虎纹毒素 硕士论文

虎纹毒素 硕士论文 湖南师范大学 硕士学位论文虎纹毒素-?对全脑缺血再灌大鼠海马TNF凋亡通路的影响 姓名:王一蓉 申请学位级别:硕士 专业:运动人体科学 指导教师:陈嘉勤 20070501 摘 要研究目的:观察虎纹捕鸟蜘蛛毒素(虎纹毒素一，，,,,,—，)对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马组织肿瘤坏死因子(,,,)死亡受体凋亡通路中相关因子蛋白及基因 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达的影响，探讨，,，,,,—，对大鼠全脑缺血再灌注损伤模型神经细胞保护作用的可能分子机制，为颅脑损伤临床治疗新的治疗手段提供实验依据。研究方法: ,—,周龄健康雄性,,大鼠,,只，随机分为假手术组 (,,,,)、非用药组(,,,,)、用药组(,,,,)，采用改良的,,,,,,,,,,大鼠四血管阻断全脑缺血结合蛛网膜下腔置管模型，应用光镜、电镜、免疫组化、逆转录一多聚酶链式反应(,,—,,,)实验技术，观察,,,,,，对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马,,,区锥体细胞,,,,,染色形态学变化、胞内线粒体超微结构及对海马组织中,,, ,(肿瘤坏死因子,)、,,,,，(肿瘤坏死因子受体，)、,,,,,(,,,相关死亡结构域)、,,,, (,,,相关死亡结构域)、,,,,,,,,等,,,死亡受体凋亡通路相关因子蛋白及基因表达的影响。研究结果: (,)通过,,,,,染色光镜下观察到假手术组,,大鼠海马,,,区可见数层锥体神经元，排列整齐紧密;非用药组海马锥体细胞排列散乱，层次不完整，呈稀疏分布;而用药组海马锥体细胞略为疏散分布。 (,)电镜下观察到假手术组海马锥体细胞线粒体嵴清晰可见，未见其断裂现象;非用药组线粒体嵴模糊不清，出现空泡化现象;而用药组未见明显线粒体嵴断裂现象。 (,)应用免疫组织化学染色法观察到假手术组海马,,,区几乎未见,,, ,、,,,,，、,,,,,、,,,,、,,,,,,,,凋亡因子阳性细胞(阳性细胞为棕褐色)表达或仅见少量阳性细胞表达;非用药组海马,,,区可见阳性细胞表达且阳性细胞集中密集分布;用药组海马,,,区可见阳性细胞表达，但阳性细胞分布较非用药组分布稀疏。 (,),,—,,,法检测到,,, ,、,,,,，、,,,,,、,,,,、,,,,,,,,凋亡因子,,,,表达以非用药组最高，用药组次之，假手术组最低。结论: (,)，,,,,,，蛛网膜下腔用药能稳定全脑缺血大鼠海马,,,区锥体神经细胞大体形态及线粒体超微结构。 (,),,,,,，蛛网膜下腔用药可下调全脑缺血大鼠海马神经细胞凋亡因子,,,,、,,,,，、,,,,,、,,,,、,,,,,,, ,蛋白及,,,,表达，对全脑缺血再灌注导致的大鼠海马神经元损伤起到了明显的抗凋亡的作用。 (,)死亡受体介导的信号转导通路与脑缺血再灌注损伤密切相关。阐明,,,死亡受体通路在全脑缺血再灌注损伤中的作用机制，对于有效防治由此造成的中枢神经系统损害具有重要的理论意义。关键词:,,,,,，神经细胞保护全脑缺血,,,凋亡通路相关因子 ? ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,—，(,,,,—，),,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,;,,,,, ,,,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,,,,,;,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,,,, ;, ,,,,,,,， ,, ,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,，,, ,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,;, ,,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,,, ,, ;,,,,,—;,,,,,,,,,,,,,(帕拍,,, ,, ,,,,,—,, ,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;;,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,, ;,,,,,; ,,,,,,,,;,, ;,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,, ;,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,。