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细菌真菌放线菌培养基配方.doc

细菌真菌放线菌培养基配方

zhang远旺
2017-09-05 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《细菌真菌放线菌培养基配方doc》,可适用于职业岗位领域

。细菌培养基:肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的一(培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。肉膏蛋白胨培养基药品比例:牛肉膏g蛋白胨gNaclg琼脂,g水mLPH,实验器材:牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、molLNaOH、lmolLHCl、KNO、NaCl、KHPOHO、MgSOHO、FeSOHO、mL无菌水管酚液mL无菌水(带玻璃珠)瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台配置方法()称药品:按实际用量计算后按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮故称量时要迅速。()加热溶解:在烧杯中加入少于所需要的水量然后放在石棉网上小火加热并用玻棒搅拌待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基则将称好的琼脂放入己溶解的药品中再加热融化此过程中需不断搅拌以防琼脂糊底或溢出最后补足所失的水分。()调pH:检测培养基的pH若pH偏酸可滴加lmolLNaOH边加边搅拌并随时用pH试纸检测直至达到所需pH范围。若偏碱则用lmolLHCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不要调过头以免回调而影响培养基内各离子的浓度。)过滤:液体培养基可用滤纸过滤固体培养基可用层纱(布趁热过滤以利培养的观察。但是供一般使用的培养基这步可省略。()分装:按实验要求可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量:固体培养基约为试管高度的l灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的为宜灭菌后垂直待凝。()加棉塞:试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要合适四周紧贴管壁不留缝隙才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约塞入试管口或瓶口内以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气则可用层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。()包扎:加塞后将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中则应以支或支在一起再于棉塞外包一层牛皮纸用绳扎好。然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。()灭菌:将上述培养基于湿热灭菌min。如因特殊情况不能及时灭菌则应故人冰箱内暂存。()摆斜面:灭菌后如制斜面则需趁热将试管口端搁在一根长木条上并调整斜度便斜面的长度不超过试管总长的。()无菌检查:将灭菌的培养基放入温箱中培养,h无菌生长即可使用或贮存于冰箱或清洁的橱内备用。二放线菌培养基:高氏合成一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基,培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源KNO作为氮源KHP、MgSO和FeS作为无机盐等高氏合成一号培养基药品比例:可溶性淀粉gNaCI(gKNOgKHPO(HO(gMgSO(HO(gFeSO(HO(g琼脂,g水mlpH,实验器材:试管锥形瓶烧杯量筒玻璃棒培养基分装器天平高压蒸汽灭菌器PH试纸棉花牛皮纸麻绳纱布配制方法:()、称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉放入小烧杯中并用少量冷水将淀粉调成糊状再加入少于所需水量的沸水中继续加热使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分并依次溶化对微量成分FeSO(HO可先配成高浓度的贮备液按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后补充水分到所需的总体积。