【word】 闪式硅胶柱层析法分离银杏黄酮和萜类内酯的工艺研究

【word】 闪式硅胶柱层析法分离银杏黄酮和萜类内酯的工艺研究 闪式硅胶柱层析法分离银杏黄酮和萜类内 酯的工艺研究 齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffairs2010Vo1.29,No.7 PK/PD参数对优化临床给药 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 是基于药物在感染部 位对病原菌的清除作用有足够的浓度和足够的作用时间.是 一 个体化方案.根据不同药物的PK/PD参数与疗效的相关 性,可以用参数预测临床疗效,并通过该参数指导制定最佳 给药方案.对各种抗菌药物PK/PD研究的不断深入,将会 为我们优化使用抗菌药物提供非常重要的理论依据,对进一 步提高临床疗效,控制细菌耐药以及减少药物不良反应也具 有重要意义. 参考文献 [1]王宏.抗菌药物PK/PD参数与lI缶床给药方案分析I-J].中国药 师,2006,9(9):854~856. [2]卢冰冰,何权瀛.抗生索治疗肺炎时的药物浓度和用药间隔~JZ. 中国医刊,2001,36(3):41,42. [3]卫京平.抗生素药效学和药代动力学研究进展[J].天津药学, 2001,13(1):8,10. [43PericM,BrowneFA,JacobsMR,eta1.Activityofnineoralfl— gentsagainstgram——positiveandgram——negativebacteriaen’. counteredincommunity--acquimdinfections:useofpharmacoki— netic/pharmacodynamicbreakpointsinthecomparativeassess- mentofbeta—lactamandmacrolideantimicrobialagents[J].Clin Ther,2003,25(1):169,177. [5]王容.抗菌药物PK/PD参数对合理设计给药方案的意义[J]. 中国药师,2003,6(12):806~809. [63肖永红.抗革兰氏阳性菌抗生素药效学研究[J].国外医药(抗 ? 药物研究? ?425? 生索分册),2003,24(3):127,130. [7]刘学红,郭瑞臣,黄明慧.抗菌药物的药动学和药效学参数对临 床用药的意义口].中国医院药学杂志,2007,25(2):154,155. [8]OdenhohI.LowdinE.CarsO.Pharmacodynamicsoftelithromy— cinInvitroagainstrespiratorytractpathogens[J].AntimicrobA— gentsChemother,2001,45(1):23,30. [9]丁有奕,黄渚,柯景雄.抗菌药物的药动学和药效学参数对临床 用药的指导作用[J].国际医药卫生导报,2007,l3(10):77,79. [1O]王睿.氟喹诺酮类PK/PD的研究进展[J].中国新药杂志, 2002,11(11):884,887. [11]EbisuH,KishiiR,TakeiM,eta1.Theeffectofpharmacokinet— ic/pharmacodynamie(PK/PD)parametersofgatifloxacinon itsbactericidalactivityandresistanceselectivityagainstclinicali— solatesofStreptococcuspneumoniae[J].JInfectChemother, 2003,9(3):2lO,214. [12]AndesD.AnonJ.JacobsMR,eta1.Applicationofpharmacoki— neticsandpharmacod~,namicstoantimierobialtherapyofrespir— atorytractinfections[J].ClinLabMed,2004,24(2):477,502. [13]JamesJK,PalmerSM,LevinDP,eta1.Comparisonifconvien— tionaldosingversecontinuous--infusionvancomycintherapyfor patientswithsuspectedordocumentedgram——positiveinfec— tionsEJ].AntimicobialAgentsChemother,1996,40(3):696, 700. 