,,, ,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,(,,,,,,,;,,,,, ,,;,,,)、,,,,，(,,, ,,;,,,,, ，)、,,,,,(,,,,—,,,,;,,,,,,,,,, ,,,,,,)、,,,,(,,,—,,,,;,,,,, ,,,,, ,,, ,, ,,, ,,,,, ,,;,,,,, ,,,),,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,;,,,;,,,，,,,;,,,, ,,;,,,;,,,，,,,,,,,,,,,—;,,,, ,,,, ,,, ,,—,;,( ,,,,,,, (,),, ,,,,, ,,,,,,,,，,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,,,,,,,, ，,，,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,,,,,,,,,;，, ,,, ,,,,—， ,,,,,,,,,,,, ,,,,,。,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,(,,, ;,,,,;,,,, ,, ,,, ;,,;,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, , ,,, ;,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,,;,,,,,, ;,,,, ,,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,，,,, ;,,,,;,,,, ,, ,,, ;,,;,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,, , ,,, ;,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,,;,,,, ,, ;,,,, ,,,,,,,,( (,),, ,,,;,,,, ,,;,,,;,,,，,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,,;,,,, ,,,, ;,,,,,, ,,,, ;,,,,(,,, ,, ,,,,,,,, ,, ,,,,;,,,—,,,,, ;,,,,,, ,,, ,,,,,,,,:，, ,,, ,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,,;,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,, ,,;,,,,。,,;,,,,,,,,,, ,;;,,,,,:，,,,, ,,,,—， ,,,,,,,,,,,, ,,,,,( ,,,,;,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,,;,,,,( ,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,;,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,,,,,,,,,( (,),, ,,,,,,—,, ,,,;,,,, ,,,, ,,,,,,,,，,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,, ,、,,,,，、,,,,,、,,,,、,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,(,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,):，,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, —,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,;,,,;,,, ,,,,,,, ,;;,,,,, ,, ,,, ,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,，,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,, ;,,,,:，, ,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,, ,,,,,,,,,—， ,,,, ,, ,,;, ,,;,,, ,,,,,,, ;,,,, ,,,,,,,,,,，,,, ,,,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ;,,,, ,,,,,,, ,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,,( (,),, ,,—,;, ,,,,;,,,,，,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,、,,,,，、 ?,,柚,、,,,,、,,,,,,, , ,,,,蛆,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,—,,,,,,,,,,,, ,,,,,，,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,， ,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,(,,,;,,,,,,, (,),,, ,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,—， ,, ,,,,,,,,;,, ,,,;, ;,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ;,,,,,,,,;,,,, ,, ,,,,,;,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,, ;,,,,,,, ,,;,,,,;,,,,,,,,,,, ,,,,( (,),,, ,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,—， ,, ,,,,,,,,;,, ,,,;,,,;,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,;,,,,,, ,,,,，,,,,，，,,,肋，,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,，,,,;, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,;,,,, ,,,, ,,,,,;,,,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,;,,,,; , ,,,,,,,,,,( (,),,,,,, ,,,,,,,;,,,, ;,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,;,,,,, ,,;,,,,,, ;,,,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,(，, ,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,;,,;, ,, ,,,,,,, ,,,,,;,,,, ,, ,, ,,, ,,,,, ,,;,,,,, ;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,(,,, ,,,,,:,,,,—，:,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,;,:,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,;,,,,,;,,,,,,, ,,;,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, , 虎纹毒素一，对全脑缺血再灌人鼠海马,,,凋亡通路的影响 缩略词表 缩略词 英文全称，中文译名 ,,,,,， ,,,,,,,,,,—， 虎纹捕鸟蛛毒素(，,,,(，,(,?, ?(,,,,,,,,,,,, ,师,，, ,,,,, ,,;,,,,, ,,;,,, ,，, ,, 芋螺毒素 肿瘤坏死因子,，, ,,,,，?，， ,,, ,,;,,,,, ，，，， 肿瘤坏死因子受体， ,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,相关死亡结构域 ,蜘 ,,,(,,,,;,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,相关死亡结构域 ,,,,勰, ,,,,,,,,,, 半胱氨酸蛋白酶 ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,, 程序性细胞死亡 ,,, ,,,,, ,,,,;,,, ,,,,,, 死亡效应结构域 ,,,,，，, ,,,,,,,,,;,,,,, ,,;,,, ,，, 肿瘤坏死因子受体相关因子,，, ,，, ,,;,,,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,, 受体连接蛋白 ,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,;;,,,,,, 大脑中动脉阻塞 ,,,, ,,;,,,, ,,;,,,,,,,,,, 核转录因子(,, 硕，学位论文 缩略词表 ,,—,,—,,,,;,,, ,,,,,, ,，, ,,(,,诱导激酶 ，,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ，,, ，,,,激酶 ,,,,,,, ,,;,,,,,,,, ,,,,,,;, ,,,, ,,,,,,,募集区 ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,;,,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,， 凋亡蛋白酶活化因子一, ,,,,, ,,;,,,,, ,,，,，,，, 死亡受体,，,，, ,,,—?,,,,,,, ,,,,,,,,,,—,,,,;,,, ,,,,,, ,认，, ,,,相关的细胞凋亡诱导配体 ,??,,,,,,?,,??,,,,,,,; ,;,, ,,甲基(,天门冬氨酸 ,,,,,,,, , ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,(,,抑制剂 ,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,, 逆转录(多聚酶链式反应 虎纹毒素一，对全脑缺血,,手灌人鼠海马,,,凋亡通路的影响 ? 