配制固体培养基时将称好的琼脂放入已溶的试剂中在加热融化最后补充所损失的水分。()、调pH用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸用滴管向培养基中加入molLNaOH,边滴边搅拌并随时用pH试纸测其pH,直至pH达。反之用molLHCI进行调节。()、分装和加塞将配制的培养基分装入试管内在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。()、包扎加塞后将全部试管用麻绳捆好再在棉塞外包一层牛皮纸其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。()、灭菌将上述培养基以C,min,MPa高压蒸汽灭菌。()、搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至C左右将试管口端搁在玻璃棒上。斜面的斜度要适当使斜面的长度约为管长。()、无菌检查将灭菌培养基放入C的培养箱中培养,h以检查灭菌是否彻底。三(真菌培养基:马铃薯糖琼脂培养基(马丁氏培养基)马铃薯糖琼脂培养基药品比例KHPOgMgSOHOg蛋白胨g葡萄糖lg琼脂,g水mL自然pH此培养液ml加孟加拉红水溶液(ml。临用时每ml培养基中加链霉素液(ml。(孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂对真菌无抑制作用因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长从而达到分离真菌的目的)实验器材KHPOMgSO•HO蛋白胨葡萄糖琼脂孟加拉红链霉素试管三角烧瓶量筒玻棒培养基分装器扭力天平牛角匙高压蒸汽灭菌锅配制方法()称量和溶解:先计算后称量按用量称取各成分并将其溶解在少于所需的水中。待各成分完全溶解后补充水分到所需体积。再将孟加拉红配成的水溶液在mL培养液中加入以上孟加拉红溶液mL混匀后加入琼脂加热融化方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。()分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白膝培养基配制。()链霉素的加入:链霉素受热容易分解所以临用时将培养基融化后待温度降至左右时才能加入。可先将链霉素配成的溶液(配好的链霉素溶液保存于)在mL培养基中加链霉素mL使每毫升培养基中合链霉素μg。四(灭菌采用高压蒸气灭菌法进行灭菌步骤如下:(首先将内层锅取出再向外层锅内加入适量的水使水面与三角搁架相平为宜。切勿忘记加水同时水量不可过少以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。(放回内层锅并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。(加盖并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓使螺栓松紧一致勿使漏气。(用电炉或煤气加热并同时打开排气阀使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后关上排气阀让锅内的温度随蒸气压力增加到逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时控制热源维持压力至所需时间。本实验用Mpamin灭菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必须完全排尽后才能关上排气阀维持所需压力。(灭菌所需时间到后切断电源或关闭煤气让灭菌锅内温度自然下降当压力表的压力降至“”时打开排气阀旋松螺栓打开盖子取出灭菌物品。压力一定要降到“”时才能打开排气阀开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口造成棉塞沾染培养基而发生污染甚至灼伤操作者。