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考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察

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考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察 考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观 察 380中国公共卫生2006年3月第22卷第3期c^跏 JPublicHealthMar2006Vo1.22No.3 文章编号:1001.0580(2OO6)O30380.02中圈分类号:Q51文献标识码:B 考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察 陈晓梅,刘雅文,程熠,剥,静,李勇,王韶 蛋白定量结果是生物医学研究中的基础数据.其准确与 否关系到研究结果的可靠程度.样品总蛋白定量技术方 法[1?]由于限制条件较多,操作复杂,适...

考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察
考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察 考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观 察 380中国公共卫生2006年3月第22卷第3期c^跏 JPublicHealthMar2006Vo1.22No.3 文章编号:1001.0580(2OO6)O30380.02中圈分类号:Q51文献标识码:B 考马斯亮蓝法蛋白定量标准曲线稳定性观察 陈晓梅,刘雅文,程熠,剥,静,李勇,王韶 蛋白定量结果是生物医学研究中的基础数据.其准确与 否关系到研究结果的可靠程度.样品总蛋白定量技术方 法[1?]由于限制条件较多,操作复杂,适用面较窄,其中凯氏 定氮法是目前常用的标准参照蛋白自身定量技术.本文选 ?条件下50d内作 择冻干的牛血清白蛋白,将其溶解后,在4 为定量用标准参照蛋白,观察不同存放时间内标准参照蛋白 含量变化和标准曲线的兼容性和稳定性【3】.结果 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下. 1材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1材料牛血清白蛋白(上海生化试剂厂);其他药品试剂 均为国产 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯.凯氏定氮装置,722分光光度计(上海光谱 仪器有限公司). 1.2方法 1.2.1凯氏定氮法测定牛血清白蛋的含氮量按照文献[4] 方法.配鬣定量试剂.于10.20.30,40,50d分别取样,测定总 氮和非蛋白氮含量.蛋白质的含氮量为总氮含量与非蛋白氮 含量之差,乘以系数6.25,即获得蛋白质含量.以时间为横 坐标,蛋白质含量为纵坐标.绘制蛋白质含量变化曲线. 1.2.2改良VanSlyke法定量牛血清白蛋白氨基酸含量 分别配置0.05mol/L的NaNO~和0.1mol/L的HCI溶液.根 据a.氨摹酸中的氨基均可与亚硝酸作用,放出氮气并生成n. 羟基酸的原理,以甘氨酸为标准参照氨基酸,通过比色测定 (0.0596橙黄Iv为颜色指示剂)亚硝酸的消耗量,以甘氨酸 浓度为横坐标,以450nm处的吸光度值为纵坐标,绘制标准 定匠曲线,并做真线相关检验,然后分别测定存放1O,2O.3O, 40,50d的牛血清白蛋白样品(稀释10倍)中氨基酸含量. 1.2.3考马斯亮蓝常规定量按照文献[5]方法,配制定量 标准试剂.取5ml标准试剂,加入到双蒸水溶解的经凯氏定 氮测定含量的蛋白样品中,充分混合,放置5rain后,在595 nm处测定吸光度.在蛋白含量线性范围内(0.2,1.4g/1.) 均匀取7个浓度点,以蛋白浓度为横坐标,595nm处的吸光 度值为纵坐标,绘制常规标准定量曲线,并做直线相关检验. 1.2.4考马斯亮蓝微量定量按照文献[5]方法,配制定量 标准试剂.取0.2ml标准试剂,加入到双蒸水溶解的经凯氏 定氮测定含量的蛋白样品中,充分混合,放置5min后,在595 nm处测定吸光度.在蛋白含量线性范围内(5—100113g/i) 均匀取l0个浓度点.以蛋白浓度为横坐标,595nm处的吸光 度为纵坐标.绘制微量标准定量曲线,并做直线相关检验. 1.2.5考马斯亮蓝定量法的稳定性实验在常规和微量考 马斯亮蓝定量范围内.以牛血清白蛋白为标准品,采用生物医 学研究常用的缓冲液(A液:pH8.0,0.02mol/LTris.HC1+ 0.02mol/LNaC1缓冲液;B液pH8.0,0.02mol/LTris.HC1+ 作者单位:1.