闪式硅胶柱层析法分离银杏黄酮和萜类内酯的工艺研究 王永刚,李守信,向兰 (山东大学药学院,山东济南250100) 摘要:目的研究银杏叶提取物中总黄酮醇苷和萜类内酯的分离纯化 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 .方法采用闪式硅胶柱层析分离法,用不同 极性的有机溶剂洗脱并跟踪检测,筛选出能有效分离银杏叶提取物中的银杏黄酮和萜类内酯的洗脱剂及用量.结果此方 法可以很好地将银杏黄酮和萜类内酯分离,并且分离过程含量损失极小.结论此方法为银杏黄酮和萜类内酯的进一步单 独纯化提供了一种新途径. 关键词:银杏叶提取物;总黄酮醇苷;萜类内酯 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编 号:1672—7738(2010)07—0425—03 IsolationoftotalflavonolglycosidesandterpenelactonesfromGinkgoBilobaLeaves extractsbyFlashSilicaGelColumnChromatography WANGYong—gang,LIShou—xin,XIANGLan (SchoolofPharmaceuticalSciences,ShandongUniversity,Jinan250100) ABSTRACT:OBJECTIVETostudyseparationandpurificationmethodsoftotalflavonolglycosidesandterpenelactones whichfromGinkgoBilobaP.E.METHODSInmethodsofflashsilicagelcolumnchromatographyseparation,differentpolar ?426?齐鲁药事?QiluPharmaceuticalAffairs2010Vo1.29,No.7 organicsolventswithdifferentpolarfromweaktostrongisusedtoelutionandtracktesting,thenscreeningOuttheamountof solventsandeluentwithwhichwecanseparateGinkgoflavonoidsandterpenelactoneswhichfromGinkgoBilobaP.Eefficient— lY.RESULTSThismethodcanbeusedtOseparateGinkgoflavonoidsandterpenelactonesefficiently,andthecontentiOSSis minimumintheseparationprocess.CONCLUSIONThismethodwasanewwaytOfurtherpurifyGinkgo/lavonoidsandter— penelactonesseparately. KEYWORDS:GinkgoBilobaLeavesextracts(GBE):Tota1flavonolglycos ides;Terpenelactones 银杏叶为银杏科植物银杏(Cn’nkgobilobaL.)的干燥 叶,是一种天然药物,其制剂及有关产品在国际上十分走俏. 银杏叶提取物(GinkgobilobaL.Extract,GBE)是从银杏的 干燥叶中提取纯化而成的一种淡黄色粉状物质,在治疗冠心 病,脑血栓,脑缺血,脑功能障碍,脑伤后后遗症和神经系统 疾病方面疗效确切,是世界医药界研究的热点【J].银杏叶提 取物中黄酮类和萜类内酯是发挥独特药理活性的有效成分, 是银杏叶及其中间体和相关制剂中质量控制 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 的主要依 据[2].目前国际上银杏叶提取物的标准是按德国Schwabe 专利工艺生产的Egb761规定的,其中总黄酮醇苷的含量不 少于24,萜类内酯含量不少于6%,白果酸含量小于 5ppm.我国2005版药典也是这样规定的.