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甲型流感病毒检测步骤.doc

甲型流感病毒检测步骤

Louise素素
2017-09-20 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《甲型流感病毒检测步骤doc》,可适用于综合领域

甲型流感病毒核酸检测步骤所用仪器与试剂盒:实时荧光定量PCR仪、SimplyP总RNA提取试剂盒试剂盒组成:ComponentAmountSolutionRmlSolutionRmlWashbufferml(使用前加入ml无水乙醇)ElutionBufferSpincolumns需要的配套设备和材料无菌无酶的ml离心管     无菌无酶的各种规格移液器吸头离心机(最大转速〉rpm) 无酶无水乙醇 操作步骤:、样品预处理a)抗凝全血直接取全血(≤μl)加等量的SolutionR振荡混合s室温静置min放入ml离心管中进行下一步。b)白细胞全血取出后尽快离心(rpm×min)吸取白膜层或用红细胞裂解液/淋巴细胞分离获取白细胞进入下一步。c)组织块取不大于mg组织于液氮中研磨取出放入ml离心管中进入下一步。d)液体及其它液体样本(尿液腹水胸水脑积液等)可以直接取样本μl放入ml离心管中进入下一步。e)细菌取适量细菌培养液(最多×^个细菌)离心rpm×min弃去上清。加入μlSolutionR振荡混合s室温静置min进入下一步。、处理好的样品中加入SolutionRμl充分振荡混匀室温静置min此步骤不可离心取上清时尽量避免吸到悬浮杂质以避免下步离心时堵塞离心柱。、将上清液吸入SpincolumnsSpincolumns要套上离心管离心s。、弃去外管中液体向Spincolumns中加入μlWashbuffer离心s弃去接液管中液体重复洗涤一次然后空柱于rpm离心min后将离心柱转移到一个新ml离心管。、将Spincolumns移入新的ml离心管中在膜中央加入ElutionBufferμl室温静置min,离心s获得总RNA。、取适量PCR反应管每管加入IVAPCR反应液Aul、IVCPCR反应液Bul。、于上述PCR反应管中分别加入处理后的阴性质控品、待测标准核酸、IVA强阳性质控品、IVA临界阳性质控品、各ulrpm离心数秒放入PCR扩增仪。

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