吉林大学公共卫生学院流行病学教研究室,长春 130021;2.吉林大学基础医学院生物化学与分子物学教 研究室;3.长春市朝阳区疾病预防控制中心 作者简介:陈晓梅(1962一).女.安徽人.主管技师,本科,主要从事卫 生统计教学和科研工作. 通讯作者:刘雅文 【检验技术】 0.02mol/LNaC1缓冲液;C液:pH5.8,NazHP04.NaI-IzP04;D 液:pH6.5.0.02mol/LNa2HP04Nail2P04;E液pH7.0,0.02 mol/LNa~HP04一NaH2P04;F液:pH7.5.0.025mol/L Na2HP04一NaH2P04+0.05mol/LNaC1缓冲液;G液:pH7.5, 0.025mol/LNa2HPO,NaH2P04+1.5mol/LNaC1缓冲液), 分别配制各浓度点蛋白溶液(参试样品);将各参试样品分别 与定量试剂混合,混合后5min,测定各样品595rim的光吸收 度.将各样品吸光度(A)值与标准曲线的吸光度值进行双因 素方差分析,并进行相关性分析. 2结果 2.1不同天数时牛血清白蛋白样品蛋白质含量在10,50 d范围内,以凯氏定氮法测定的牛血清白蛋白样品蛋白质舍 量未见明显规律性变化,但呈下降趋势(图1). 存放时间(d) 圉1不同时间蛋白质含量的变化 2.2不同天数时牛血清白蛋白样品中氛基酸质含量在 0.2,1.6g/L的蛋白浓度范围内,蛋白浓度与吸光度A440呈 直线正相关(P<0.001;计算 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 :氨基酸浓度=(A44o一 0.09021)/0.17321(g/L).在10,50d范围内,改良Van Slyke法测定的牛m清白蛋白中氨基酸含量呈逐渐增加趋势 (图2). 毛 县 避 崩 槭 图2不同时间氨基酸含量的变化 2,3考马斯亮蓝定量(1)常规定量:在0.2,1.4g/L的蛋 白浓度范围内,蛋白浓度与吸光度值(A9)呈直线正相关(P <0.001);计算公式:蛋白浓度=(A595,0.12)/0.3536 (g/L).(2)微量定量:在5,100rrlg/L的蛋白浓度范围内,蛋 白浓度与光吸收度A5呈直线正相关(P<0.001);计算公 式:蛋白浓度=(A595—0.197)/o.00103(g/L).(3)稳定性 实验:结果显示,各(A,G)缓冲液对考马斯亮蓝常规定量和 微量定量结果无干扰(P>O.05),其中常用的Tris-HC!:PB和 中国公共卫生2006年3月第22卷第3期 Chin.,PublicHealthMar2006Vo1.22No.3381 PBS缓冲液不影响考马斯亮蓝法标准定量曲线的可用性. 回归曲线斜率均不相同. 3讨论 各不同而产生的主客观误差. 牛血清白蛋白是极为常用的标准参照蛋白,其质量限定 :条件一般要求蛋白质含量在80%以上(凯氏定氮法测定). 本文结果显示,lO,50d范围内,以凯氏定氮法测定的牛血清 白蛋白质含量未见明显规律性变化,但呈下降发趋势;而氨基 酸含量呈逐渐增加趋势.表明在4?条件下牛血清白蛋白存 在降解现象.凯氏定氮法测定的灵敏度较低,抗氨基酸干扰 能力较差,虽然所获得的蛋白含量维持在80%以上,但由于 牛血清白蛋白在纯化过程中使用了多种抗含氮化合物(63,其 对牛血清白蛋白含量的干扰作用不应忽视.本文结果提示. 单纯使用凯氏定氮法作为衡量标准参照蛋白质量的标准方法 尚值得商榷.本文采用双因素方差分析法,观察生物医学研究 中常用的缓冲液对标准曲线影响.结果表明,这些常用的缓 冲液也不干扰考马斯亮蓝法标准定量标准曲线,提示使用考 马斯亮蓝法进行蛋白标准定量,可以避免由于标准曲线斜率 参考文献 】WandyWYou.RosariaPHaugland,DianeKRyan.et.3.(4.car. 【1 boxybenzoy1)quinoline一2carboxaldehyde.areagentwithbroaddy. namicranggeforassayofproteinsandlipoproteinssolutin[J].Anal Biochem,1997,244:277—282. [2]ClaudeGuermant.MohamedAzarkan,NicleSmolders.eta1.Under propercontrol,ozidationofproterinswithkonwnchemicalstructure providesanaccurateandabsoluktemethodforthedeterminationof theitmolarconcentration[J].AnalBiochem,2000.277:46—57. [3]李闻捷,范华杰.蔡刚.蛋白质定量方法的局限性及合理应用 [J].临床检验杂志,2004,22(3):210. [4]李建武.生物化学实验原理和方法[M].