我国银杏资源 占世界银杏资源的3/4以上,是世界上最大的银杏生产国, 但在银杏叶的研究开发利用上落后于一些发达国家,而且存 在产品收率低,产品质量差等问题,造成了国有资源的浪费. 因此,致力于这一领域的研究与开发,是一项长期坚持的任 务,对促进我国科技进步,提高产品竞争力和经济发展有着 极其重要的意义 本试验采用闪式硅胶柱层析法对银杏叶提取物中的有 效成分银杏黄酮和萜类内酯两部分进行有效分离,从而对银 杏黄酮和萜类内酯进一步纯化,为制备高纯度的银杏黄酮和 萜类内酯提供了一种新的思路和方法. 1仪器与试药 Agilentl100高效液相色谱仪,DAD检测器;Waters515 泵,Alltech2000蒸发光散射检测器;瑞士梅特勒AG285, XS204型电子分析天平 AB一8大孔吸附树脂:蚌埠市辽源新材料有限公司;40 — 63btm闪式柱层析硅胶:上海才恩弗科技有限公司;95乙 醇:山东温和集团;甲醇(色谱纯);水(重蒸水),其它试剂均 为分析纯.槲皮素,山柰素,异鼠李素,白果内酯,银杏内酯 A,银杏内酯B和银杏内酯C对照品购自中国药品生物制品 检定所(含量测定用,批号依次为0081—9304,0861— 200002,110860—200204,110865—200202,0862—200004, I10863—200204,110864—200203).银杏叶(采自山东郯 城,九月采集新叶,干燥). 2供试品的制备(上闪式硅胶柱前银杏叶提取物的制备) 取银杏叶lkg,粉碎,用5O的乙醇回流提取,回流液, 滤过,滤液回收乙醇并浓缩至适量,加水溶散,滤过,上AB一 8大孔树脂柱,水洗澄清后,再用4倍床体积1O乙醇洗脱, 然后用8倍床体积7O乙醇洗脱,收集7O乙醇洗脱液,浓 缩成稠浸膏,加闪式层析硅胶适量拌匀,真空干燥.即得. 3闪式硅胶柱分离纯化银杏叶总黄酮醇苷和萜类内酯条件 的优选 3.1闪式硅胶柱分离纯化总黄酮醇苷条件优选 3.1.1试验方法:取上述硅胶拌匀干燥后的银杏叶提取物适 量加于闪式硅胶柱(O×300mm,填料高180mm,湿法装 柱)上,分别用乙醚,乙酸乙酯,丙酮,乙醇洗脱.收集洗脱液, 每一倍床体积为一份(每种溶剂收集5份),共2O份.采用 高效液相色谱法分别测定每份洗脱液中总黄酮醇苷含量. 3.1.2考核指标选择:以总黄酮醇苷含量为评价指标. 3.1.3总黄酮醇苷的含量测定方法:色谱条件与系统适用性 试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm~250mm, 5m);甲醇一0.4磷酸溶液(50:50)为流动相;检测波长 为360nm.理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500. 对照品溶液的制备:分别精密称取经五氧化二磷干燥过 夜的槲皮索,山柰素,异鼠李素对照品,加甲醇制成每1mL 分别含0.0289mg,0.0379mg,0.016mg的溶液,作为对照品 溶液. 供试品溶液的制备:精密吸取每份洗脱液lO0mL,蒸 干,残渣加甲醇一25盐酸溶液(4:1)混合液25ml溶解, 移人250mL烧瓶中,回流30min,冷却,转移至50mL容量瓶 中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,即得. 测定法:分别精密吸取对照品溶液5p.L,供试品溶液 20/~L,注入液相色谱仪,测定,分别计算三种黄酮醇苷元的 含量,按下式核算成总黄酮醇苷的含量. 总黄酮醇苷含量=(槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李 素含量)×2.51 结果见表I,图1. 表l闪式硅胶柱层析总黄酮分离情况考察 编号洗脱剂编号洗脱剂含黄 mg 酮 ~ 醇 m 苷 E-1) 1乙醚0.020611丙酮0.2014 2乙醚0.Ol9212丙酮0.8179 3乙醚0.001313丙酮0.7210 4乙醚0l4丙酮2.8665 5乙醚015丙酮0.0736 6乙酸乙酯0.214l6乙醇0.0192 7乙酸乙醋0.26817乙醇0.0159 8乙酸乙酯0.0021l8乙醇0.0279 9乙酸乙酯019乙醇0.O179 lO乙酸乙酸0.02842O乙醇0.0117 齐鲁药事?QiluPharmacevticalAffairs2010Vo1.29,N— o, — 7 图1硅胶柱层析总黄酮醇苷洗脱曲线 3.1.4结果:银杏叶总黄酮醇苷不易被乙酸乙酯洗脱,以丙 酮为洗脱剂时,总黄酮醇苷基本洗脱完全,所得产物纯度较 高,总黄酮醇苷回收率也较高,故选择丙酮作为洗脱剂,同时 根据洗脱曲线定丙酮洗脱用量为4倍床体积. 3.2闪式硅胶柱分离纯化萜类内酯条件优选 3.2.1试验方法:同上述总黄酮醇苷洗脱方法,收集洗脱液, 每一倍床体积为一份(预试验显示萜类内酯较易洗脱,故每 种溶剂收集洗脱液3份),共12份.