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饲料中阿美拉霉素的含量检测研究.doc

饲料中阿美拉霉素的含量检测研究

liang中峰
2017-11-14 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《饲料中阿美拉霉素的含量检测研究doc》,可适用于综合领域

饲料中阿美拉霉素的含量检测研究拔术《饲斟工业》年帮鞭朋饲料中阿美拉霉素的含量检测研究李政李燕陶兴无余凤云摘要阿美拉霉素是一种饲用抗生素添加剂,为近几年国内研究的热点文章提出用薄层,紫外分光光度法检测阿美拉霉素的含量,该法以二氯甲烷一甲醇(:)作为展开剂,在HF硅胶板上点样展层后,刮取有效斑点,以甲醇溶出,置紫外nnl处测定吸光度,与标准曲线对照,求出其含量,工作曲线在O,gml范围内线性关系良好,R=O,平均回收率在该方法操作较简便,快速,准确,尤其适合应用于目前阿美拉霉素高产菌大规模筛选时发酵液含量的测定关键词薄层一紫外分光光度法阿美拉霉素分析中图分类号Sl阿美拉霉素又称卑霉素,肥拉霉素它是由绿色对照品(美国礼来公司提供)产色链霉菌Tfi(StreptomycesviridochrmgenesTii)发酵产生的正糖霉素族(orthosomycin)寡糖类多组分的抗生素难溶于水,吡啶,乙酸,易溶于丙酮,二氯甲烷等有机溶剂其主要应用于畜牧业,作为饲料添加剂使用,能显着提高猪,肉鸡等动物的平均日增重和饲料报酬,市场应用前景广阔目前国内研究多处于菌种选育阶段,未进行大规模生产在菌种选育过程中,好的筛选方法至关重要,而菌种发酵液抗生素产量的测定更是重中之重目前国内所报道的阿美拉霉素的含量检测方法主要有高效液相法翻和生物监测法I】,但高效液相法成本较高,应用于菌种大规模筛选时很不划算,而生物监测法周期长,操作繁琐,受温度,湿度及操作人员等因素的影响,往往出现较大的误差本实验室根据阿美拉霉素在nm处有较大吸收的特点,建立了以薄层一紫外分光光度计检测阿美拉霉素含量的方法,该法较为简单,快捷,准确,成本低,尤其适合于阿美拉霉素菌种的大量筛选及无高效液相条件下阿美拉霉素相关产品的含量检测实验仪器及试剂uvvis型紫外分光光度计,eppendorfceiltrifugeR台式高速冷冻离心机,紫外分析仪,李政,武汉工业学院生物与制药工程学院,,武汉市中环西路特号生化实验楼实验室李燕,陶兴无(通讯作者),余凤云,单位及通讯地址同第一作者收稿日期:微量移液器,HF硅胶板,展层缸,甲醇,二氯甲烷实验步骤及结果对照品溶液的配置精密称取干燥恒重的阿美拉霉素对照品mg置于ml的容量瓶中,用甲醇溶解并稀释到刻度,制成mgml的对照品溶液,储存备用供试品溶液的制备阿美拉霉素是一种亲脂性寡糖类物质,在水中的溶解度极低,在发酵液中绝大部分存在于菌体的细胞周质空间因此本实验室将发酵液离心后直接去上清液,条件下将菌体干燥至恒重取菌体粉末g置于ml的离心管中,加入ml二氯甲烷振摇提取rain,离心取上清液储存备用阿美拉霉素波长的选择精密吸取阿美拉霉素对照品溶液ml,以甲醇为稀释液稀释到gml,以甲醇为空白对照,在uvvis型紫外分光光度计上扫描吸收光谱图,扫描范围为,nm,得知阿美拉霉素在nm和nm处有吸收峰,nm处吸收峰最大,则选择nm为测定波长,见图标准曲线的绘制以mgml的阿美拉霉素对照品溶液为母液,精确配置浓度为,,,,,~gml的对照品梯度溶液以甲醇为空白溶液,置于紫外分光光度计下,在Bin处检测吸光度,以浓度(x)为横坐标,以吸光度(v)为纵坐标,绘制标准曲线结果表明,阿美拉霉素在,gml范围内线性关系良好,见图李政等:饲料中阿美拉霉素的含量检测研究检测OO