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实验二粗蛋白的测定.doc

实验二粗蛋白的测定

本人夏尕妖
2017-10-07 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《实验二粗蛋白的测定doc》,可适用于高等教育领域

实验二粗蛋白的测定实验二饲料粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白质的测定让学生了解了解凯氏定氮法测定的基本原理掌握半微量凯氏定氮法测定饲料粗蛋白质的方法掌握粗蛋白质含量的计算方法。二、实验原理各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如CuSOKSO或NaSO或Se粉)的帮助下用浓硫酸进行消化作用使蛋白质和其它有机态氮(在一定处理下也包括硝酸态氨)都转变成NH并与HSO化合成(NH)SO而非含氮物质则以COHOSO状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏释放出的铵态氮用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵然后以甲基红溴甲酚绿作指示剂用HCl标准溶液(molL)滴定求出氮的含量根据不同的饲料再乘以一定的系数(通常用系数计算)即为粗蛋白质的含量。其主要化学反应如下:、NH(CH)COOHHSO(NH)SOCOSOH(丙氨酸)、(NH)SONaOHNHHONaSO、HBONHNHHBOHO、NHHBOHClHONHCHBO本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外还有氨基酸、酰胺铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等故以粗蛋白质表示之。三、实验设备、实验室用样品粉碎机或研钵、分析筛:孔径mm(目)、分析天平:感量g、消煮炉或电炉、滴定管:酸式或ml、凯式烧瓶:或m、凯氏蔗馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式、锥形瓶或m、容量瓶:ml。三、实验内容、称取,g试样(含氮量,mg)准确至g无损失地放入凯氏烧瓶中加入硫酸铜g无水硫酸钾(或硫酸钠)g与试样混合均匀再加硫酸ml和粒玻璃珠在消煮炉士小心加热待样品焦化泡沫消失再加强火力(,)直至溶液澄清后再加热消化min。、氨的蒸馏()常量直接茂馏法将上述的试样消煮液冷却加蒸馏水ml摇匀冷却。沿瓶壁小心加入,氢氧化钠溶液ml立即与蒸馏装置相连(蒸馏装置冷凝管的末端应浸入ml硼酸吸收液lcm。加混合指示剂滴轻摇凯氏烧瓶使溶液混匀加热蒸馏直至馏出液体积约ml。先将吸收液取下再停止加热。()半微量水蒸汽蒸馏法上述试样的消煮液冷却加蒸馏水m转入ml容量瓶冷却后用水稀释至刻度摇匀为试样分解液。取,硼酸溶液ml加混合指示剂滴使半微量蕉馏装置的冷凝管末端浸入此溶液蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴硫酸数滴且保持此液为橙红色否则应补加少许硫酸。准确移取试样分解液,ml注入蒸馏装置的反应室中用少量蒸馏水冲洗进样入口塞好入口玻璃塞再加ml,氢氧化钠溶液小心提起玻璃塞使之流入反应室将玻璃塞塞好并在入口处加水封密好防止漏气蒸馏min使冷凝管末端离开吸收液面用蒸馏水洗冷凝管末端洗液均流入吸收液。、滴定用硼酸吸收氨后立即用molL的HCI标准溶液滴定仍以甲基红或混合甲基红为指示剂。在测定饲料样本中含氮量的同时应做一空白对照测定即各种试剂的用量及操作步骤完全相同但不加样本这样可以校正因药品不纯所发生的误差吸收氨后的吸收液立即用molL盐酸标准溶液滴定溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。、空白测定称取蔗糖lg以代替试样按上述测定步骤进行空白测定消耗molL盐酸标准溶液的体积应不得超过ml。、计算每m的lmolL盐酸标准溶液相当于g的N。因此(v,v)cN,粗蛋白质(),'vmv式中:v试样滴定时所需酸标准溶液的体积(m)v空白滴定时所需酸标准溶液的体积(m)c盐酸标准溶液的浓度(molL)m一试样的质量(g)v试样的分解液总体积(ml)v’试样分解液蒸馏用体积(m)每mlHCl标准溶液相当于N的克数一氮换算成蛋白质的平均系数。每个试样取两个平行样进行测定以其算术平均值为结果。当粗蛋质含量在,以。上允许相对偏差为,当粗蛋白质含量在l,,,时允许相对偏差为,当粗蛋白质含量在,以下时允许相对偏差为,。测定步骤的检验精确称取g硫酸铵代替试样按测定步骤文字中的各步骤操作并按公式计算(但不乘系数)测得硫酸铵含氮量为,否则应检查加碱蒸馏和滴定各步骤是否正确。试样消煮时加入硫酸铜g无水硫酸钠g与试样混合均匀再加硫酸ml仍可使饲料试样分解完全,只是试样焦化再变为澄清所需时间要略长些。

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