(将取出的灭菌培养基需摆斜面的则摆成斜面然后放入温箱培养h经检查若无杂菌生长即可待用。五(土壤微生物的分离(取土壤:取表层以下,cm处的土样放入无菌的袋中备用或放在冰箱中暂存。(制备稀释液(要无菌操作)()制备土壤悬液:称土样g迅速倒入带玻璃珠的mL无菌水瓶中(玻璃珠用量以充满瓶底力最好)振荡,min使土样充分打散即成为的土壤悬液。()稀释:用无菌移液管吸的土壤悬液mL放入mL无菌水中即为稀释液如此重复可依次制成,的稀释液。注意:操作时管尖不能接触液面每一个稀释度换用一支移液管每次吸入土液后要将移液管插入液面吹吸次每次吸上的液面要高于前一次以减少稀释中的误差。六(混菌法测定菌落数的方法()细菌:取、两管稀释液各mL分别接人相应标号的平皿中每个稀释度接两个平皿。然后取冷却至的牛肉膏琼脂mm为宜)培养基分别倒入以上培养皿中(装量以铺满皿底高,迅速轻轻摇动平皿使菌液与培养基充分混匀但不沾湿皿的边缘待琼脂凝固即成细菌平板。倒平板时要注意无菌操作。()放线菌:取、两管稀释液在每管中加入酚液,滴摇匀静置片刻然后分别从两管中吸出mL加入相应标号的平皿中选用高氏号培养基用与细菌相同的方法倒入平皿中便可制成放线菌平板。()真菌:取、两管稀释各mL分别接入相应标号的平皿中每个稀释度接两个平皿。在融化的马铃薯培养基中每mL加入灭菌的乳酸mL轻轻摇匀然后用与细菌相同的方法倒入平皿中便可制成真菌的平板。(培养:将接种好的细菌、放线菌、真菌平板倒置即皿盖朝下放置于,中恒温培养细菌培养,d放线菌培养,d真菌培养,d。观察生长的菌落用于进一步纯化分离或直接转接斜面。七(一)平板制作及划线分离方法。(倒平板:按无菌操作要求在火焰旁操作。(划线分离:使用接种环从待纯化的菌落或待分离的斜面菌种只沾取少量菌样在相应培养基平板中划线分离划线的方法多样目的是获得单个菌落。(培养:方法同“土壤稀释分离”。(二)斜面接种和穿刺接种(斜面接种()取新鲜固体斜面培养基分别做好标记(写上菌名、接种日期、接种人等)然后用无菌操作方法把待接菌种接入以上新鲜培养基斜面上。()接种的方法是用接种环沾取少量待接菌种然后在新鲜斜面上“之”字形划线方向是从下部开始一直划至上部(图A)。注意划线要轻不可把培养基划破。()接种后恒温培养细菌培养h放线菌、霉菌培养至孢子成熟方可取出保存。(穿刺接种()取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨柱状培养基做好标记(写上菌名)、接种日期接种人等)。()接种的方法是用接种针沾取少量待接菌种然后从柱状培养基的中心穿入其底部(但不要穿透)然后沿原刺入路线抽出接种针注意接种针不要移动。()接种后恒温培养h后观察比较两种菌的生长结果。八、注意事项(称药品用的牛角匙不要混用称完药品应及时盖紧瓶盖。(调pH时要小心操作避免回调。(不同培养基各有配制特点要注意具体操作。(一般土壤中细菌最多放线菌及真菌次之而酵母菌主要见于果园及菜园土壤中故从土壤中分离细菌时要取较高的稀释度否则菌落连成一片不能计数。(在土壤稀释分离操作中每稀释倍最好更换一次移液管使计数准确。(放线菌的培养时间较长故制平板的培养基用量可适当增多。九(实验记录l(记录本实验配制培养基的名称、数量并图解说明其配制过程指明要点。(检查培养基灭菌是否彻底记录无菌检查结果(记录土壤稀释分离结果并计算出每克土壤中的细菌、放线菌和霉菌的数量。计算方法:选择长出菌落数,之间的培养皿进行计数按以下公式:总菌数g=同一稀释度几次重复的菌落平均数×稀释倍数(分别记录平板划线、斜面接种的结果并自我评价。*****************************************************************************小贴士:读书技巧有人问我同样在大学时代你是怎么读了那么多书籍呢,其实这个问题虽然有些惭愧不过我确实有些话要说:有一门学问叫“阅读学”简单明了如名字所说就是教人怎么读书的我也把我自己的一些读书经验加进去都是些非常实用的东西希望这篇文章对大学生们有益吧一(读书速度:如果你读书时眼睛是一个字一个字盯着看那是显然读不下去的只要一小会你的读书欲望就消失得无影无踪。你读书时的速度要快一眼能看一句话甚至一行字乃至所谓的“一目十行”。不用惊讶一目十行似地看书并不意味着没有效率相反看书过慢者才是真正的效率低下者。有个美国人出了本建立阅读学的书叫这种快速浏览“检视阅读”极力称是很有效的读书方法我深深认同。