采用高效液相色谱法分 别测定每份洗脱液中萜类内酯含量. 3.2.2考核指标选择:以萜类内酯含量为评价指标. 3.2.3萜类内酯的测定方法:色谱条件与系统适用性试验, 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm 5m);甲醇一四氢呋喃一水(25:10:65)为流动相;蒸发光 散射检测器检测. 对照品溶液的制备:分别精密称取经五氧化二磷干燥过 夜的白果内酯,银杏内酯A,银杏内酯B,银杏内酯C对照 品,加甲醇制成每lmL分别含I.038mg,1.035mg, 0.537mg,0.590rag的溶液,作为对照品溶液. 供试品溶液的制备:精密吸取样品lOOmL,蒸干,加水 lOmL超声溶散,移入分液漏斗中,滴加2盐酸2滴,用乙 酸乙酯提取4次(15mL,lOmL,1OraL,lOmL),合并提取液, 用5乙酸钠溶液20mL洗涤,分取乙酸钠液,再用乙酸乙酯 lOmL洗涤.合并乙酸乙酯提取液及洗液,用水洗涤2次, 每次20mL,合并水洗液,用乙酸乙酯lOmL洗涤,合并乙酸 乙酯液,蒸干,残渣用甲醇溶解,定容于5ml量瓶中,摇匀,滤 过,取续滤液作为供试品溶液. 测定法:分别精密吸取对照品溶液5L,lOt~L,供试品溶 液各20/~L,注入液相色谱仪,测定,外标两点法计算样品中 萜类内酯的含量.结果见表2,图2. 表2闪式硅胶柱层析萜类内酯分离情况考察 编号洗脱剂(m萜 g 类 ~m 内 L 酯-)编号洗脱剂(m萜 g 类 ~m 内 E 酯 - ) 1乙醚07丙酮0.2841 2乙醚08丙酮0.3565 3乙醚9.24349丙酮0 4乙酸乙醇24.311210乙醇0 5乙酸乙酯1.9785l1乙醇0 6乙酸乙酯3.916312乙醇0 3O 25 芎 卸 15 蟠 轰10 悔 5 0 ?427? 6 图2硅胶柱层析萜类内酯洗脱曲线 3.24结果:银杏叶萜类内酯易被乙醚,乙酸乙酯洗脱,但乙 醚易挥发而且不安全,故选用乙酸乙酯为洗脱剂,根据洗脱 曲线定乙酸乙酯洗脱用量为3倍床体积. 4验证 取上述大孔树脂所得样品适量,平行两份.加硅胶拌 匀,干燥后加于闪式硅胶柱((p20×300mm,填料高180mm, 湿法装柱)上,先用乙酸乙酯3倍床体积洗脱,收集洗脱液, 回收溶剂,残渣用甲醇溶解并定容于25mL量瓶中,摇匀;再 用丙酮4倍床体积洗脱,收集洗脱液,回收溶剂,浸膏用水定 容至25mL量瓶中,摇匀.采用高效液相法分别测定萜类内 酯,总黄酮醇苷含量(萜类内酯含量测定供试品溶液的制备: 取上述甲醇定容液5ml,蒸干,然后同上法处理.总黄酮醇 苷含量测定供试品溶液的镪备:取上述水定容液,蒸干,然后 同上法处理.其它测定条件同上),结果见表3. 裹3闪式硅胶柱层析验证 \项目总黄酮醇苷含量萜类内醑含量 篇粤\(mg?g-1)(mg?g—I) 上样液4.251.6839 14.0301.3958 24.0451.5467 由表3结果可知,用闪式硅胶柱层析将银杏黄酮与萜类 内酯分开的同时,二者的损失均很小,故此工艺合理可行,可 进行放大. 5讨论 银杏叶提取物药理作用很广泛,临床应用也很广泛,这与 其中药效成分的复杂性有关.多年来,银杏叶提取物的药理药 效研究和临床应用大多是含银杏黄酮和萜类内酯的提取物,针 对各有效部位或有效单体成分开发的新药还比较少,本试验采 用闪式硅胶柱层析法实现了银杏黄酮与萜类内酯的快速有效分 离,为进一步根据其性质特点进行有针对性的分离纯化工作奠 定了基础.针对其有效部位或有效成分单独开展研究,将使其 药理作用和临床应用更有针对性,这样必将使其能更好的应用 于临床,为人类健康做出更大的贡献. 参考文献 [1]谢宗万.全国中草药汇编( 上册 三年级上册必备古诗语文八年级上册教案下载人教社三年级上册数学 pdf四年级上册口算下载三年级数学教材上册pdf )[M].北京:人民卫生出版社, 1975. [2]Stieher0.QualityofG[标签:快照]