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首页 广西地方标准《鸭黄病毒的检测 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法》(征求意见稿)编制说明

广西地方标准《鸭黄病毒的检测 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法》(征求意见稿)编制说明.doc

广西地方标准《鸭黄病毒的检测 反转录聚合酶链反应(RT-PCR…

刘脱凡
2018-05-15 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《广西地方标准《鸭黄病毒的检测 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法》(征求意见稿)编制说明doc》,可适用于综合领域

广西地方标准《鸭黄病毒的检测反转录聚合酶链反应(RTPCR)法》(征求意见稿)编制说明广西地方标准《鸭坦布苏病毒的检测反转录聚合酶链反应法(RTPCR)》(送审稿)编制说明项目背景和意义鸭黄病毒,坦布苏病毒Tembusuvirus~TMUV,是导致肉鸭神经症状及产蛋鸭出血性卵巢炎的主要病原~主要引起日龄以内的雏鸭出现严重的神经症状~死淘率增高及产蛋鸭的产蛋大幅下降。年在我国的集约化鸭场爆发了以体温升高,四肢无力、瘫痪,食欲废绝,产蛋大幅下降,出现神经症状,排草绿色稀便~气味恶臭为主要症状的传染性疾病。同时发病后常继发传染性浆膜炎、大肠杆菌病等其他疾病~使临床表现形式复杂化~造成巨大的经济损失。到目前为止我国各养殖蛋鸭及种鸭的省份均有TMUV感染的报道。TMUV已经确定可以感染北京鸭、樱桃谷鸭、绍兴鸭、缙云麻鸭、金定鸭及坎贝尔鸭等品种。在集约化鸭场中一旦爆发该病~感染后产蛋鸭产蛋率几天之内可以降到~死亡率大约为。但是目前还没有有效的疫苗预防此病。我国鸭年养殖总量约为亿只~其中存栏量约为亿只~年出栏肉鸭约为亿只~养殖总量占世界鸭养殖总量以上。养鸭业已经成为广西畜牧业生产的重要组成部分~年出栏肉鸭约为亿只。广西是一个养鸭大省~但是由于本病的爆发~加上没有有效的疫苗预防~给广西养鸭业造成了巨大的损失。所以开展鸭坦布苏病毒快速检测技术的研究~及时的诊断并采取处理措施非常重要。快速准确地检测TMUV是有效防制该病的前提~而仅依靠临床症状和病理变化不能对该病确诊~传统的病原分离和血清学方法不仅操作繁琐费时~已不适应现代集约化养鸭业发展的需要。PCR病原检测方法具有特异性强、敏感度高、诊断快速等传统诊断方法所无法比拟的优点~在发达国家已被广泛应用于动物疫病的诊断中。广西兽医研究所在国际上率先研究建立的TMUVRTPCR检测技术~其特异性强、敏感性高。既可以对分离培养物的TMUVRNA进行检测,也可以对直接从临床样品中取样抽提的TMUVRNA进行检测~而且整个操作过程不超过小时。为了使这一先进的病原检测技术能更好地为生产服务~特制定本技术操作标准。这一标准的制定~对现代养鸭业中TMUV的有效防制及检疫都将具有十分重要的实用意义。项目来源本标准是根据广西壮族自治区质量技术监督局下达文件《关于下达年第十六批广西地方标准制订项目的通知》,桂质监函号,附件的编写任务通知~由广西壮族自治区兽医研究所承担。广西兽医所内“鸭坦布苏病毒的检测反转录聚合酶链反应法(RTPCR)操作规程”编写小组~按《中华人民共和国国家标准GBT标准化工作导则》第部分“标准的结构和编写规则”的要求组织编写的。计划于年完成。编制过程为了方便广大使用人员~满足我区养鸭生产发展需要~进一步加强动物检疫手段标准化~顺应我国加入WTO后与国际接轨的形势。现在有关部门的大力支持下~由广西壮族自治区水产畜牧局提出~广西壮族自治区兽医研究所按照标准研制要求和编写工作的程序~及时组成了由单位专家和专业技术人员参加的编写小组~制定了编写方案~并就编写工作进行了任务分工。编制小组根据任务分工进行了资料收集和调查研究工作。一方面~在全区范围内养鸭企业进行考察和调研~实地进行检疫~了解TMUV的发病症状~传播途径等流行病学调查。二是查阅相关聚合酶链式反应法的技术要领~分析TMUV保守序列~并设计引物~上网比对~制定TMUVRTPCR标准操作规程。广西壮族自治区兽医研究所组织编写~并于年月完成了标准征求意见稿的起草工作。年月,在广西金质网公开征求意见后,完成了标准送审稿。科学是迅速发展的~本规程也必将随着科技进步和生产水平的提高不断修改补充。由于时间仓促~水平有限~不妥及不足之处在所难免~恳请各位专家、学者提出宝贵的修改意见。标准的编制原则及标准项目和主要技术内容编制原则本标准的编制主要遵循以下原则:一是科学性原则。在尊重科学、亲身实践、调查研究及广泛征求意见的基础上~根据TMUV保守序列~并设计引物~上网比对~制定TMUVRTPCR标准操作规程。二是可操作性原则。本标准无论是从样品采集~处理~RNA抽提~均操作简单~仅需小时既可完成。实验仪器仅需一台PCR仪和离心机。具有可操作性和实用性。三是协调性原则。以切实提高我区养鸭过程中坦布苏病毒病的技术水平为核心~符合我国现行有关法律、法规和相关的标准要求。主要技术内容本标准根据广西壮族自治区兽医研究所《鸭主要病毒病综合防控技术研究与示范》课题所取得的成果~针对鸭坦布苏病毒病毒(TMUV)的保守序列~设计了一对特异性引物~优化建立可以快速检测TMUV的RTPCR~并对其特异性和敏感性进行了测定。结果表明~该RTPCR可检测出不同鸭感染的TMUV~而对其它鸭病病原的检测结果为阴性,其最低可检测出pg的TMUVRNA。本规程的一些有关说明本规程在“操作方法”的“待检样品的准备”中给出了种不同材料的准备方法。其中:和给出了从临床样品直接取样进行病原核酸抽提的材料准备方法,给出了从病原分离培养物中取样进行病原核酸抽提的材料准备方法。在操作时可根据具体情况选择其中一种或多种方法进行。因本技术直接针对病原基因进行检测~敏感性非常高~所以在操作过程中要特别注意~避免样品之间交叉污染而出现的假阳性结果。另外~RNA酶在环境中无处不在~抽提好的待检RNA在保存过程中极易降解~会由此而导致假阴性结果。因此~对样品的处理应及时迅速~避免在冰箱中长时间保存。再有~本技术科技含量较高~为了避免错误的检测结果~建议在应用本技术之前~先对操作人员进行技术培训。编写小组年月

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