石蜡包埋人体组织str检验的探讨

石蜡包埋人体组织str检验的探讨 石蜡包埋人体组织STR检验的探讨 【摘要l目的探讨普通甲醛对人体组织dna的影响及提高str检出率的手段。 方法取少量石蜡包埋组织，65?水浴脱蜡， chelex一100法提取dna，pcr扩增，循环次数分别为28次和28+6次，扩增 产物经310型测序检测。结果普通甲醛固定5 d以内的 组织基本上可检出amel及15个str基因座。固定时间延长，检 出率下降;pcr循环次数增加，灵敏度增加，但有错误分型的情况。 结论普通甲醛固定时问长短直接影响pcr—str的检验。减少 模板 个人简介word模板免费下载关于员工迟到处罚通告模板康奈尔office模板下载康奈尔 笔记本 模板 下载软件方案模板免费下载 量有利于pcr 反应成功，pcr次数为28+6时，灵敏度增加，但 应谨慎判读结果，以免错误分型。 【关键词】石蜡包埋组织;dna提取;str 【中图分类号】d919(2 【文献标识码】b 【文章编号】1007—9297(2006)01—0050—03 在某些民事案件中。成功对石蜡包埋组织进行 pcr—str分型来判断其归属问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 。对案件的解决起到 重要作用。目前国内医院及科研机构大多使用普通 10,甲醛固定人体组织。普通10,甲醛固定石蜡包埋 的组织中dna降解相对严重，提取高质量的dna并 进行pcr—str分型较为困难。实践中人体组织固定 时间长短不一，但以1周左右多见。本文的目的是探 索普通10,甲醛固定时间对pcr—str分型的影响以 及提高检出率的适当方法。 材料与方法 一 、材料 石蜡包埋人体组织均取自本所病理室。5个无关 个体的心、肾组织用1o,普通甲醛固定5 d、8 d、12 d 和15 d以上时(剪取组织边缘甲醛完全浸润处。石蜡 包埋，常规切片he染色，显微镜下观察确保组织结构 清晰，无自溶、坏死和大片出血后，作为本研究材料使 用。 二、方法 1(预处理。切取8 ixm厚的石蜡包埋组织，尽量剔 除石蜡部分，放入0(5 ml离心管中;或挖取小米粒大 的石蜡包埋组织，放入0(5 ml离心管中。加入500 ddw，65c【=保温10min脱蜡，弃除液体。【 】 2(dna的提取。向每个离心管中加入150 ixl的 5,chelex一100和8 l pk (20mg,m1)，56 c【=保温过夜， 次日再加4 lpk(20mg,m1)，再消化4h，振荡后，100cc 8rain，13000 rpm,min离心3rain，4 oc备用。 3(pcr扩增。采用identifiler荧光复合扩增。采用 10 l反应体系，热循环条件:95 c【=预变性l1 rain;94 oc 1rain，59 oc lmin，72? lmin，循环次数分别为28 次，28+6次(循环28次后，每反应管加0(3 ixl ampli taq gold dna聚合酶，再循环6次);[2】最后60?延伸 45raino 4(上样检测。取1(5 l dna pcr产物与l2 l甲 酰胺(formamide)、0(4 ixl内标(liz)混合后，经过abi 310 dna自动测序仪电泳荧光检测，使用genescan(3( 1(2)和genotyper软件分析得出基因分型结果。 结果 1(经普通甲醛固定5 d、石蜡包埋的心和肾组织基 本上能检出完整的str等位基因型。而随着固定时间 的延长，能检出的str基因座数目逐渐减少(出现了 大片段等位基因缺失、等位基因扩增不平衡的现象 (见图1。2)。本次试验中观测到最短固定时间为8 d 的组织，因大片段等位基因缺失而造成假纯合子的错 误分型(见图3)。而固定时间超过15 d时。则最多只 能检出性别及个别小片段str基因型，常伴有分型错 误。 2(当pcr循环数从28次增加到28+6次(先循环 28次再加酶循环6次)时，可以检出以前信号弱、无法 判读的峰，提高了检出率(见图4)。循环次数的增加， dna检测灵敏度有所提高。但随着固定时间的延长， dna降解严重，增加扩增循环次数(易引起部分str 基因座的分型错误(如图5中d3s1358基因座出现的 pull—up峰。 讨论 【作者简介】~gg(1971-)，女，硕士研究生，江西九江人，主要从事法医dna 工作。tel:+86—10—68621174;e—mail:yuanliwcy@yahoo(com(cn ? 52 ? 6att~ltt4((jd?xh fl蚰暑b-(( 14-ed-xi~ $,ia~plel4,(~"-xln fs,a暑 [NextPage] y~iiov 1? bd- h $?r坤?1^(4-xk~ f?l罩r?d ’4-0 x 法律与医学杂志2006年第13卷(第l期) sm k,t((((-28-~ (fs4 t blue '4-ed-xln-28+6 94mple1??-284(6(fs4 ’gre4,n 14-113d-xks-28( i(6 s4~npbl??q}?+‘ 1 — i~ xir,-2sl+6 图4 提取普通甲醛固定8天心肌dna，pcr循环数为28次(左图)及28+6次(右 图)的检测结果 8mlnpk,9,-(( '摹i抽'2 yeller 9-xin-t5d sm iple~ ,((2e+6(fsa i3自h 9(-xi~ l5d跏 smtple~' ’?‘一fn i 5 v?l? _ 9-xks-i5d;~ '6 sin k9= 2 (6(fl蚺l善r(d 9(-xi~ lsd柳6 图5 提取普通甲醛固定15天心肌dna。pcr循环数为28次(左图)及28+6次l右图)的检测结果 参考文献 【1】周毅，严红，李万水，等(石蜡包埋人体组织dna分型的研究叨( 刑事技术。2003(4):17—18 f2】陈连康。王德明，顾丽华，等(pcr扩增循环数增加对低拷贝模板 str分型的影响叨(刑事技术，2004(增刊):17,19 【3】shi sr，cote rj，wu l'eta1(dna extractionfrom archivalformalin — fixed( parafiqn-embeded tissue bases on the antigen retrieval principie: heating under the influence of ph 叨(j hi~oehem cytochem ， 2002(50:1005—101 1 [4 ] sato y，sugie r，tsuchiya b，et 1a(comparison of the dna extraction methods for polymerase chain reaction amplication from formalinfixed and paraffin—embedded tissues叨(diagn mol pathol，2001，10(4): 265-271 【5 】romerrl，justan ac，ballantyne j， et1a( applicabilityfoformalin- fixed and paraffin embedded tissues in forensic dna analysis叨( j forensic sci’1997，42(4】:708-714 (收稿:20o5—1 l一03)