常标本检验标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内实验过程中直接取μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。注意事项严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温℃。使用后立即冷藏保存试剂。洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。消除板底残留的液体和手指印否则影响OD值。底物显色液应呈无色或很浅的颜色已经变蓝的底物液不能使用。避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。在储存和温育时避免强光直接照射。平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。不能使用过期产品。如果可能传播疾病所有的样品都应管理好按照规定的程序处理样品和检测装置。试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按:稀释即份×洗涤缓冲液加份蒸馏水。操作步骤 从室温平衡min后的铝箔袋中取出所需板条剩余板条用自封袋密封放回℃。 设置标准品孔和样本孔标准品孔各加不同浓度的标准品μL 样本孔中加入待测样本μL空白孔不加。 除空白孔外标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体μL用封板膜封住反应孔℃水浴锅或恒温箱温育min。 弃去液体吸水纸上拍干每孔加满洗涤液(μL)静置min甩去洗涤液吸水纸上拍干如此重复洗板次(也可用洗板机洗板)。 每孔加入底物A、B各μL℃避光孵育min。 每孔加入终止液μLmin内在nm波长处测定各孔的OD值。实验结果计算以所测标准品的OD值为横坐标标准品的浓度值为纵坐标在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线并得到直线回归方程将样品的OD值代入方程计算出样品的浓度。试剂盒性能检测范围:μgmL–μgmL。灵敏度:最低检测浓度小于μgmL。特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。重复性:板内变异系数小于板间变异系数小于。说明 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析本产品可能存在一定的质量技术风险。 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关请务必准备充足的标本备份。 不同批次的同一产品可能会有少许差别如:检测限、灵敏度以及显色时间等请依据试剂盒内说明书进行实验操作网站电子版说明书仅作参考。 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。问题解答若实验效果不好请及时对显色结果拍照保留所用板条及未使用试剂并妥善保存然后联系我公司技术支持为您解决问题。同时您也可以参考以下资料:问题可能原因解决方案标准曲线差吸取及洗涤不充分充分的吸取及洗涤移液不精确检查和校正移液器精密度低洗涤不充分按说明书要求充分洗涤和浸泡混匀不充分和吸取试剂不足充分混匀和吸取试剂重复利用吸头、容器和覆膜使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜加样不精确检查和校正移液器OD值低每孔加的试剂量不精确校正移液器精确加入试剂温育时间不正确保证充足的温育时间温育温度不正确试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度酶标记物或底物失效通过混合酶标记物和底物颜色应迅速显现来检查没有加入终止液按照说明书实验操作步骤加入终止液超出读数时间读数在说明书推荐的读数时间内读数样本值不正确的样本储存方式正确储存样本使用新鲜样本进行实验不正确的样本收集和处理方法采取正确的样本收集和处理方法待测物质在样本中含量低使用新鲜样本重复实验   

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