北京:北京大学出版社, 1991:160—163. [5]BradfordMM.Arapidandsensitivemethodforthequantotationof mincrogramquantitiesofproterinutilizingtheprinvipleofprotein— dyebinding[J].AnalBiochem,1976,72:248—254. [6]季钟煜.纪念研制牛血清白蛋白合格产品4O周年[J].生命的化 学,2004,24(5);441—444. 收稿日期:200508.30 文章编号:1001,0580(2006)030381.02中图分类号:R587;R195.4文献标识码:A 2型糖尿病影响因素非条件Logistic回归分析 刘茂玲,吴少庭,卢祖洵 (孔繁学编校) 【论着】 摘要:目的探讨深圳市4O岁以上人群2型糖尿病的危险因素,为制定相关干预政策及措施提供依据.方法 采用病例对照研究方法,对研究因素进行单因素及多因素非条件Logistic回归分析.结果糖尿病家族史,高血 压,高血脂,工作压力是2型糖尿病的危险因素;而文化程度,运动锻炼是保护因素.结论在社区人群中,培养健康 的生活方式,早期,及时地控制血压,血脂和体重是预防2型糖尿病发生的重要措施. 关键词:2型糖尿病;危险因素;Logistic回归分析 Non— conditionallogisticregressionanalysisonriskfactorsoftype2diabetesmellitusLjUMaoling.UShaoting,LL, Zuxun.DepartmentofSocietyMedicine,TongjiMedicalCollegeofHuazhongUniversityofScienceandTechnology (Wuhan430030,China) Abstract:ObjectiveToexploretheriskfactorsoftype2diabetesmellitus(T2DM)inthepopulationaged40orover inShenzhencityandtOprovidescientificevidenceforpreventionandinterventionoftype2diabetesmellitus.MethodsA case— controlstudywasconducted.TherelationshipbetweenstudyfactorsandT2DMwereanalyzedbyunconditionaluni— variateandmultivariateLogisticregression.ResultsFamilyhistoryofdiabetesmellitus(DM),hypertension,hyperlipidemia andworkpressurewerethemajorriskfactorsandcullureleve1.exerciseweretheprotectfactorsforT2DM.ConclusionItis animportantmeasuretOpreventT2DMincommunitypopulationtoproposehealthylifestyleincludingproperexercise,con— trolofhighbloodpressure,highbloodfatandweight. Keywords:type2diabetesmellitus;riskfactors;logisticregressionanalysis 糠尿病(diabetesmellitus,DM)是一组病因和发病机制尚 未完全阐明的慢性终身性疾病.我国虽属世界上糖尿病患病 率较低的国家.但由于人口基数大,糖尿病病例数已经跃居世 界第2位,仅次于美国,已成为我国重要的公共卫生问题[】J. 2型糖尿病(T2DM)是最常见的糖尿病类型,其发病人数约占 作者单位:i.华中科技大学同济医学院公共卫生学院社会医学系, 武汉430030;2.广东省深圳市疾病预防控制中心分子生 物学实验室 作者简介:刘茂玲(1974一).女.贵州纳雍人,博士在读.研究方向:糖 尿病分子流行病学. 通讯作者:吴少庭 糖尿病总数的90%.为探讨2型糖尿病发病的危险因素,为 积极有效开展糖尿病防治工作提供依据,本文选择深圳市进 行调查研究.现将结果报告如下. 1对象与方法 1.1对象病例来源于2004年5月,10月在深圳市第一 人民医院,深圳市第二人民医院及深圳市保健办就诊及住院 的2型糖尿病患者150例;对照组为同期在门诊进行健康体 检的非糖尿病人群150倒. 1.2内容和方法按照统一 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 的调查表,对研究对象进行 询问调查.对调查对象不进行诱导式提问,以防偏差.如实填
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