我曾经用了四个小时时间读完陆遥的《平凡的世界》四部事后与一个看了十几天的同学比较我记忆的情节和对书的理解远比另一位同学好而他是所谓非常仔细阅读的那种。当然检视阅读是必须学会练会的技巧但不代表不需要详细阅读。当在读书时遇到特别好的段落或特别必要的段落可以把速度放到最慢反复地读详细地读甚至如果有必要就把它记忆在头脑之中对于其他段落采取检视阅读的手段。这里面还有一个问题在读书中遇到不懂的地方怎么办,答案是你把它略过去不用管它因为这样的地方通常是学科内比较困难的东西对于你一个外行来说不是很必要掌握。当然也存在另一种情况就是你不懂的这个地方很重要这时你只能放慢整体速度对不懂的部分进行详细阅读了。那么有人还会质疑这样读书不是把书糟蹋了吗,其实一本书中有的精华就不错了或者我说你能理解就可以了这约等于。当你快速阅读的时候你脑子中总会留下一些印象那些印象性的东西就是将深刻印在你脑子中的知识。因为只有你感兴趣的东西你的思维才会接受才会理解而这部分东西也常常就是该书籍的精华。不管你读得怎样快你脑子中一直存在的疑问也会在读到某个时候迎刃而解这与速度无关与书中是否有你需要的东西有关。如果有的话你读得再快答案也是跑不掉的这就是关键所在。其实我想大家肯定听过有所谓的快速阅读培训班或培训书籍的事声称分钟能读一本几百页的书。其实这说法部分是真的他教你的方法就是快速检视阅读他的方法是让你把一页书当成图形输入进你脑子中我曾经多次尝试的确有时候可以做到不过需要超常规地注意力很费心神不太实际应用。但这说法部分是假的所谓分钟读完夸大其辞是有意的虚假宣传。但不管怎么样有这么个事在更证实了人的阅读速度是可以很快的只是平时我们想不到。PS:读得慢读得“仔细”很多时候等同于“读不下去”。那么快速读书即使你理解得少又怎么样呢,你说呢,不过量变终将引起质变所以快速阅读习惯的养成是个必须!二(读书顺序:很多同学一明白读书的好处之后就拿过来大部头的书开始读结果没过一会就读不下去了。这很正常如果每个人都能一下子看下去就都成了超人了这种方法显然不智。那么究竟该如何读书呢,这需要一种策略简单说就是选好顺序。一般来说读某一学科书时最好先看这一学科的发展史了解历史上这个学科是什么样子的。这可是大有好处的因为每个学科的发展都是从简单到复杂从谬误到真理从一个流派到众多流派而这个学科的学科史恰恰表现的就是这些。而读史是很轻松的在舒畅的氛围中读完学科的发展史就基本上对学科有了理性的认识了。这时根据你的兴趣所在或逻辑顺序你就可以进入到这个学科中了。读完学科史之后就要选取理论书籍了作为一个该学科的初学者要选取该学科初级理论书籍很多时候你有这个初级水平就可以了除非你想深入。现在新出的书有很多很人性化的他在书中穿插了很多故事一边讲故事一边讲理论读者很容易接受(本书就想达到这个目的)而且这些讲的理论都是实用性很高的东西值得关注。另外你在选书时要看清“„„入门”“教你„„”“从零学起”字样你都可以选看因为这些东西都适合你入门使用。如果你入了门对这个科目有了浓厚兴趣就要进入深入一点的阅读了。这时候你可以按着标准教程一步一步学习。不过这里我想提醒大家的书除了标准教程值得看外其他各流派的书也值得你看这可以有效丰富你的思维。这里我需要特别指出的是:除非你想特别深入学习该学科否则关于该学科大家名家写的书就不需要看了。这些人写的书非常难懂不适合初级层次的读者阅读。如果很必要看一点原著那你不妨找一本关于原著的解析书籍或其他人做注释的书籍。在哲学书籍阅读时尤其如此我曾读尼采的“查拉图斯特拉如是说”连续几天读不懂其中一段话的意思疑为天书后来读后人的解析对尼采的思想才有了充分的认识可是还读不懂他的书读懂他们写的书的任务还是交给专业人士吧。三(读书的其他方面同时拥有三本书两本比较枯燥的一本特别感兴趣的轮换读书有必要在大型图书馆办借阅证能找到你想找的书并把握时代潮流给自己读书创造最良好的环境比如适当的灯光或一杯咖啡当你读了一个学科书后与这个专业的专业人士进行沟通交流如果你上的是你根本不愿上或对你毫无意义的课不如用这时间读书读书遵循实用主义原则虽然有兴趣或动力等但读书还会是很枯燥的要有良好的耐心不要急功近利想要读到什么就应用什么。要耐心等候读书在你内心内化的过程然后等待哪一天才用得上。各个学科的书都值得读不过如果你的兴趣不够广泛就读你兴趣之内的书。把你喜欢的那类书都读读比如说同学科内的各种思想各个流派各个年代很有益处。理论联系实际。

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