鲜Ψ洞笱а 宦畚脑 葱陨 ?本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作，铺成 果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文;,,以明 确 方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:五 五回年,月,口 湖南师范大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电了版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范火学可以将本学位沦文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位沦文属于 ,、保密口，在 年解密后适用本授权书。 ,、不保密彰 (请在以上相应方框内打“巾) 作者签名:丑一夯 剔磁辄澎 占月主,, „月甲 , 虎纹毒素,，对全脑缺血再灌人鼠海马,,,凋亡通路的影响 ,(前言 缺血性脑损伤是严重危害人类健康的常见病、多发病，可发病于各年龄段，如脑卒中、外伤、中毒、感染、变性均可导致脑神经细胞不可逆性功能丧失。因其具有发病率、致残率和死亡率高的特点，缺血性脑损伤成为人类死亡的主要原因之一，因而始终受到广大基础和临床工作者的重视。竞技体育比赛充满了激烈的对抗与竞争，在一些体育项目中，颅脑损伤是较为严重的创伤性疾病。冯金华报道…，在大学生急性运动意外伤中脑挫伤占,(,,,;李志敢等报道。,，在广东省跆拳道运动员损伤中，脑震荡占,(,,。颅脑损伤极易造成中枢神经系统的缺血、缺氧，引起神经元凋亡和坏死。神经元凋亡是缺血性脑损伤过程中神经元死亡的一种重要形式?,，它由多种因素启动，但凋亡的信号转导通路却相当保守，死亡受体通路是外在途径。因此，最大限度地阻止脑神经细胞凋亡是治疗缺血性脑损伤的重要环节。 缺血性细胞死亡，分为全脑缺血和局部脑缺血性死亡，包括细胞凋亡、坏死和自噬三种死亡途径阱,，从而导致缺血性脑损伤。其中，凋亡途径是以,,,降解、半胱氨酸蛋白酶活性增强、特征性蛋白和磷脂的变化以及凋亡形态学的变化为特征。在全脑缺血过程中及缺血后，由于细胞外钙离子内流及细胞内钙离子释放，导致细胞内及胞浆中的总钙离子急剧增加“,。,,,, ,,,等瞄,也证实在全脑缺血过程中，电压门控性钙通道的开放时间延长，钙内流电流亦随之升高。另有研究表明，急剧增加的细胞内钙离子是导致缺血性细胞损伤或死亡的作用机制之一嘲，钙超载也是引起凋亡的重要因素口,。因此，电压门控性钙通道阻断剂对于由凋亡途径引起的全脑缺血损伤可能发挥重要的保护作用。近年来利用钙拮抗剂治疗有关心、脑血管疾 硕士学位论文病已有大量文献报导，如硝苯吡啶、尼群地平、尼莫地平、维拉帕米和比帕里定等，但这些药物多为治疗心血管疾病，且属于化学药物，副作用大，因此对脑损伤的治疗目前尚无有确切疗效的药物问世。 从芋螺毒素中提取的,,个氨基酸的多肽:?一,,,,,,，，,,“,(合成品,,,一,,,)，可选择性阻断肿型电压门控钙离子通道电流，在大鼠全脑缺血模型和海马脑片培养实验模型研究中都表现出较强的神经保护作用，且副作用较小凹,。,,,一,，，是首次进入临床试验的神经钙通道拮抗剂，现已成为第一个运用于临床治疗缺血性脑损伤的多肽类钙拮抗剂，并取得了良好的疗效“,…。 虎纹捕鸟蜘蛛是分布于我国广西、云南一带特有的珍稀蛛种，其蜘蛛毒液是大自然界继芋螺毒素的又一种宝贵天然资源库。国际上已报道了多种选择性作用于钙通道的蜘蛛毒素，但还未见其对脑缺血性损伤神经细胞保护作用及其分子机制的基础研究。虎纹捕鸟蛛毒液能使小型哺乳动物和昆虫致死，其中丰度最高的是由,,个氨基酸残基组成的,,,,,，““,,〕,通过二维核磁共振技术(,,—,,,)测定，,,,,,，在溶液中为一典型的抑制剂胱氨酸结构模体(，,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,，，,,)“”，分子内有一个三股反平行,一折迭，三对二硫键稳定了，，,,,,，的空间结构。生物学活性研究表明,,,,—，能够选择性地作用于,,型钙离子通道，从而抑制神经细胞突触前膜释放递质而阻断神经传导““,,〕, ,,,,—，与现已通过美国,,,批准上市的,,,—,,,具有类似的结构模体“,,和相似的生物学功能，尽管二者来源于完全不同的生物品种，氨基酸排列序列差异较大，但它可能与,,,一,,,有相同的应用前景。在前期研究工作中，我们已完成了,,,,,，对大鼠脑匀浆中自由基浓度的变化及线粒体凋亡通路中,,,、,,，:相关因子基因及蛋白表达的影响方面的研究，因此我们继续深入开展,邢,,,，对凋亡通路相关因子，尤其是死亡受体凋亡通路的影 虎纹毒素一，对全脑缺血再灌人鼠海马,,,凋亡通路的影响响方面的基础和应用研究十分必要。 