图阿美拉霉素对照品波谱扫描图浓度(Ixgm)图阿美拉霉素对照品曲线阿美拉霉素提取液样品的薄层层析及含量测定吸取阿美拉霉素供试品与对照品各,同时在一块HF硅胶板上点样,以二氯甲烷:甲醇(:)为展开剂展开,Rf值约为将硅胶板吹干后,在紫外分析仪下观察并画出有效斑点范围用钢匙刮取上述斑点于容量瓶中,加ml的甲醇超声洗脱rain,过滤,滤液于m的容量瓶中,用甲醇定容用标准曲线法测定吸光度并计算含量重复性实验精密吸取供试品溶液l点样于薄层板上,按的方法于nm波长条件下连续测定次吸光度,计算RSD值得,结果表明本方法重复性良好实验结果见表稳定性实验精密吸取供试品溶液l点样于薄层板上,按节的方法于nm波长条件下于,,,,,,h测定吸光度,计算RSD值得说明样品在h内吸光度稳定实验结果见表表重复性实验结果加样回收率实验在同一块硅胶板下端点样,第个点点上已知阿美拉霉素含量的发酵液供试品l,然后在第个点点上已知浓度的对照液OI,第,,个点先点洙李政等:饲料中阿美拉霉素的含量检测研究上l的已知阿美拉霉素含量的发酵液样品,再分别点上O,,已知浓度的对照品,展层后按样品测定法测定各样品的吸光度,重复测次,然后换算成含量,计算回收率回收率=混合液的含量f混合液含量已知发酵液样品含量)结果表明本方法回收率良好实验结果见表表加样回收实验结果结果与讨论本文首次提出用薄层一紫外分光光度法检测阿美拉霉素含量的方法适合于在实验室无高效液相条件下对阿美拉霉素发酵液及其样品的含量分析检测鉴于目前国内阿美拉霉素菌种的产量还不高,大多数实验室还停留在高产菌株的筛选阶段,通过高效液相方法大规模的检测各个菌种的发酵产量,成本高,设备复杂,检测耗时长本方法可以简便,快捷,相对准确地测定菌种发酵产量,且重复性,稳定性,回收率良好,尤其适合应用于阿美拉霉素高产菌的大规模筛选本方法容易受薄层厚度,均匀程度,点样量的准确性等因素影响,因此操作过程中要严格控制条件,方可保证较高的精确度参考文献WeitnauerG,MtihlenwegA,TrefzerA,etaBiosynthesisoftheorthosomycinantibioticavilamycinAdeductionsfromthemolecularanalysisoftheavibiosyntheticgeneclusterofStreptomycesvdochrf】mogenesTfiandproductionofnewantibioticsJChemBio,,():张秀英阿维拉霉素预混剂的含量测定JJ中国兽药杂志,,f:l一靳亮,童应凯,王泽立,等卑霉素高产茵株的选育J】中国抗生素杂志,():国家药典委员会中华人民共和国药典二部M年版附录(编辑:高雁,snowyantomcom)Ill|||I簿善磐葶露鬻:锤镯瘕熹年《饲料工业》推出英文版,作为行业第一本英文版杂志,二年来已出版了期,极大的满足了行业企业走向国际化的需求,让外国的读者更多地了解中国的一些行业资讯,发展动态,政策法规对行业发展的影响,为企业搭建与国际问交流的平台,推动中国乃至全球饲料行业的发展为此,《饲料工业》向业内征集优秀的英文稿件,内容涉及人物专访,名企展示,行业年度报告,工厂管理,企业介绍,产品质量展示,学术专栏,政策分析以及企业国际合作等栏目,同时设置版块部分,介绍国内外的行业信息,资讯和新产品的展示通过英文媒体平台把国内最全面的技术信息和研究成果展示给读者,使中国的饲料工业逐步走向世界,加强国内外饲料行业,企业间的交流与合作,真诚希望您踊跃投稿,积极参与让《饲料工业》(英文版)与您一同成长’发藕eSlgycom旃~寸

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