本文拟通过,,,,—，蛛网模下腔注射，观察其对全脑缺血再灌注大鼠海马,,,区锥体细胞,,,,,染色形态学变化，超微结构和胞内线粒体形态变化，海马组织,,,凋亡通路中相关因子蛋白及,,,,表达的影响，从,,,凋亡信号转导通路方面深入探讨,,,,,，对大鼠全脑缺血损伤模型神经保护作用的可能分子机制，为开发一种临床神经细胞保护新药提供理论研究基础。 虎纹毒素一，对全脑缺血再灌人鼠海马,,,凋亡通路的影响 ,(材料与方法,(,材料,(,(,实验动物 ,,,周龄健康雄性,,大鼠,,只，体重,,,,,,,,,，由湖南省卫生防疫站实验动物中心提供。分笼饲养，自由饮食，国家标准啮齿类动物饲料(湖南省卫生防疫站实验动物中心提供)饲养。室温,,?,?，相对湿度,,—,,,。,(,(,实验试剂,(,(,(,虎纹蜘蛛毒素一，(,,,,,，) 唧,,,，粉针剂:由湖南师范大学蛋白质化学研究室分离纯化，深圳科兴公司制药厂加工成冻干粉针，规格:,,,肛,,瓶，批号:,,,,,,，纯度:,,(,,，临用前用灭菌生理盐水配制，,”,冰箱保存;,(,(,(,麻醉剂 ,,,,,,水合氯醛:由中南大学湘雅医学院提供;,(,(,(,常用分析纯试剂 ,(,,氯化钠注射液、甲醇、无水乙醇、冰醋酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、多聚甲醛等常用分析纯试剂购于上海化学试验站;,(,(,(, ,, ,,,染色试剂 甲苯胺蓝:购于上海化学试剂站分装厂，批号:,,;,,,一,,,—,,;,(,(,(,免疫组化试剂 ,,,,,,,免疫组化试剂盒:购于北京中杉金桥生物技术有限公司，批号:,,,,,,,,,;,(,(,(, ,,, ,【、,,,,，、,,,,,，,,,,、,,,,,,,,因子一抗 ,,, ,、,,,,，、,,,,,一抗购于武汉博士德生物工程有限公司;,,,,一抗由,,,,, ,,,,公司提供;,,,,,,,,一抗由,,,,,;,,,;, 硕士学位论文公司提供;,(,(,(, ,,, ,【、,,,,，、,,,,,、,,,,、,,,,,,;,因子,,,引物 根据,,,, ,,,,核酸数据库中大鼠各因子;,,,序列，用生物软件,,,,,,,(,自行设计,,,引物。以下引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。(见表,,,) 表,,, ,,, ,，,,,,，(,,,,,，,,,,，,,,,,,,, ,,,引物设计 , ,;,;;;,;,;,,;,,,,;;, ,,,, ,, ,,,,,,,,, , ,,,,,,,;,;;,;;;,,,,, , ;,,,,;,,,,,,,,,,,,,; ,, ,,叻, ,, ,,,,,, , ,,,,,,,,,,,;;,,,,,,, , ;;; ,;,,;,;,,;,,,;,,, ,,,,, ,, ,,,,, 捌,,,,,,, , ;,,;,,,,;,,,;,,,,,;, , ,;,,,,,,,,,,,,,,;,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,一,,,,,, , ;,;;,,,,,;,,,,,,,,,, , ,,,,,,,,;,,;,,,,,;,, ,,,,,,, , ,, ,,,,, ,,,,,,,,, , ;;;,,,,;;;;,,,,,,,,, , ,;,;;,,;,,;;,,,,,;,,, ,,,,,, ,, ,,,,, ,, ,,,,,, , ,,,,,,坚～～～竺～～～～～～～ 注:,,,,,为看家基因,(,(,实验仪器 表,,,主要试验仪器及其生产厂家 主要仪器 生产厂家 ,,,,,,,,，专业图像分析系统 美国 ,,,,,,,,, ,,,仪 德国 ,,,,,,,,型透射电子显微镜 日本电子公司 ,,,一,,,光学显微镜 上海光学仪器人厂 , 虎纹毒素一，对全脑缺血再灌人鼠海马,,,凋亡通路的影响 ,,,,,,,,,冷冻台式高速离心机 德国 ,,,, ,,,一,,型离心机 上海安亭科学仪器 —,，弛生物组织冷厂 瑚,,,,繁旋转切片机 德国,，;,删公司 ?，『,, 冻包埋机 湖北孝感弧光医,,电子技术研究所 ,,,,,,型烘片机 上海,,,;,器材有限公司 ,,,,,,,,,一,台式电热恒温干燥箱 上海跃进医疗器械厂 】【,,一,旋涡混合器 国立常州试验设备研究所 ,,,—,,,,型稳压稳流电泳仪 北京人,仪器厂 ,,,,,,,剞可见分光光度计 尤尼柯(上海)仪器有限公司 ,,,,,,,型电子大平 日本岛沣公司 ,删?,,,?,,,型三,，电热恒温水浴箱 天津莱斯特仪器有限公司 ,,,,,,型电热恒温水浴锅 上海精宏实验设备有限公司 ,,,; ,,,帮电动匀浆机 美国,,,,,,,,,,,,公司 ,,,,弛制冰机 美国,,,,,公司 ,,?，管 ,, ,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,美国 ,,—,快速混匀器 江苏中人仪器厂,(,动物分组与处理 实验动物依据不同的处理方法随机分为,组，每组,,只，其中,只用于观察海马,,,区锥体细胞,,,,,染色形态学变化、,,,凋亡通路相关因子蛋白表达水平的检测;另外,只用于观察海马锥体细.